一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法

摘要

本发明提供了一种无差别扩增双链cDNA及基因组DNA的方法。所述方法包括：构建含有稀有限制性内切酶I-SceI识别位点的OligodT引物I-SceIdT，利用该引物对样品RNA进行逆转录合成第一链cDNA；往第一链cDNA中加入RNAseH酶和DNA Polymerase I酶，合成双链cDNA，然后抹平双链cDNA末端(基因组DNA扩增从此步骤开始做)，接着使双链cDNA(或基因组DNA)的3‘末端加上碱基A，最后在双链两端都加上接头Zip T，使双链DNA可以变性成单链环状结构，在phi29DNA聚合酶作用下进行滚环扩增，产生大量双链cDNA或基因组DNA。本发明方法能够高效并切无差别的扩增各种cDNA及基因组DNA，对珍稀样本的基因组DNA和cDNA有扩大保存的作用，并能高效的扩增高GC含量以及复杂二级结构的DNA。