pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

摘要

背景与目的：iNOS与NO-介导的抗肿瘤效应有关.本研究的目的是构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达及初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用.rn 方法：应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的DNA片段,经酶切后定向插入真核细胞表达载体pVAX的多克隆位点中,通过酶切、PCR和测序鉴定pVAX-iNOS载体的构建.将构建成功的pVAX-iNOS质粒转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot的方法检测目的基因的表达;Hoechst33258染色验证pVAX-iNOS在体外对肺癌A549细胞的促凋亡作用;划痕实验检测pVAX-iNOS对肺癌A549细胞迁移能力的影响.rn 结果：酶切、PCR和测序分析均表明真核表达质粒pVAX-iNOS构建成功,iNOS在转染后的A549细胞中表达升高.进一步的实验证明,真核表达质粒pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后具有诱导细胞发生凋亡和抑制细胞迁移的作用.rn 结论：本研究成功构建了pVAX-iNOS真核表达质粒,pVAX-iNOS对A549细胞具有较明显的促凋亡作用和微弱的迁移抑制作用.本研究将可能为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略.