恶性疟原虫

摘要： 疟疾是由顶复门寄生虫——疟原虫引起的一种人畜共患病。疟原虫不仅可以感染人,还能够感染家禽、鼠、食蟹猴等多种动物,其中,鸡疟原虫病、鼠疟原虫病对畜牧业影响较大。为完成其复杂的生命周期,疟原虫需要严格的基因调控,而转录因子对基因表达的调控作用十分关键。截至目前,ApiAP2蛋白质家族是在所有顶复门原虫中作为候选转录因子出现的唯一蛋白质家族。论文在总结已有研究的基础上,预测恶性疟原虫ApiAP2蛋白质家族中未知功能蛋白质的调控机制,并开展对ApiAP2蛋白质家族发生蛋白质翻译后修饰功能的展望,为畜牧业研发原虫病疫苗提供借鉴与参考。

摘要： 疟疾是由疟原虫引起的虫媒传染病,在全球尤其是热带地区肆虐流行,严重威胁着人类的健康.疟原虫主要在人类宿主体内发育繁殖,具有复杂的生命周期,包括疟原虫入侵、迁移、逃避免疫攻击、肝细胞内分裂增殖、入侵红细胞并在红细胞内大量繁殖、周期性释放等系列过程,最终导致疟疾患者症状周期性发作.本文重点围绕疟原虫(即子孢子、裂殖子)人体红细胞外、红细胞内入侵及发育过程的研究进展进行综述,为疟疾疫苗研发和疟疾防控救治提供参考.

摘要： 疟疾是疟原虫通过雌性按蚊为媒介传播的寄生虫病,是当今世界公共卫生的突出问题.寄生于人体的疟原虫主要包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和诺氏疟原虫5种,其中,恶性疟原虫的致病性最为强烈,是导致全球疟疾发病和死亡的重要病原体.硫化肝素是广泛分布于脊椎动物细胞表面的无支链多糖,为疟原虫入侵宿主红细胞的一个重要受体,在疟原虫入侵过程中发挥着重要的作用.疟原虫入侵宿主红细胞是一个快速而复杂的过程,恶性疟原虫入侵相关蛋白质在疟原虫入侵过程中具有重要的作用,主要参与黏附宿主红细胞、形成移动连接复合体、形成和修饰纳虫空泡等过程.黏附是恶性疟原虫入侵宿主红细胞的第一步,入侵相关蛋白质与宿主红细胞表面硫化肝素受体结合,继而完成后续的入侵.综合国内外文献,本文围绕肝素/硫化肝素在治疗恶性疟疾中的应用、与恶性疟原虫入侵相关蛋白质的结合以及恶性疟原虫入侵相关蛋白质在裂殖子入侵宿主红细胞过程中的作用机制等研究方面进行综述,为恶性疟原虫入侵过程中相关蛋白质与肝素结合的分子机制提供理论依据,同时也为新型抗疟药物和疫苗的研制以及治疗提供参考.

摘要： 目的 通过疟疾主要传播媒介冈比亚按蚊复合体在弗里敦市的分布和疟原虫感染率的调查,为制定有效的防疟措施提供流行病学依据.方法 2019年12月至2020年3月在塞拉利昂首都弗里敦市10个监测点利用诱蚊灯法进行蚊媒监测研究.将冈比亚按蚊的胸部和腹部分开,分别提取基因组DNA,通过多重PCR鉴定蚊种,利用巢式PCR检测按蚊感染疟原虫的情况,应用Excel 2019和SPSS 21.0软件对结果进行统计分析.结果 2019年12月至2020年3月,共捕获按蚊349只,平均诱捕按蚊密度为0.83只/(灯.晚).西部农村诱捕按蚊324只,占捕蚊总数的92.84％,平均诱捕按蚊密度为2.00只/(灯·晚).对192只冈比亚按蚊复合体进行的分子鉴定结果显示,冈比亚按蚊(狭义)S-型84只,占43.75％;冈比亚按蚊(狭义)M-型108只,占56.25％.冈比亚按蚊(狭义)中仅检测到恶性疟原虫,未检出间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫.恶性疟子孢子和卵囊阳性率分别为3.13％和6.77％.2019年12月到2020年3月期间的月恶性疟子孢子和卵囊感染率差异无统计学意义.108只冈比亚按蚊(狭义)M-型中子孢子和卵囊阳性率分别为3.70％和7.41％;84只冈比亚按蚊(狭义)S-型中子孢子和卵囊阳性率分别为2.38％和5.95％.冈比亚按蚊(狭义)M-型中子孢子和卵囊阳性率高于S-型,差异无统计学意义.结论 弗里敦市的优势按蚊蚊种为冈比亚按蚊(狭义)(M-型和S-型),监测到的其他按蚊有催命按蚊和An.coustani.西部农村按蚊密度远高于西部城区,具有较高的疟疾感染风险.在旱季不同月份,野外诱捕冈比亚按蚊(狭义)的卵囊阳性率均为子孢子阳性率的2倍,而其旱季每月的传疟作用较稳定.本研究将为塞拉利昂疟疾防控策略的制定提供理论依据.

