Ala和Trp替换对猪乳铁蛋白肽活性影响的研究

摘要

近年来，为了获得更好的抗菌肽产品替代抗生素在医学、农业等领域的应用，抗菌肽结构与功能关系的研究成为学术界关注的热点。本研究采用化学合成的方法获得了猪源乳铁蛋白肽及其改良肽，旨在更好的研究该抗菌肽一级结构与抗菌活性的关系，进而获得抗菌活性更高的改良肽。四种抗菌肽的最小抑菌浓度及溶血性分析结果表明，猪乳铁蛋白肽LP20及其改良肽LF2A、LF-1和L,F-3对大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌均具有抗菌活性；LP20对五种试验菌株的MIC值为64~128μg/mL，LF-1和LF．3的MIC值提高了2-4倍；将LP20第2、17位Cys替换为Ala后的改良肽LF2A对五种试验菌株的抗菌活性没有变化，但溶血性降低；用Trp替换LP20第9、18位Ile后的改良肽LF-1的抗菌活性有所提高，但是在4、32、64、128和256μg/mL浓度时的溶血性也显著提高(p<0.05)。采用WST-1和LDH法检测四种抗菌肽对人外周血单核细胞(pefipheml blood mononuclear cell，PBMC)的增值作用及细胞毒性结果表明，LF2A，LF-1和LF-3对PBMC的增值作用具有剂量依赖性；与LP20相比，25．200 μg/ml的LF-1显著提高了对PBMC的增值作用(p<0．05)，但在400g/mL浓度下却抑制了其对PBMC的增值作用(p<0．05)；200g/mL和400g/mLLF-1使得PBMC的LDH释放百分率显著提高(p<0．05)，但在25-50g/mL浓度下对LDH释放具有降低作用(p<0.05)。对细胞膜去极化作用研究结果表明，4μg/mL的改良肽LF-3明显增强了大肠杆菌的细胞膜通透性，而抗菌活性较低的LP20和LF2A对细菌细胞膜通透性的影响低于LF-3。