蛋白磷酸化

摘要： 目的运用生物信息学分析方法,分析长链非编码RNA-Hexokinase 2(HK2)在细胞内的调控靶基因及信号通路,并对其进行生物学功能注释,阐述lncRNA-HK2在细胞内的功能作用。方法在miRDB数据库和Starbase3.0数据库中预测与lncRNA-HK2有miRNA-lncRNA互作关系的miRNA,将结果取交集。在Starbase3.0数据库中预测miRNAs靶基因,并进行GO功能注释和Pathway通路富集分析。结果在miRDB数据库预测到50个miRNAs与lncRNA-HK2相作用,Starbase3.0数据库预测到14个miRNAs与之相作用,取2个数据库的交集得到hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-374b-5p 2个miRNAs;GO功能注释显示hsa-miR-374a-5p的靶基因主要调控蛋白磷酸化、肿瘤发生通路、转录调控、DNA损伤反应、脂肪细胞分化及胚胎发育等基因及信号通路;hsa-miR-374b-5p作用的靶基因主要调控基因表达,调控序列特异性DNA结合转录因子的活性、翻译调控、细胞对于胰岛素的反应、细胞粘附及细胞周期等生物学过程,信号通路富集结果主要分布在TNF信号通路、RAS信号通路、人乳头状瘤病毒感染、转录错误调控及多种肿瘤信号通路等方面。结论长链非编码RNA HK2在细胞内的重要的调控作用,具体与蛋白磷酸化、肿瘤发生通路、转录调控、DNA损伤反应、翻译以及细胞周期等多条信号通路密切相关,其主要通过上述作用通路调控生理和病理进程。

摘要： 目的:筛选慢性铝暴露致认知障碍人群,生信分析其血清外泌体miRNAs的差异表达,构建铝致认知障碍miRNA-mRNA调控网络图,预测其靶基因。方法:筛选广西铝矿区周边某村庄符合慢性铝暴露常驻60岁以上人群,根据MMSE评分表和血铝水平分为铝致认知障碍组6例和健康对照组6例;提取并鉴定血清外泌体,进行第二代高通量测序,筛选出差异表达的miRNAs;分别运用TargetScan数据库、miWalk数据库、miRDB数据库预测靶基因并取交集,运用Cytoscape软件构建miRNAs-mRNA调控网络图;对同时受到两个以上miRNAs调控的靶基因进行GO和KEGG功能富集分析。结果:成功提取并鉴定血清外泌体;完成第二代高通量测序,按照|logFC| ≥ 1,P值 < 0.05的条件,共筛选出130个差异表达的miRNAs,其中表达下调118个,上调12个;根据文献检索筛选其中的5个miRNAs为目的miRNA,即:hsa-miR-381-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-135b-5p、hsa-miR-708-3p、hsa-miR-1289;生信分析构建miRNA-mRNA网络调控图中,共有1170个节点、1232条边,显示共有65个靶基因同时受到两个以上miRNAs的调控;对这65个靶基因进行GO和KEGG功能富集后,显示其主要参与调控的生物过程有3个,即:有丝分裂纺锤体形成、蛋白磷酸化及转录负调控、NDA模板形成;细胞成分包括细胞质、轴突起始段、轴突旁节区、神经元投射等9个方面;分子功能包括蛋白质结合、DNA结合、微管结合、蛋白激酶活性、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性等6个方面;KEGG富集到MAPK信号通路。结论:miR-381-3p、miR-370-3p在铝致认知障碍中表达下调,可能通过调控其靶基因FGF7在铝致认知障碍中发挥重要作用,为铝致认知障碍的诊断提供候选靶点。

摘要： cqvip:近日,来自美国国家癌症研究所临床蛋白质组学肿瘤分析联合会(Clinical Proteomic Tumor Analysis Consortium,CPTAC)的研究人员为肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)开发了多组学方法,该方法结合基因组学、表观基因组学、转录组学、蛋白质组学和磷酸化蛋白质组学技术,定义了可能有助于患者分层治疗的分子亚型[CLARK DJ,DHANASEKARAN SM,PETRALIA F,et al.Integrated proteogenomic characterization of clear cell renal cell carcinoma.Cell,2019,179(4):964-983,e31.]。

