敲除衣藻内源基因和表达外源基因的载体构建方法及应用

摘要

本发明提出了一种敲除衣藻内源基因和表达外源基因的载体构建方法及应用，该载体包含一个潮霉素抗性标记基因，标记基因两端都有一个来自RubisCO基因的splicing donor序列(TCCATTTGCAG/GATGTTCGA)，三个串联重复的终止密码子，以及一个转录终止子。该载体用Spel Ⅰ和Cla Ⅰ双酶切后产生的1.9kb片段电击转化莱茵衣藻细胞，即使载体插入衣藻基因内含子中插入载体也成为mRNA一部分，基因转录在三个串联重复终止密码子和转录终止子处停止。与没有SIS的2.6kb AphVⅢ插入载体相比，新构建的载体提高了突变体转录终止效率。