小鼠胚胎干细胞饲养层的制备

摘要

目的: 探讨建立有效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层，用于胚胎干细胞的培养。方法:取孕10.5～18.5天的昆明小鼠胚胎，用于分离原代小鼠胚胎成纤维细胞，在体外培养体系中，观察细胞在增殖，传代，冻存及复苏等方面的条件；取购自American Type Culture Collection(ATCC)小鼠胚胎成纤维细胞系制备饲养层，比较两种细胞用于制作饲养层在胚胎干细胞培养方面的优缺点。结果:12.5～14.5天的胎鼠最适合于制备饲养层。在37℃，0.25%胰酶-0.02%EDTA的混合消化液消化时间最好为3分钟,原代细胞平均培养4天即可传代，丝裂霉素-C抑制成纤维细胞增殖的合适浓度为10～20μg/ml。原代小鼠胚胎成纤维细胞较小鼠胚胎成纤维细胞系更适合于制备饲养层。结论:两种细胞均可用于制备饲养层。