摘要： 目的:为探究葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)磷酸化水平对红细胞期疟原虫生长发育的影响,构建必要的分子工具.方法:以pcDNATM4/TO/myc-His B为载体,构建在GLUT1第一个胞外区插入2×FLAG标签的重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1.将重组质粒转染到NIH/3T3细胞中,利用Western印迹和流式细胞术分别检测细胞FLAG-GLUT1蛋白总量和细胞表面FLAG-GLUT1的表达水平.结果:酶切鉴定及DNA测序表明正确构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1.通过识别FLAG标签,利用Western印迹能够检测到FLAG-GLUT1在NIH/3T3细胞中的表达,流式细胞术结果显示,转染重组质粒的细胞表面可检测到FLAG-GLUT1的表达,阳性群比例为(21.46±2.375)％,明显高于对照组(0.01±0.00)％,差异有统计学意义(t=9.035,P＜0.01).结论:成功构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1,为研究GLUT1蛋白磷酸化在疟原虫感染红细胞中的作用提供了必要的工具.

摘要： 目的探讨p53野生型及p53缺失型的人结肠癌HCT116细胞在紫外线照射后磷酸化蛋白质组的表达差异及其不同DNA损伤修复通路。方法将紫外线照射30 s后继续培养4 h的人结肠癌细胞系HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-的细胞总蛋白进行磷酸化蛋白质谱检测,对所获得的差异蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析,继而用SRING数据库软件分析DNA损伤修复的蛋白互作网络,最后采用Reactome软件分别绘制HCT116p53+/+和HCT116 p53-/-细胞中DNA损伤修复通路。结果 HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-细胞经紫外线照射前后差异表达的磷酸化蛋白分别为148个和210个,重叠的磷酸化蛋白有57个,其中上调、下调趋势一致的有39个。在p53野生型HCT116细胞中,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在染色质修复与组蛋白修饰、DNA损伤修复上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白主要参与核苷酸切除修复;而在p53表达缺失的情况下,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在m RNA加工、转录调控、细胞黏附上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白,主要参与非末端同源重组修复。结论 p53状态不同的HCT116细胞经紫外线照射后诱导磷酸化的蛋白不同,而且磷酸化蛋白富集通路和DNA损伤修复途径也不相同。

摘要： Objective To observe the effect of NRP-1b1/b2 IgG monoclonal antibody (NRP-1mAb) on the growth of gastric cancer cell BGC-823,and to explore the possible mechanism of the antibody.Methods NRP-1mAb was prepared in laboratory,and the purity of antibody was detected by SDS-PAGE.Gastric cancer BGC-823 cells were cultured by 0,25,100,200,400 μg/ml NRP-1 mAb.The morphological changes of BGC-823 cells were observed by microscope.The proliferation,colony formation and apoptosis of gastric cancer BGC-823 cells were observed by MTT assay,colony forming assay and flow cytometry.The phosphorylation of related signal proteins was detected by Western blotting analysis.Results SDS-PAGE test showed that the purity of NRP-1mAb was above 95％.Microscopy showed apoptotic changes of BGC-823 cells treated by NRP-1mAb.MTT assay showed that NRP-1mAb could inhibit the proliferation of BGC-823 cells in a time and dose dependent manner(P＜0.01).Colony forming assay showed that different doses of NRP-1mAb could inhibit the colony formation of BGC-823 cells in a dose dependent manner(P＜0.01).Flow cytometry showed that different doses of NRP-1mAb could promote the apoptosis of BGC-823 cells mainly at early apoptosis stage.It was found that the level of Akt phosphorylation was decreased after treated by NRP-1mAb,and therc was no significant phosphorylation of ERK,p38 and JNK protein.Conclusion NRP-1mAb can inhibit the growth of gastric cancer cell BGC-823 and promote apoptosis,which may be related to the inhibition of Akt phosphorylation.%目的 观察自主研发的抗NRP-1 b1/b2 IgG单克隆抗体(NRP-1mAb)对胃癌BGC-823细胞生长的影响,并初步探讨可能的作用机制.方法 实验室制备N RP-1 mAb,采用SDS-PAGE检测纯度.采用0、25、100、200、400 μg/ml NRP-1mAb培养胃癌BGC-823细胞,光学显微镜下观察细胞形态学变化;采用MTT法、集落形成实验、流式细胞术观察胃癌细胞BGC-823的增殖、集落形成和凋亡的情况;Western blotting法检测NRP-1mAb作用后Akt、p38、ERK、JNK信号蛋白磷酸化情况.结果 SDS-PAGE检测显示,NRP-1mAb的纯度在95％以上.光学显微镜观察显示,NRP-1mAb作用后,BGC-823细胞形态呈凋亡改变.MTT实验显示,NRP-1mAb抑制BGC-823细胞的增殖作用呈浓度和时间依赖性(P＜0.01).集落形成实验显示,不同浓度NRP-1 mAb均能显著抑制BGC-823细胞的集落形成,其抑制率呈浓度依赖性(P＜0.01).流式细胞术检测显示,不同浓度NRP-1mAb均明显促进BGC-823细胞凋亡,且大部分集中在早期凋亡.Western blotting检测显示,BGC-823细胞的Akt磷酸化受到抑制,ERK、p38、JNK的磷酸化水平无明显变化.结论 NRP-1mAb能抑制胃癌细胞BGC-823的生长、促进凋亡,可能与抑制Akt磷酸化有关.

