摘要：经DNAstar分析,据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)全基因序列设计合成gB基因的特异性引物,以构建的pGEM-T-gB为模板,PCR扩增IBRV gB蛋白192位到266位氨基酸的基因序列.将目的片断克隆,酶切鉴定并测序确定序列正确后,定向插入pET32a表达载体中,转化BL21表达菌.SDS-PAGE电泳分析表明,诱导表达产物以包涵体和可溶形式存在,大小约为29.2 ku,与预测值符合.亲和纯化后重组蛋白浓度为0.2 mg/mL,纯度为79.2％.间接ELISA检测证明,表达蛋白具有抗原性.以该蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.确定的抗原包被浓度为10ug/mL,血清的最佳稀释度为1∶40,阳性标准定为S/P＞0.395.交叉试验表明对其它疾病阳性血清不发生交叉反应.与中和试验相比较,特异性,敏感性和符合率分别为83.3％,90.9％和88.9％;与进口法国IBRV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性,敏感性和符合率分别为92％、92.7％和92.5％.上述结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性,显示了良好的应用前景.
