体外温热刺激对脐静脉血管内皮细胞活力、增殖及凋亡影响的实验研究

摘要

目的:观察体外不同温热刺激对脐静脉血管内皮细胞的形态、生长活力及其细胞增殖与凋亡的变化，以及与TGF-β关系。方法：①选取足月剖腹产新生儿脐带, 胰酶消化，脐静脉血管内皮细胞原代培养, 培养第7 天经传代鉴定以及内皮细胞建系。②传代细胞随机分为正常对照组和温度刺激组，正常对照组于37 ℃对血管内皮细胞进行常规培养，温度刺激组行38℃，39℃，40℃， 41℃，42℃，43℃刺激30 min，每日1次，连续9次。应用倒置相差显微镜观察刺激后内皮细胞的形态变化，MTT 法检测细胞生长活力情况。③经上述实验所得适宜温度，把传代细胞随机分为适宜刺激组和正常对照组应用流式细胞仪检测不同温度刺激后内皮细胞增殖与凋亡情况、TGF-β的表达变化。结果：①不同温度组细胞形态、生长活力随着时间变化均有不同，其中所有时间点42℃、43℃刺激均导致细胞形态损伤、细胞活力下降，且与37℃比，差异有显著性和极显著性（P<0.05,0.01）。而40℃、41℃在第7、8d时间细胞活力增强，与正常37℃比差异有显著性（P<0.05）。故初步筛选温度为40℃、41℃，时间为7、8d。②设定正常温度37℃组，筛选出来的适宜温度40℃、41℃刺激7、8d后增殖率下降（P<0.05, P＜0.01）；凋亡率升高与正常温度组有极显著性（P<0.01）。③适宜温度组刺激8天后TGF-β的含量明显下降，与正常温度组37℃组比差异有显著性和极其显著性（P＜0.05，0.001）。结论:（1）经过给予不同的温度刺激，用流式细胞仪观察细胞增殖和凋亡情况，筛选出适宜温度刺激量，刺激温度40℃、41℃时间为7、8d。（2）适宜温度刺激量能够促进凋亡、抑制增殖，且下调TGF-β分泌，为全面认识灸法“活血化瘀”的生物学机制提供新的实验根据，实现从非神经生物学探索性研究的初步认识。