摘要： 目的:探讨艾灸对抑郁症模型大鼠大脑海马组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响,以阐释艾灸治疗肝郁脾虚型抑郁症的作用机制.方法:选择72只雄性Wistar大鼠,体质量(150±20)g.随机分为正常组、抑郁模型组、艾灸预防组、氟西汀预防组、艾灸治疗组和氟西汀治疗组,每组12只.适应性喂养后,进行抑郁症造模.氟西汀预防组和艾灸预防组从第7天～18天在造模前1h给予预防治疗;氟西汀治疗组和艾灸治疗组在成模后即19天～31天进行治疗.取大鼠海马组织,qPCR方法检测大鼠海马CaMKⅡ基因表达,WB检测大鼠CaMKⅡ及其磷酸化蛋白表达.结果:与正常组相比,模型组CamkⅡ的基因表达、蛋白含量及磷酸化蛋白表达均明显降低;与模型组相比,氟西汀预防组、艾灸预防组、氟西汀治疗组和艾灸治疗组基因表达、蛋白含量及磷酸化蛋白表达均显著升高;艾灸治疗组CamkⅡ基因及蛋白磷酸化水平均明显低于艾灸预防组.结论:艾灸可以特异性增高肝郁脾虚模型大鼠海马CaMKⅡ基因表达,促进CaMKⅡ蛋白磷酸化,在治疗与延缓抑郁症发生发展过程中均起到显著的作用,且基于“治未病”思想指导下的艾灸在抑郁症预防方面具有明显优势.%Objective:To investigate the effect of moxibustion on calmodulin kinase Ⅱ (CaMK Ⅱ) of the calmodulin signaling pathway in the hippocampus of rats with depression,and to explain the mechanism of moxibustion treatment for depression of liver-qi stagnation and spleen-qi deficiency.Methods:72 Wistar rats (male,150 ±20 g) were randomly divided into the blank control group(group A),the depression model group (group B),the moxibustion prevention group (group C),the Fluoxetine prevention group (group D),the moxibustion treatment group(group E) and the Fluoxetine treatment group(group F),with 12 rats in each group.The rats were fed adaptively for one week before modeling,group C and group D were given preventive treatment one hour started from 7th to 18th day;group E and group F were intervened from 19th to 31rd day after modeling.CaMK Ⅱ expression of the hippocampus was detected by qPCR,and the expressions of CaMK Ⅱ and its phosphorylated protein were detected with WB method.Results:Compared to group A,expressions of CaMK Ⅱ and its protein phosphorylation were significantly decreased in group B;they were greatly increased in group C,group D,group E,and group F after intervention;the levels of CaMK Ⅱ and its protein phosphorylation were obviously lower in group E than those in group C.Conclusion:Moxibustion can specifically increase the expression of CaMK Ⅱ of hippocampus in rats with liver-qi stagnation and spleen-qi deficiency,and promote the phosphorylation of CaMK Ⅱ protein,which plays a significant role in the treatment and delaying the development of depression,and preventive treatment of moxibustion has an obvious advantage in the prevention of depression under the guidance of "preventive treatment of disease".

