猪组织中卡那霉素残留胶体金免疫层析、ELISA及HPLC检测方法研究

摘要

卡那霉素(KAN)为氨基糖苷类抗生素的一种，主要用于治疗猪呼吸道、胃肠道以及泌尿道感染.由于KAN具有耳毒性和肾毒性，其在动物性产品中的残留问题日益引起人们的关注，因此研究和制定出一套动物源性食品中KAN的残留检测方法对完善我国的食品安全监测体系具有重要意义。本研究首先制备了抗KAN的单克隆抗体，其半数抑制浓度(IC50)为0.83 ng/mL，同时采用分子模型技术对KAN抗体的交叉反应进行了解释，确定该单抗的识别位点为KAN的C环.利用制备的单克隆抗体，首次建立了可同时检测猪组织中KAN和妥布霉素(TOB)残留的胶体金免疫层析和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。胶体金免疫层析法对肌肉、肝脏和肾脏组织中KAN和TOB总量的检测限分别为50、50和100μg/kg，检测过程可在10 min内完成，检测结果用肉眼即可辨别，因此可用于样品的现场快速筛选.同时，本研究采用方阵法系统研究了pH值和抗体用量对制备的金标抗体灵敏度的影响.结果表明，相对低的pH值(pH 7.0)和较少的抗体用量(5 μg/mL)有助于提高金标抗体的灵敏度.本研究认为该影响主要是由于金标抗体表观亲和力的变化引起.在25～200μg/kg添加浓度范围内，ELISA法测定猪组织中KAN和TOB的回收率为52.6％～96.7%，变异系数为3.6%～15.3％，检测过程可在1 h内完成，因此可用于实验室大量样品的筛选和半定量检测.另外，本研究还首次建立了猪组织中KAN的液相色谱(HPLC)检测方法，在0.1～5 mg/kg浓度范围内，KAN的添加回收率为80.7%～91.3%，变异系数为5.2％～rn 12.1%，满足常规定量分析的要求.最后采用建立的KAN胶体金免疫层析、ELISA和HPLC方法对实际样品进行了检测，结果表明，三者的测定结果基本相符，ELISA和HPLC方法的相关性较高(R2=0.999).因此，本研究建立的三种方法符合残留筛选或常规定量检测方法的要求，可选择性用于猪组织中KAN的残留监控.