摘要： 目的 建立一种通过高分辨熔解曲线(H RM)-非标记探针基因分型分析方法,检测恶性疟原虫青蒿素耐药相关K13基因C580Y突变位点.方法 通过构建野生型和C580Y突变型质粒,设计相应引物、探针,应用HRM-非标记探针技术检测C580Y突变.结果 成功检测出标本中含有C580Y突变的基因型及野生基因型.检测野生型和突变型的探针峰的温度之差为5°C.结论 H RM-非标记探针技术是一种能够快速、准确、廉价、反应通量大的检测方法,适用于疫区恶性疟原虫青蒿素耐药相关K13基因突变的大批量检测.

摘要： 目的 回顾分析1例外周血白细胞绿色包涵体合并疟色素病例的临床症状和实验室检查情况,以提高临床和实验室技术人员对此类病例的认识.方法 对患者行血常规、C反应蛋白、生化项目、疟原虫抗原、疟原虫形态学检测和油红O染色,结合相关文献分析病例临床症状和实验室检查特点.结果 患者以高热伴关节酸痛为首发表现.血小板计数12×109/L,中性粒细胞百分比82.7％,C反应蛋白>200 mg/L,伴有肝、肾功能异常.外周血涂片查见恶性疟环状体,治疗后期中性粒细胞与单核细胞中可见绿色包涵体和疟色素,绿色包涵体油红O染色阳性.结论 中性粒细胞绿色包涵体和疟色素的出现对重症疟疾的预后具有重要提示作用,一旦发现应及时提示临床.

摘要： 目的:为探究葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)磷酸化水平对红细胞期疟原虫生长发育的影响,构建必要的分子工具.方法:以pcDNATM4/TO/myc-His B为载体,构建在GLUT1第一个胞外区插入2×FLAG标签的重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1.将重组质粒转染到NIH/3T3细胞中,利用Western印迹和流式细胞术分别检测细胞FLAG-GLUT1蛋白总量和细胞表面FLAG-GLUT1的表达水平.结果:酶切鉴定及DNA测序表明正确构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1.通过识别FLAG标签,利用Western印迹能够检测到FLAG-GLUT1在NIH/3T3细胞中的表达,流式细胞术结果显示,转染重组质粒的细胞表面可检测到FLAG-GLUT1的表达,阳性群比例为(21.46±2.375)％,明显高于对照组(0.01±0.00)％,差异有统计学意义(t=9.035,P＜0.01).结论:成功构建重组质粒pcDNA4-2×FLAG-GLUT1,为研究GLUT1蛋白磷酸化在疟原虫感染红细胞中的作用提供了必要的工具.

摘要： CellaVision自动化血细胞数字图像分析系统是一种新兴的细胞检验技术,其可以独立处理和检查所有实验室的细胞图像,在血液细胞的形态检查及实验管理中有积极的意义.本研究对CellaVision系统在红细胞、体液细胞、白细胞和血小板检测中的应用情况进行综述.

摘要： 目的:明确中缅边境恶性疟原虫AMA1蛋白结构域Ⅱ(DⅡ)的单倍体型及抗体应答特点.方法:采集30例恶性疟原虫感染患者指尖血制成血样干滤纸片,并另外收集123例感染者血清样本;制备DⅡ重组蛋白和免疫血清;检测抗DⅡ免疫血清对裂殖子侵袭的影响;PCR和测序分析DⅡ的单倍体型;ELISA检测血清中DⅡ特异性IgG抗体及其亚类.结果:抗DⅡ免疫血清呈剂量依赖性抑制裂殖子侵袭红细胞.30例流行区样本中检测出9个PfAMA1单倍型.优势单倍体型H4频率为26.7％.45.1％的患者血清中抗DⅡ的IgG抗体反应为阳性,且以调理性IgG1和IgG3抗体为主.结论:DⅡ可诱导保护性抗体应答.中缅边境地区H4为DⅡ的优势单倍体型并具有免疫原性,提示其作为候选红内期疫苗的可行性.