摘要： 目的：布比卡因是长效酰胺类局麻药，本研究旨在观察布比卡因对人肺上皮细胞短路电流的影响，并探讨可能的机制。方法应用尤斯灌流室装置测定 H441单层细胞的短路电流。由总电流减去阿米洛利抑制后的电流算得阿米洛利敏感性电流，以用药前 H441单层细胞的阿米洛利敏感性电流初始值为100％对照。用100μmol·L －1布比卡因处理 H441细胞，在0、15、30、60 min 4个时间点提取蛋白用于Western blot，研究布比卡因对 ERK1／2蛋白磷酸化的影响。结果布比卡因能够剂量依赖性抑制 H441单层细胞的短路电流，此电流可被阿米洛利抑制；Western blot 结果显示，布比卡因能够促进 ERK1／2蛋白磷酸化。结论布比卡因通过抑制人肺上皮细胞阿米洛利敏感性电流而降低肺泡上皮离子转运，其机制可能与其促进 ERK1／2蛋白磷酸化有关。临床上对伴有肺部疾患的病人应用布比卡因时应考虑其可能对肺泡上皮液体清除的影响。%Aim Bupivacaine is a kind of long-acting amide local anesthetics.This paper aims to explore the effects of bupivacaine on the short-circuit currents in human alveolar epithelial monolayers and study the possible mechanisms.Methods Short-circuit currents were recorded by ussing-chamber setup.Amiloride-sensitive currents were defined as the difference be-tween the total current and the amiloride-resistant cur-rent.ERK1 /2 phosphorylation protein levels were ana-lyzed by Western blot at 0,1 5,30 and 60 min after administration of 1 00 μmol·L -1 bupivacaine.Results Bupivacaine could inhibit the short-circuit currents in H441 monolayers dose-dependently,which could be inhibited by amiloride.Western blot analysis showed that bupivacaine increased the level of ERK1 /2 phos-phorylation.Conclusion These data demonstrate that bupivacaine can reduce the alveolar ion transport by in-hibiting the amiloride-sensitive currents,possibly by the enhancement of ERK1 /2 phosphorylation. The effects of alveolar fluid clearance following application of bupivacaine should be considered clinically when the patient is complicated with lung injury.

摘要： 目的：本研究旨在探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷,TSG,)对快速老化小鼠(samp8)痴呆模型海马神经元的Tau蛋白磷酸化的影响,为二苯乙烯苷对快速老化小鼠Tau蛋白影响是否改善学习记忆能力提供有效数据. 方法：通过选用SAMP8小鼠和SAMR1小鼠模型,分别将SAMP8小鼠分为模型对照组(5只),TSG高剂量治疗组(5只),将SAMR1小鼠设为SAMP8小鼠对照组(5只).SAMP8模型组及SAMR1对照组分别以双蒸水连续灌胃,SAMP8治疗组以TSG连续灌胃,统一灌胃50天后进行对照实验研究.通过Morris水迷宫实验进行小鼠认知功能的检查,通过免疫组化观察实验小鼠海马CA1区部位Tau蛋白在[pS396]位点的阳染表达. 结果：1.隐蔽平台实验,水迷宫实验从第2天起,SAMR1对照组的小鼠逃避潜伏期即明显短于SAMP8模型组小鼠,差异具有显著性(P＜0.01),说明同一种系的正常老化SAMR1小鼠学习记忆能力比SAMP8模型小鼠强.TSG治疗组从第3天开始,可以发现逃避潜伏期时间相比较于S模型AMP8组小鼠短,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),说明TSG干预后能改善SAMP8鼠的学习记忆能力.2.空间探索实验,SAMR1对照组的小鼠和TSG治疗组的小鼠游泳轨迹大部分位于原平台象限,并多次在原平台象限相邻的象限寻找平台位置.SAMP8模型组小鼠实验结果以围绕池壁游泳为主,其游泳轨迹呈随机分布于各象限之中.SAMR1对照组和TSG治疗组的小鼠停留原平台象限时间和穿越原平台次数均明显多于SAMP8模型组小鼠,差异具有统计学意义(P＜0.01),说明SAMR1对照组小鼠和TSG治疗组小鼠的记忆能力比SAMP8模型组强,提示TSG能改善samp8小鼠痴呆模型的记忆能力.3.免疫组化分析结果,SAMP8小鼠模型组与SAR1对照组比较,SAMP8小鼠模型组磷酸化Tau蛋白的平均灰度值明显降低,(P＜0.01)差异有统计学意义,说明SAMP8模型组小鼠海马CA1区神经元Tau蛋白磷酸化程度较SAMR1对照组增加.TSG治疗组小鼠与SAMP8模型组小鼠比较,TSG治疗组小鼠海马CA1区磷酸化Tau蛋白的平均灰度值明显升高(P＜0.01)差异有统计学意义,提示SAMP8小鼠脑内Tau蛋白的过度磷酸化,而二苯乙烯苷(TSG)对SAMP8小鼠Tau蛋白磷酸化具有一定的改善作用. 结论：通过对快速老化小鼠进行二苯乙烯苷(TSG)药物干预,可以改善Tau蛋白的磷酸化,并且二苯乙烯苷(TSG)对快速老化小鼠学习记忆功能损害亦有明显的改善作用.

