鸡组织中常山酮残留的ELISA检测方法和HPLC检测方法研究

摘要

常山酮(Halofuginone,Hal)是一种应用广泛的抗球虫药,以3mg/kg的浓度添加到饲料中用于预防和治疗家禽的球虫病.该研究合成了常山酮免疫原,制备出针对常山酮的特异性多克隆抗体,建立了鸡组织中常山酮残留检测的ELISA方法和HPLC方法,并研究了鸡组织中常山酮的残留消除.该研究建立了鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留检测的ELISA方法.用三甲基硅烷咪唑(TMSI)将常山酮结构中的羟基选择性保护,在温和的条件下使常山酮结构中的氨基琥珀酰化.最后在酸性条件下水解保护基团,得到半抗原常山酮琥珀酸衍生物.以NHS活性酯法制备了常山酮免疫原和包被原,偶联比率分别为9:1和5:1.ELISA方法的线性检测范围为0.1ng/ml-100ng/ml,以50ng/g、100ng/g和500ng/g的浓度水平添加时,鸡肝脏组织的平均添加回收率范围为74.2﹪-96.8﹪,日内变异系数范围为3.8﹪-12.8﹪,日间变异系数范围为8.8﹪-15.9﹪;鸡肌肉组织的平均添加回收率范围为74.3﹪-90.0﹪,日内变异系数为2.6﹪-16.6﹪,日间变异系数在5.4﹪-6.8﹪.该方法在鸡肝组织和肌肉组织中的检测限分别为23ng/g和15ng/g.该研究建立了鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留检测的HPLC方法.用胰蛋白酶水解组织样品,乙酸乙酯提取,0.125mol/L乙酸铵缓冲液反提,Oasi<'(R)>HLB柱净化,HPLC测定.以50ng/g、100 ng/g和500 ng/g浓度水平添加时,鸡肝脏组织的平均添加回收率范围在81.3﹪-93.3﹪之间,日内变异系数范围在1.5﹪-10.9﹪之间,日间变异系数范围在2.7﹪-6.1﹪之间;鸡肌肉组织的平均添加回收率范围在88.4﹪-103.4﹪之间,日内变异系数范围在1.4﹪-11.6﹪之间,日间变异系数范围在4.6﹪-12.6﹪之间.该方法在鸡肝脏和肌肉组织中的检测限分别为19ng/g和23ng/g.该研究对ELISA方法和HPLC方法进行了比较.ELISA方法和HPLC方法测定鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留有良好的相关性.在添加回收试验中,两种方法在鸡肝脏和肌肉组织中测得常山酮的实测值的相关系数分别为0.9760和0.9344.以3mg/g剂量的氢溴酸常山酮混饲给予AA肉鸡10天,停药第0天时,ELISA方法测得鸡肝脏组织中常山酮的残留量为105.2ng/g,HPLC方法测得鸡肝脏组织中常山酮的残留量为84.6ng/g;停药第3天后,常山酮的残留量均低于两种方法的检测限.在停药第0天时,鸡肌肉组织中常山酮的残留量就低于检测限.用ELISA方法和HPLC方法检测鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留的结果基本相符.

目录

文摘

英文文摘

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第一章 文献综述

第二章 抗原的合成及抗体的制备

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第三章 鸡组织中常山酮残留的ELISA检测方法研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第四章 鸡组织中常山酮残留的HPLC检测方法研究

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第五章 鸡组织中常山酮残留的ELISA和HPLC检测方法比较研究及残留消除

1材料与方法

2结果与分析

3讨论

第六章结论

参考文献

致 谢