摘要： 目的:利用Seahorse XFe96分析仪对6大类别共计13种国际一线抗疟药物作用于红内期恶性疟原虫3D7(Plasmodium falciparum 3D7)线粒体电子传递链(electron transport chain,ETC)进行评价。方法:采用三天抑制法和SYBR Green I荧光分析法对体外药物作用于P.falciparum 3D7的抗疟活性进行评价,采用磁珠分选技术对P.falciparum 3D7虫株进行分离纯化,采用Seahorse XF分析系统的线粒体耗氧率OCR值(Oxygen Consumption Rate)对P.falciparum 3D7线粒体不同时刻的生物能进行表征,进而考察不同抗疟药物对红内期恶性疟原虫线粒体有氧呼吸的影响。结果:流式检测结果显示,成功富集到虫期较为一致的滋养体期疟原虫。体外抗疟活性评价结果显示,除双胍类抗疟药物氯胍(proguanil,Pro)外,其余12种抗疟药物对P.falciparum 3D7的药效均为nmol/L级别。线粒体有氧呼吸考察的结果显示,双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)和氯喹(chloroquine,CQ)的5种浓度剂量(0.4、1、5、10、50×IC 50)对P.falciparum 3D7线粒体有氧呼吸均无明显影响。13种常用抗疟药物在5×IC 50浓度剂量下,青蒿素(artemisinin,ART)、蒿乙醚(arteether,ARE)和蒿甲醚(artemether,ARM)均能显著提高线粒体最大呼吸;奎宁(quinine,QN)和Pro仅对P.falciparum 3D7线粒体ETC的氧化磷酸化具有解偶联作用,未完全破坏线粒体ETC的功能;阿托伐醌(atovaquone,Ato)对P.falciparum 3D7线粒体有氧呼吸有明显的抑制作用,显著降低线粒体最大呼吸和质子的泄漏,完全破坏了线粒体ETC的功能;其余抗疟药物对P.falciparum 3D7线粒体有氧呼吸均无明显影响。结论:13种国际一线抗疟药物中大多数抗疟药物的靶标并非是疟原虫线粒体有氧呼吸的ETC通路。

摘要： 目的:应用毕赤酵母表达系统,表达出恶性疟原虫环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP),便于恶性疟疾疫苗的进一步研究.方法:根据GenB ank得到恶性疟原虫7G8的基因序列,选取该序列628-1194位基因,以密码子最佳化为原则合成基因后构建酵母表达载体CSP/pGAPZaA,电转毕赤酵母菌PDI-GS115,获得酵母重组体.三角瓶规模表达重组菌,获得表达上清.结果:SDS-PAGE电泳、Dot-blotting、Western bloting检测表达上清,显示有弱阳性表达.结论:在毕赤酵母中实现了CSP基因的表达,为恶性疟疾疫苗的研发奠定了基础.

摘要： 本文用BinaxNOW疟疾快速诊断试剂卡对利比里亚维和二级医院应用进行了评价.结果表明，试剂卡能同时检测单纯恶性疟原虫和非恶性疟原虫的其他人疟原虫，其性能符合疟疾实验室诊断技术要求，具有快速、简便、准确等优点，是疟疾现场诊断的有效工具。同时，试剂卡检测恶性疟和间日疟敏感性、特异性高，且无交叉反应。操作简便，出结果迅速(只需10-15min)，技术要求不高，对快速诊断，维和任务区的应用非常方便，在间日疟方面，当虫体较少时河能会出现假阴性结果，故临床上怀疑患者为间日疟感染且阴性时应同时做涂片检查，以提高检出率。在恶性疟疾方面，由于该试剂的敏感性高，故在检测中完全可以取代涂片法在临床上应用。

摘要： @@恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)是引起人类恶性疟疾的病原体，这种病原体导致每年150-300万人死亡。自20世纪60年代以来，由于疟原虫抗药性的产生和扩散，药物防治疟疾的措施亦面临严重的困难和挑战。然而，任何新的疟防措施都是建立在对疟原虫与其宿主相互作用深入认识的基础之上。