摘要： 目的：探讨睡眠剥夺对小鼠海马tau蛋白磷酸化的影响。方法：将48只雄性昆明小鼠随机分为对照组、睡眠剥夺24h、48h及72h组,采用HE法观察睡眠剥夺小鼠海马形态结构变化,利用免疫组化法观察磷酸化tau蛋白及总tau蛋白表达的变化。结果：睡眠剥夺(SD)组小鼠海马神经细胞损伤明显,细胞排列疏松、细胞核出现固缩呈浓染,无法识别染色质颗粒,出现细胞凋亡。SD 24h、48h及72h组p-tau表达均高于对照组,尤其是SD 72h组表达更明显。无论对照组或是SD组,T-tau表达无明显差异。结论：睡眠剥夺可以引起tau磷酸化增加,此变化与总tau蛋白的量无关,可能与激活p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路有关。

摘要： 目的：多靶点、多途径观察针刺督脉经（穴）对缺血损伤脑组织修复相关信号蛋白磷酸化的变化。rn 方法：40 只SD 健康大鼠随机分为4组，即假手术组、模型组、对照点组、穴位组，10 只/组，6 次治疗后提取缺血脑组织细胞，采用720 磷酸化抗体蛋白芯片技术检测针刺治疗后的脑组织细胞信号蛋白磷酸化的变化，筛选出各组差异性表达的蛋白。rn 结果：与空白组比较，模型组的蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有49 种出现上调，29 种出现下调；与模型组比较，针刺穴位组蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有29 种出现上调， 51 种出现下调，针刺对照组则有35 种出现上调，24 种出现下调；与针刺对照组比较，针刺穴位组的磷酸化水平差异蛋白在蛋白数量、蛋白功能种类与信号转导通路的归属上均明显优于针刺对照组。rn 结论：多靶点、多途径与多条信号转导通路激活是针刺大椎、百会、人中（穴）促缺血性脑损伤修复的重要特征。

摘要： 目的：本试验旨在细胞水平上探究丹参多糖的抗炎作用. 方法：MTT测定丹参多糖对RAW264.7细胞活性的影响,ELISA法测定丹参多糖对RAW264.7分泌TNF-α,IL-6,IL-1β的影响,Griss法测定丹参多糖对RAW264.7分泌NO的影响.RT-PCR测定相应细胞因子的mRNA的表达,Western Bolt测定丹参多糖对RAW264.7中NF-κB通路表达的影响. 结果：LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7能显著性升高TNF-α,IL-6,IL-1β,NO的分泌量及其mRNA的表达量(P＜0.01);并能提高小鼠巨噬细胞RAW264.7NF-κB通路中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平(P＜0.01).而丹参多糖各剂量组(2,1,0.5mg/ml)均对细胞活性无毒副作用.并能显著性抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7中TNF-α,IL-6,IL-1β,NO的分泌量及其mRNA表达量的升高(P＜0.01或P＜0.05).与LPS组相比,丹参多糖亦能显著性降低小鼠巨噬细胞RAW264.7NF-κB通路中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平(P＜0.01). 结论：丹参多糖具有较好的抗炎作用,其机制可能是通过调节炎症通路NF-κB中p65和IκBα的蛋白磷酸化水平,进而抑制促炎因子的表达来达到抗炎的作用.

