狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种狂犬病毒CTN株全基因组感染性cDNA克隆，以及一种通过反向遗传技术拯救出具有活性狂犬病毒的方法。本发明利用CTN株狂犬病毒全长基因组内的单一限制性酶切位点将病毒全长分成四段进行扩增，同时用绿色荧光蛋白基因代替伪基因处423bp碱基，克隆入pVAX-R表达载体，构建成病毒基因组重组全长质粒。用PCR扩增CTN株狂犬病毒的核蛋白，磷蛋白，糖蛋白，转录大蛋白基因序列，并将扩增片段克隆入pVAX1载体中，构成反向遗传系统中的4个辅助质粒。将这5个质粒共同转染细胞，拯救狂犬病病毒。本发明成功拯救出狂犬病毒，对研究狂犬病毒的致病机理，新型疫苗的研制以及病毒载体等方面具有重要的意义。