奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

摘要

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA，应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上，测序结果表明，扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列，与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100％。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上，并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在，表达量约占细菌总蛋白的40％。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化，并利用VSV—MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL，7.5×104U/mL。结果表明重组奶牛β-干扰素特异性好，而且抗病毒活性比较稳定。本研究为研制和开发重组奶牛β-干扰素类生物制品研发奠定了基础。