摘要： 目的：研究阿司匹林丁香酚酯(Aspirin eugenol ester,AEE)的抗血小板聚集机制. 方法：以ADP为激动剂,测定AEE在不高于50μM时的三个浓度对血小板胞内钙离子浓度和cAMP含量,以及对PI3K/Akt和MAPK通路的影响. 结果：AEE各组及其前药对照组均能显著降低胞内钙离子浓度以及ERK蛋白磷酸化(P＜0.05),但对胞内cAMP含量变化以及JNK、P38和Akt蛋白的磷酸化过程无影响(P＞0.05).此外,不同浓度AEE均可显著降低血小板ATP释放量(P＜0.01),而阿司匹林,丁香酚以及两者联用则均无显著影响(P＞0.05).在终浓度为25μM时,AEE的降钙作用以及抑制ERK2蛋白磷酸化作用效果均优于其前药对照组,且该浓度下AEE能够显著降低血小板ATP释放量(P＜0.01). 结论：AEE在低浓度下通过抑制胞内钙离子含量升高以及ERK2磷酸化从而抑制ADP诱导的血小板聚集.

摘要： 目的：探讨长期噪声暴露对大鼠海马的影响及其机制。方法：24只雄性SD大鼠分为对照组与噪声暴露组(100dB,白噪声,4h/d×30d),检测噪声暴露组动物中海马的N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)的表达和Tau蛋白的磷酸化状态.为了探讨其可能机制,用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡状态.结果：长期噪声暴露后,海马中NR2B的表达显著下降,Tau蛋白发生过度磷酸化和海马神经细胞凋亡,免疫组化结果显示海马中Tau蛋白发生过度磷酸化特别是在DG区和CA1区.结论：长期噪声暴露引起大鼠神经递质系统异常及Tau蛋白过度磷酸化,可能诱发神经细胞凋亡和认知障碍。

摘要： 目的：观察雷公藤红素对β淀粉样蛋白1-42导致SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化的影响及其可能机制. 方法：用Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白异常磷酸化的细胞模型.加入雷公藤红素干预,Western印迹法检测Aβ1-42导致Tau蛋白异常磷酸化的变化,同时检测p-NF-κB表达情况;siRNA法下调TLR4表达,Western印迹法检测Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化的变化情况;同时观察下调TLR4后,Aβ1-42刺激对p-NF-κB表达的影响. 结果：Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,导致Tau蛋白Ser199/202、Ser396位点的磷酸化水平增加,而雷公藤红素能降低这两个位点磷酸化水平;Aβ1-42导致细胞p-NF-κB表达增加,雷公藤红素干预后p-NF-κB表达下调,且NF-κB抑制剂BAY11-7082同样能降低Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化;下调TLR4表达,Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化及p-NF-κB表达下降. 结论：雷公藤红素降低Aβ1-42导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化可能与其抑制TLR4/NF-κB通路活性有关.

摘要： 目的：观察雷公藤红素对β淀粉样蛋白1-42导致SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化的影响及其可能机制. 方法：用Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白异常磷酸化的细胞模型.加入雷公藤红素干预,Western印迹法检测Aβ1-42导致Tau蛋白异常磷酸化的变化,同时检测p-NF-κB表达情况;siRNA法下调TLR4表达,Western印迹法检测Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化的变化情况;同时观察下调TLR4后,Aβ1-42刺激对p-NF-κB表达的影响. 结果：Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,导致Tau蛋白Ser199/202、Ser396位点的磷酸化水平增加,而雷公藤红素能降低这两个位点磷酸化水平;Aβ1-42导致细胞p-NF-κB表达增加,雷公藤红素干预后p-NF-κB表达下调,且NF-κB抑制剂BAY11-7082同样能降低Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化;下调TLR4表达,Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化及p-NF-κB表达下降. 结论：雷公藤红素降低Aβ1-42导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化可能与其抑制TLR4/NF-κB通路活性有关.

摘要： 目的：观察雷公藤红素对β淀粉样蛋白1-42导致SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化的影响及其可能机制. 方法：用Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白异常磷酸化的细胞模型.加入雷公藤红素干预,Western印迹法检测Aβ1-42导致Tau蛋白异常磷酸化的变化,同时检测p-NF-κB表达情况;siRNA法下调TLR4表达,Western印迹法检测Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化的变化情况;同时观察下调TLR4后,Aβ1-42刺激对p-NF-κB表达的影响. 结果：Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,导致Tau蛋白Ser199/202、Ser396位点的磷酸化水平增加,而雷公藤红素能降低这两个位点磷酸化水平;Aβ1-42导致细胞p-NF-κB表达增加,雷公藤红素干预后p-NF-κB表达下调,且NF-κB抑制剂BAY11-7082同样能降低Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化;下调TLR4表达,Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化及p-NF-κB表达下降. 结论：雷公藤红素降低Aβ1-42导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化可能与其抑制TLR4/NF-κB通路活性有关.

