尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡与尘肺发病关系的研究

摘要

目的：研究尘肺患者肺泡巨噬细胞(AM)的凋亡情况，以及凋亡水平与尘肺发病各种因素之间的关系，以便为尘肺病的早期防治提供依据。rn 方法：以4例男性观察对象、40例尘肺患者以及13例男性健康志愿者为研究对象，收集其大容量肺灌洗液，分离纯化肺泡巨噬细胞(AM)，取5×106个AM在EMEM培养基中培养24h后，收获细胞，分别用普通光学显微镜、透射电子显微镜、激光共聚焦显微镜、TUNEL法、琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞仪检测巨噬细胞凋亡的情况。分析不同尘肺类型凋亡细胞的形态特征，采用STATA10．0软件分析AM凋亡指数与年龄、接尘工龄、发病工龄、开始接尘年龄、脱尘、开始发病年龄之间的关系。rn 结果：光学显微镜、荧光共聚焦显微镜、透射电镜下均可见正常AM细胞膜及核膜完整，染色质分布均匀，线粒体及内质网正常;凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩、边缘化、染色质分割成块状;内质网与线粒体增多;细胞膜微绒毛消失、起泡、出芽;核膜断裂，细胞核素裂成团块，形成凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳定性检测细胞凋亡发现特征性的梯状DNA电泳条带，电泳条带的间距在200bp左右。流式细胞仪检测发现在正常二倍体峰前出现典型的亚二倍体凋亡峰。凋亡的AMTUNEL，染色阳性，呈棕黄色。但矽肺与煤工尘肺凋亡AM存在形态特征及生化特征的差别。定量分析表明，尘肺患者AMs凋亡指数高于健康志愿者及观察对象;接尘者AMs凋亡程度随纤维化程度加重而升高;煤工尘肺AM凋亡程度高于矽肺;发病工龄30年以上者AM凋亡指数高于30年及以下者;45岁以上发病者AM凋亡指数高于以下者;脱尘的矽肺患者AM凋亡指数下降;普通型矽肺AM凋亡指数高于晚发型矽肺。多因素分析表明，在控制其它因素后，发病工龄及尘肺类型与AM凋亡的联系依然存在。rn 结论：尘肺患者AM的凋亡表现为形态学的改变及生化特征改变，凋亡程度与接尘性质、发病工龄、发病类型有关;脱尘对接尘工人是一种保护措施。