一种重组载体CAR-CD244-antiCD19的制备方法

摘要

本发明涉及一种重组载体CAR‑CD244‑antiCD19的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将特异性抗体编码基因使用末端带有BfuAI限制性内切酶识别位点的引物进行PCR扩增；所述特异性抗体编码基因序列为CD19抗体的部分序列，为序列表序列2；步骤2、将步骤1的PCR产物分别进行纯化；步骤3、将步骤2纯化的PCR产物在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切，并同时将含有改造的CD244骨架的克隆载体在BfuAI限制性内切酶识别位点进行单酶切；步骤4、将酶切后产物进行纯化；步骤5、将纯化后的产物按抗体片段与含有改造的CD244骨架的克隆载体摩尔比为3:1配比后，使用T4连接酶进行连接、转化、涂板、挑取单克隆提取质粒测序；将连接正确的质粒，命名为：重组载体CAR‑CD244‑antiCD19。