氟达拉滨体外刺激慢性淋巴细胞白血病细胞Puma、Noxa、Bim基因mRNA表达水平的变化及其意义

摘要

目的：采用氟达拉滨活性物质(F-ara-A)体外刺激慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞，探索Puma, Noxa和Bim在p53依赖的凋亡途径中的作用及地位。方法：无菌分离15例CLL患者外周血中的CLL细胞进行体外培养，设立含有3.5μmol/L氟达拉滨的实验组及不含氟达拉滨的对照组，经过48h的培养后收集细胞。应用流式细胞术、SYBR荧光染料法等方法检测凋亡程度、Puma、Noxa, Bim和Bcl-2表达水平等指标。结果:①CLL细胞被分离时凋亡率为7.41% (4.11%-10.71%)，单纯使用培养液培养48 h后自发性凋亡率为31.40% (18.14%-44.66%)，凋亡水平较离体时明显增加(P=0.0002 ) ;经含3.5μmol/L氟达拉滨的培养液培养48 h后，CLL细胞的凋亡率为59.6% (43.72%-75.48% )，显著高于对照组自发性凋亡水平(P=0.002)。结论:氟达拉滨诱导CLL细胞的凋亡有赖于具有正常功能的p53基因，p53缺失和(或)p53突变均可导致p53功能异常，但ATM基因杂合性缺失的CLL细胞仍具有正常的p53功能。氟达拉滨的抗肿瘤作用主要是通过诱导p53基因下游的关键靶基因Puma表达增强实现的，Noxa和Bim在氟达拉滨诱导CLL凋亡的途径中并不起主导作用。