一种微囊化hBMP-2/Tet-on系统的构建方法

摘要

本发明提供了一种微囊化hBMP‑2/Tet‑on系统的构建方法，包括如下步骤：S1.获取hBMP‑2基因，构建hBMP‑2‑GV347重组质粒；S2.将hBMP‑2‑GV347重组质粒转化、扩增后感染细胞，诱导，使用慢病毒载体进行包装，得到基因转染的BMSCs；S3.使用微胶囊包裹S2中得到的基因转染的BMSCs；本发明将Tet‑On系统与hBMP‑2同时构建于慢病毒载体上，可以提高两个系统的转染效率和表达，更加稳定和持续表达目的基因。转染BMSC后可以在强力霉素的作用下获得BMP‑2蛋白的稳定表达及促进BMSCs向成骨细胞分化。采用含酚基的羧甲基纤维素微囊进行包裹形成复合体，使上述系统在DOX的作用下，能稳定持续的向囊外分泌BMP‑2蛋白；停止使用DOX后，BMP‑2分泌即停止分泌。微囊中BMSCs细胞破囊后依然具备成骨分化能力，且可以在自分泌BMP‑2作用下成骨分化。