摘要： 目的：应用麦胚无细胞蛋白表达系统，表达出恶性疟原虫环子孢子蛋白（Circum sporozoite protein， CSP）。方法：依据PlasmoDB查得的恶性疟原虫Pf3D7株CSP蛋白基因序列，设计一对引物，经PCR扩增出CSP蛋白基因全序列。用NcoI与Sma I双酶切后，与同样双酶切的pIVEX 1.3WG载体连接，转化大肠杆菌DH5а株，获得pIVEX WG 1.3-CSP质粒。将pIVEX WG 1.3-CSP质粒加入到麦胚表达系统进行表达，表达产物使用镍离子亲和层析柱纯化，获得重组CSP。结果：PCR成功扩增出CSP基因序列，成功构建pIVEX WG 1.3-CSP质粒，经WB验证，该重组质粒在麦胚表达系统中成功地表达了CSP。结论：使用麦胚系统表达的CSP，可用于疟疾诊断试剂和疫苗评价方面的研究。

摘要： 同位素微量试验法是WHO推荐的评估抗疟活性和检测抗疟药敏感性的方法,国内报道甚少.采用同位素微量试验法检测20个新化合物对恶性疟原虫Dd2、3D7克隆系的抗疟活性;结果显示,20个新化合物均没有明显的抗疟原虫活性;对照药物氯喹和奎宁显示了良好的抗疟活性,结果稳定、重复性好,表明同位素微量试验法是体外筛选新抗疟药的一个稳定、可靠的方法.

摘要： 自然杀伤细胞起源于多能造血干细胞,是免疫系统中一种重要的细胞,具有两个功能:细胞溶解性和产生细胞因子,这两种功能受到大量激活和抑制的受体的调节,包括近来新发现的受体,可以在主要组织相容性复合体中以独立的方式选择性的激活细胞溶解性。根据这种不需提前免疫,自发发挥细胞毒性的功能,NK细胞被认为在免疫监视和癌症治疗中起到关键作用。NK细胞生物学的新见解表明它们的主要功能是控制感染,尤其是恶性疟原虫的感染和胎儿的发育.恶性疟原虫是一种主要引起疟疾的原生动物寄生虫,每年导致200 000000-300 000 000的临床病例和3 000 000人的死亡.本篇综述提供NK细胞功能,个体发生学和生物学的最新进展来更好的理解在地方性疟疾发生的地区NK细胞在妊娠中的作用。对NK细胞功能机制的理解促使我们能研究出可行的治疗方案来治疗人类一般的疾病,特别是疟疾。

摘要： 本发明公开了一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合及其制备方法和应用。所述结合蛋白组合由检测恶性疟原虫HRP2的结合蛋白1、结合蛋白2和检测间日疟原虫LDH的结合蛋白3、结合蛋白4组成，所述结合蛋白1～4的氨基酸序列如SEQ ID NO:5～8所示。本发明采用噬菌体展示技术以恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH为靶抗原，从噬菌体展示蛋白文库中淘选亲和力高、特异性好的结合蛋白组合。利用基因工程技术进行重组表达和纯化，以此结合蛋白组合试剂替代疟疾免疫检测中用抗体试剂，建立胶体金层析快速检测方法，所得试剂盒的储存稳定性高于现有临床检测产品，具有可靠、准确、安全、简便、稳定的优点。

摘要： 本发明公开了一种抗恶性疟原虫HRP‑II的抗体、检测恶性疟原虫的试剂和试剂盒，涉及抗体技术领域。本发明公开的抗恶性疟原虫HRP‑II的抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体对恶性疟原虫的HRP‑II抗原的亲和力较高，使用该抗体检测恶性疟原虫具有较好的灵敏度和特异性。

摘要： 本发明涉及疫苗V，其包含(A)至少一个分离的多肽链P，其包含(或由其组成)至少九个连续氨基酸部分是来自重复性细胞器蛋白，恶性疟原虫的推定蛋白或间日疟原虫的假定蛋白PVNG_04523，或编码多肽链P的多核苷酸链；(B)至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。此外，本发明涉及一种抗体，其可与重复性细胞器蛋白，恶性疟原虫的推定蛋白或间日疟原虫的假定蛋白PVNG_04523或它们的编码多核苷酸链相结合，并涉及其产生方法及其用途。

