赤魟尾刺亲环素A基因的克隆、表达及生物活性

摘要

本发明通过构建赤魟(Dasytis akajei)尾刺cDNA文库和DNA测序，并根据所获得的亲环素(CyP)EST 3’端和载体核苷酸序列，设计引物，用PCR的方法，首次从赤魟尾刺cDNA文库中筛选克隆到亲环素A全长基因。新基因长度为656bp，编码167个氨基酸的成熟肽，所表达的蛋白质等电点为8.34，分子量约为18，021道尔顿。将赤魟尾刺亲环素A基因克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRX的trxA基因3’末端，构建符合读码框的融合基因，该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在，表达量可达60mg/L。通过Ni-Chelating亲和色谱层析，蛋白酶3C切割和凝胶过滤，得到纯度在95%以上成熟的重组赤魟亲环素A蛋白，得率为10mg/L。该蛋白具有肽基脯氨酸顺反异构酶活性。