摘要： 目的：观察雷公藤红素对β淀粉样蛋白1-42导致SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化的影响及其可能机制. 方法：用Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白异常磷酸化的细胞模型.加入雷公藤红素干预,Western印迹法检测Aβ1-42导致Tau蛋白异常磷酸化的变化,同时检测p-NF-κB表达情况;siRNA法下调TLR4表达,Western印迹法检测Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化的变化情况;同时观察下调TLR4后,Aβ1-42刺激对p-NF-κB表达的影响. 结果：Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,导致Tau蛋白Ser199/202、Ser396位点的磷酸化水平增加,而雷公藤红素能降低这两个位点磷酸化水平;Aβ1-42导致细胞p-NF-κB表达增加,雷公藤红素干预后p-NF-κB表达下调,且NF-κB抑制剂BAY11-7082同样能降低Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化;下调TLR4表达,Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化及p-NF-κB表达下降. 结论：雷公藤红素降低Aβ1-42导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化可能与其抑制TLR4/NF-κB通路活性有关.

摘要： 本发明公开了磷酸化蛋白质、基于磷酸化蛋白质的胞内递送体系及制备方法与应用；提供了一种蛋白质磷酸化修饰方法，所述磷酸化蛋白质具有蛋白质结构、通过氨基接于所述蛋白质表面的苯硼酸基团和通过硼酸与邻二醇反应接于所述蛋白质表面的三磷酸腺苷；将阳离子多肽溶液和磷酸化蛋白质在碱液中混合，震荡后静置，得到基于磷酸化蛋白质的胞内递送体系。在肿瘤细胞内低pH值和高浓度的活性氧环境下，苯硼酸和三磷酸腺苷从蛋白质表面脱落，蛋白质与阳离子聚多肽的作用力减弱，从复合物中释放出来，同时恢复活性，杀死肿瘤细胞。

摘要： 本申请公开了一种食品蛋白的磷酸化方法及其磷酸化蛋白，至少包括以下步骤：将含食品蛋白的溶液与含植酸的溶液混合后调pH值为3～7后定容，冷冻干燥所得溶液后在干燥加热条件下进行磷酸化反应，得到磷酸化蛋清蛋白。该方法利用来源广泛的蛋清蛋白作为原料，选择本身可作为食品添加剂或食品中常见成分——植酸作为磷酸化试剂，并采用干燥加热的方式，在完全不使用有机溶剂的条件下，制备磷酸化蛋清蛋白。避免有机溶剂的使用，简化后续纯化步骤，环境友好。

摘要： 抗磷酸化Tau蛋白抗体及其在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途。抗体为分别抗Thr181，Thr205，Thr231，Ser262，Ser396，Ser404位点磷酸化修饰Tau蛋白的兔多克隆抗体。Tau蛋白包括来自人、大鼠、小鼠物种中的Tau蛋白。抗磷酸化Tau蛋白抗体在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途，步骤是：通过建立AD症大鼠模型制备各组脑组织石蜡切片；采用分别抗各位点磷酸化修饰Tau蛋白的抗体做一抗；检测各组大鼠脑组织神经细胞中磷酸化Tau蛋白，结果检测到各个位点磷酸化Tau蛋白。这六种抗体可开发为试剂盒，用于人类和相关动物模型阿尔茨海默氏疾病诊断和评估。

摘要： 本申请公开了一种食品蛋白的磷酸化方法及其磷酸化蛋白，至少包括以下步骤：将含食品蛋白的溶液与含植酸的溶液混合后调pH值为3～7后定容，冷冻干燥所得溶液后在干燥加热条件下进行磷酸化反应，得到磷酸化蛋清蛋白。该方法利用来源广泛的蛋清蛋白作为原料，选择本身可作为食品添加剂或食品中常见成分——植酸作为磷酸化试剂，并采用干燥加热的方式，在完全不使用有机溶剂的条件下，制备磷酸化蛋清蛋白。避免有机溶剂的使用，简化后续纯化步骤，环境友好。

