T-bet基因修饰的树突细胞对哮喘模型小鼠Th2型免疫反应的阻抑和逆转作用

摘要

目前公认支气管哮喘(简称哮喘)的本质是由于存在Th1/Th2免疫反应失衡导致以Th2反应为主的气道慢性炎症。在抗原递呈过程中树突细胞(Dendritic cells，DCs)和T细胞所处的细胞因子微环境是决定T细胞Th1/Th2分化方向的关键因素，在此环镜中IL-12与IFN-γ使初始辅助性T细胞向Th1极化。如能提高抗原递呈过程中DCs和T细胞所处细胞因子微环境中的IFN-γ，可能会逆转Th2免疫反应，进而阻抑和逆转哮喘气道炎症。T-bet基因是IFN-γ基因特异性转录因子，可以特异性上调IFN-γ的表达。我们通过以T-bet基因修饰树突细胞，提高抗原递呈过程中DCs的IFN-γ表达水平，逆转哮喘Th2反应，从而阻抑和逆转哮喘气道炎症的发生和发展，试图探讨在抗原递呈水平干预哮喘Th1／Th2分化的哮喘治疗策略的可行性。本研究以RT-PCR方法获得小鼠T-bet基因，以基因工程方法构建了小鼠T-bet重组腺病毒载体，以293A细胞包装获得了T-bet重组腺病毒。同时，以重组细胞因子mGM-CSF、mIL-4从小鼠骨髓单个核细胞诱导培养获得了小鼠树突细胞。然后以T-bet重组腺病毒转染小鼠树突细胞获得了T-bet基因修饰的树突细胞。最后，通过将T-bet基因修饰的树突细胞经静脉注射注入OVA致敏的小鼠体内，以ELISA检测小鼠血浆IFN-γ，和IL-4表达水平分别代表体内Th1和Th2反应，以流式细胞术检测小鼠外周血Th1／Th2细胞亚群。结果本研究成功克隆获得了小鼠T-bet基因并构建了小鼠T-bet基因腺病毒载体，证实腺病毒载体介导的T-bet基因在DCs中异位表达可以提高DCs的IFN-γ表达水平;T-bet基因修饰的DCs通过调节Th1/Th2平衡，降低了哮喘模型小鼠Th2型免疫反应。提示在抗原递呈过程中DCs和T细胞所处细胞因子微环境中IFN-γ增加有利于Th1反应，并利于消除哮喘的气道炎症;通过在抗原递呈水平干预哮喘T细胞的Th1／Th2分化以治疗哮喘的策略是可行的，以T-bet基因修饰的树突细胞为基础的哮喘治疗值得进一步深入研究。