靶向血红蛋白HBB突变基因的造血干细胞基因修饰方法

摘要

本发明公开了一种靶向血红蛋白HBB突变基因的造血干细胞基因修饰方法，方法一：gRNA1、gRNA2和spCas9‑2.0的mRNA电转进入含血红蛋白HBB突变基因的CD34+细胞；细胞培养1天后，以rAAV‑HBB转染CD34+细胞，收获细胞；方法二：Cas9蛋白与gRNA1、gRNA2混合重组，电转进入CD34+细胞；细胞培养1天后，以rAAV‑HBB转染CD34+细胞，收获细胞。本发明以中国广东广西最常见的HBB突变中CD41/42(‑CTTT)为靶，基因编辑完成后，不在染色体上留下任何其他突变或插入序列，基因编辑效率可达15％～20％。