一种非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法

摘要

本发明提供了一种非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法，其是从含ASFVP30全长基因的质粒PCR‑4TOPO‑P30中扩增出P30基因，将扩增的P30基因连接至杆状病毒载体pFastBac 1中，构建重组杆状病毒载体pFastBac1‑ASFV‑P30，转化至大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中，获得重组穿梭杆粒rBacmid‑ASFV‑P30，鉴定正确后将其转染至Sf 9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并将重组杆状病毒进行传代扩增，将高滴度的含有ASFV P30基因的杆状病毒接到High Five昆虫细胞中进行ASFV P30蛋白的真核表达。选用本发明方法构建非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体，并利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达非洲猪瘟P30蛋白，为非洲猪瘟血清学ELISA检测方法的建立奠定了基础。