摘要： 本发明公开了一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合及其制备方法和应用。所述结合蛋白组合由检测恶性疟原虫HRP2的结合蛋白1、结合蛋白2和检测间日疟原虫LDH的结合蛋白3、结合蛋白4组成，所述结合蛋白1～4的氨基酸序列如SEQ ID NO:5～8所示。本发明采用噬菌体展示技术以恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH为靶抗原，从噬菌体展示蛋白文库中淘选亲和力高、特异性好的结合蛋白组合。利用基因工程技术进行重组表达和纯化，以此结合蛋白组合试剂替代疟疾免疫检测中用抗体试剂，建立胶体金层析快速检测方法，所得试剂盒的储存稳定性高于现有临床检测产品，具有可靠、准确、安全、简便、稳定的优点。

摘要： 本发明人已经鉴定出Pfs47，来自疟疾寄生虫恶性疟原虫的基因，是这些寄生虫在冈比亚按蚊中存活的关键因素。在非洲冈比亚按蚊是人疟疾的主要天然媒介。通过控制蚊子的免疫系统，Pfs47蛋白可以允许寄生虫在蚊子中存活。本发明人提出P47蛋白(包括Pfs47和Pvs47)作为疫苗或药剂的靶标的用途，所述疫苗或药剂将阻断或降低冈比亚按蚊或其他按蚊中的恶性疟原虫或间日疟原虫感染，从而防止寄生虫在人类中的进一步传播。

摘要： 本发明提供了一种恶性疟原虫(P.falciparum)RIFIN多肽8‑RIFIN及其衍生产品和应用，属于生物蛋白质工程技术领域。本发明提供的恶性疟原虫RIFIN多肽8‑RIFIN，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，来自于恶性疟原虫3D7的RIFIN基因PF3D7_0900200编码的位于243～267aa的RIFIN肽段。多肽8‑RIFIN不仅具有较好的可特异性识别感染恶性疟病人全血的能力，且能够结合免疫抑制性受体LILRB1，这表明本发明的多肽是恶性疟原虫RIFIN蛋白与LILRB1结合的关键区域，为进一步研究恶性疟原虫利用RIFIN蛋白进行免疫逃避的分子机制打下基础。

摘要： 本申请提供了能够与恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)己糖转运蛋白(PfHT)或其类似物的结合口袋结合的分子以及包含其的复合物。本文还提供了PfHT抑制剂、包含该抑制剂的药物组合物，以及使用该抑制剂或该药物组合物治疗与疟原虫(Plasmodium)或PfHT相关的疾病或者杀死疟原虫(Plasmodium)或抑制其生长的方法。本申请还提供了一种此类结合口袋的结构坐标组以及使用该结构坐标组筛选和设计能够与PfHT或其类似物结合的化合物的方法。

摘要： 本发明公开了一类类肽异羟肟酸类恶性疟原虫氨肽酶抑制剂及其制备方法和应用。所述的类肽异羟肟酸类恶性疟原虫氨肽酶抑制剂，其结构通式为G。所述的式G结构化合物可用于制备预防和治疗疟疾的药物。

摘要： 本发明涉及一种用于恶性疟原虫检测的荧光染色方法及其试剂。其方法特征在于通过恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体制备和抗体测序技术，获得能够与恶性疟原虫乳酸脱氢酶特异性结合的多肽序列，对其进行合成和荧光素标记，形成特异性荧光素标记多肽；使用本发明所提供的试剂，实现对血液中恶性疟原虫进行荧光显色检测；试剂与样本混合后，特异性荧光素标记多肽同恶性疟原虫结合，在荧光显微镜下使含有疟原虫的血细胞呈现亮色或特异性颜色，其他血细胞为黑色或背景色。

摘要： 本发明公开了一种基于深度学习的恶性疟原虫数字化检测系统及检测方法，包括采集检测系统启动时的环境温度，获取加热设备待机温度与环境温度的偏差，若偏差在设定的偏差范围内，则加热设备待机正常；对加热设备和自适应散热调节装置进行联合调试，获取环境温度与设定的标准温度的差值，若差值在差值阈值内，则无需对样品池进行预热，若差值大于差值阈值，则需对样品池进行预热，加热设备和自适应散热调节装置进行联合调试完成后，对样品进行等温扩增，扩增完成后，获取DNA荧光图像，并对包含有疟原虫DNA特异条带的DNA荧光图像进行标注，得到疟原虫DNA荧光图像；通过本发明，可以实现在不同的环境条件下，对等温扩增过程中的温度进行精确控制。