摘要： 本发明公开了磷酸化蛋白质、基于磷酸化蛋白质的胞内递送体系及制备方法与应用；提供了一种蛋白质磷酸化修饰方法，所述磷酸化蛋白质具有蛋白质结构、通过氨基接于所述蛋白质表面的苯硼酸基团和通过硼酸与邻二醇反应接于所述蛋白质表面的三磷酸腺苷；将阳离子多肽溶液和磷酸化蛋白质在碱液中混合，震荡后静置，得到基于磷酸化蛋白质的胞内递送体系。在肿瘤细胞内低pH值和高浓度的活性氧环境下，苯硼酸和三磷酸腺苷从蛋白质表面脱落，蛋白质与阳离子聚多肽的作用力减弱，从复合物中释放出来，同时恢复活性，杀死肿瘤细胞。

摘要： 本发明提供了一种磷酸化蛋白的富集方法和磷酸化蛋白的检测方法，属于磷酸化蛋白富集检测技术领域。本发明所述磷酸化蛋白的富集方法包括以下步骤：将磷酸化蛋白样品、缓冲溶液与壳聚糖功能化磁性材料混合，磁分离后，得到富集有磷酸化蛋白的磁性材料；将所述富集有磷酸化蛋白的磁性材料与酸液混合，磁分离后，得到磷酸化蛋白的富集液；所述壳聚糖功能化磁性材料的内核为Fe3O4，Fe3O4外层依次包裹二氧化硅和壳聚糖聚合材料。本发明提供的富集方法能够克服传统免疫沉淀富集方法抗体的局限，具有广泛的适用性。

摘要： 抗磷酸化Tau蛋白抗体及其在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途。抗体为分别抗Thr181，Thr205，Thr231，Ser262，Ser396，Ser404位点磷酸化修饰Tau蛋白的兔多克隆抗体。Tau蛋白包括来自人、大鼠、小鼠物种中的Tau蛋白。抗磷酸化Tau蛋白抗体在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途，步骤是：通过建立AD症大鼠模型制备各组脑组织石蜡切片；采用分别抗各位点磷酸化修饰Tau蛋白的抗体做一抗；检测各组大鼠脑组织神经细胞中磷酸化Tau蛋白，结果检测到各个位点磷酸化Tau蛋白。这六种抗体可开发为试剂盒，用于人类和相关动物模型阿尔茨海默氏疾病诊断和评估。

摘要： 本发明公开了一种检测蛋白磷酸化和乙酰氨基葡萄糖化关联作用的方法，所述方法包括以下步骤：将胰蛋白酶处理得到的多肽样品平均分配成三等分，第一个等分用磷酸酶处理，用IBT‑10Plex116C标记；第二个等分用O‑乙酰葡萄糖胺水解酶处理，用IBT‑10Plex117N标记；第三等分无特殊处理，用IBT‑10Plex118N标记；样品混合，与氢氧化钡、一个含有生物素和巯基的双官能团化合物反应，通过链霉亲和素蛋白‑磁珠从混合物中被亲和富集；用紫外光光照除去含巯基化合物的其他结构，得到多肽衍生物用于质谱分析。本发明可以找出整个蛋白质组中同时具有磷酸化和O‑GlcNAcylation的Ser/Thr位点，为有氧糖酵解和信号转导通道之间的关系提供了具体数据，促进癌细胞特定生物标志物的发现，用于肿瘤的早期诊断以及治疗药物新靶点。

摘要： 本发明涉及一种制备部分脱磷酸化牛乳酪蛋白以模拟人乳酪蛋白磷酸化水平的方法，其是以乳蛋白浓缩物、酪蛋白酸钠、脱脂乳、全脂乳、β-酪蛋白或α

摘要： 本发明提供了一种脂代谢激活脂蛋白受体在促进YAP蛋白磷酸化增加中的应用，属于生物医药技术领域。本发明通过实验证明，脂代谢激活脂蛋白受体能促进YAP蛋白磷酸化增加，进而使YAP蛋白滞留于细胞浆中，从而抑制细胞的Hippo通路活化，抑制肝癌细胞的增殖及成瘤大小，发挥预防和/或治疗肝癌的作用。