溶藻弧菌poly(A)化mRNA的cDNA文库构建方法

摘要

一种溶藻弧菌poly(A)化mRNA的cDNA文库构建方法，以溶藻弧菌为材料，用提取总RNA、反转录、应用RD-PCR技术扩增反转录得到的双链DNA、分子克隆及ESTs生物信息学等方法对该菌进行研究。此方法具有质量高，所筛选的基因片段重复性低，筛选基因片段效率高，目的性强等特点。该文库应用了RD-PCR技术，对欲克隆的基因片段进行了扩增，由于酶切后片段大小较均一，可以有效地避免PCR对短片的优先扩增，防止所构建的cDNA文库出现明显偏向，在这点上优于一般PCR介导的cDNA文库构建法。该文库可以作为深入研究溶藻弧菌毒力因子以及致病机理的基础；能为研制新型基因工程疫苗提供新的思路。