钠钙交换体基因稳定转染及药物筛选细胞模型的建立

摘要

目的 构建三种不同亚型的CHO-NCX稳定转染细胞株，以便筛选可能的钠钙交换体（NCX）调节剂。方法 采用脂质体法将NCX目的基因稳定导入CHO细胞中，检测稳定转染细胞株中NCX的蛋白表达和电流大小，并观察温度和NCX抑制剂KB-R7943对电流的影响。结果 Western blot结果显示与CHO-pcDNA3.1空白细胞相比，CHO-NCX稳定转染细胞株中NCX蛋白的表达量显著升高；电生理结果提示CHO-NCX稳定转染细胞株中NCX 电流远大于CHO-pcDNA3.1空白细胞；温度从22℃升高到35℃时，NCX 电流显著增大；NCX 抑制剂KB-R7943对INCX具有显著抑制作用。结论 本试验成功的建立了特异性表达NCX1.1，NCX1.4，NCX1.5 三种亚型的细胞模型，为脑缺血等疾病的研究提供了良好的药物筛选平台。