含GFP基因的莱茵衣藻高效表达载体的构建及其在衣藻叶绿体中的表达

摘要

衣藻因其所具有的独特细胞结构，清晰的遗传学背景，是研究各种生命现象的模式生物。衣藻叶绿体是良好的生物反应器，是表达外源基因的理想场所。但是目前存在外源基因表达量不高等问题限制了衣藻的商业化应用。
　　启动子及增强子是表达外源基因的关键调控元件，其活性高低直接影响外源基因的表达量。本研究中构建了以绿色荧光蛋白GFP基因作为报告基因，分别含有启动子atpA或psbA及增强调控元件的衣藻叶绿体表达载体，利用基因枪法将上述构建的一个载体转化衣藻后，经过壮观霉素筛选，获得了衣藻转化子。
　　本论文的主要内容及结果：
　　1、以gfp基因作为报告基因，构建了含有衣藻叶绿体atpA及其增强子调控元件的衣藻叶绿体表达载体。
　　2、PCR法克隆了衣藻叶绿体psbA启动子，将其与(dA/dAG/E)等调控元件组合，构建了系列衣藻叶绿体表达载体。
　　3、构建含有gfp基因和aadA双表达盒的莱茵衣藻叶绿体表达载体pgfpa2，利用基因枪法将该表达载体导入到了衣藻中，经过壮观霉素抗性筛选获得了转基因藻株。
　　上述工作为外源基因在衣藻中高效表达奠定了坚实的基础。

目录

文摘

英文文摘

前言

1 文献综述

1.1 衣藻的概述

1.1.1 衣藻的简介

1.1.2 衣藻作为模式生物的特点

1.1.3 衣藻叶绿体

1.2 衣藻基因工程

1.2.1 启动子等调控元件

1.2.2 衣藻叶绿体遗传转化方法

1.2.3 衣藻表达具有应用价值的外源蛋白

1.3 衣藻其他方面的研究

1.3.1 衣藻对污水净化的研究

1.3.2 衣藻产氢的研究

1.3.3 利用衣藻生产可降解塑料的研究

1.4 绿色荧光蛋白的简介及应用

1.5 本实验研究的目的和意义

2 含有atpA启动子与增强子的衣藻叶绿体表达载体的构建

2.1 质粒psk-atpA-gfp的构建

2.1.1 实验仪器设备与材料

2.1.2 实验方法

2.1.3 结果与分析

2.2 含有atpA(dA/dAG)的衣藻叶绿体表达载体的构建

2.2.1 实验方法

2.2.2 结果与分析

2.3 含有atpA(dA+E)/(dAG+E)的衣藻叶绿体表达载体的构建

2.3.1 实验方法

2.3.2 结果与分析

2.4 本章小结

3 含有psbA启动子与增强子的衣藻叶绿体表达载体的构建

3.1 质粒psk-psbA(651)-gfp的构建

3.1.1 实验仪器设备与材料

3.1.2 实验方法

3.1.3 结果与分析

3.2 含有psbA(651dA/dAG)的衣藻叶绿体表达载体的构建

3.2.1 实验方法

3.2.2 结果与分析

3.3 含有psbA(651dA+E)/(651dAG+E)的衣藻叶绿体表达载体的构建

3.3.1 实验方法

3.3.2 结果与分析

3.4 本章小结

4 含GFP基因表达载体的构建及其在衣藻叶绿体中的表达

4.1 pgfpa2表达载体的构建

4.1.1 实验仪器设备及材料

4.1.2 实验方法

4.1.3 结果与分析

4.2 pgfpa2在衣藻叶绿体中的表达

4.2.1 实验仪器设备与材料

4.2.2 实验方法

4.2.3 结果与分析

4.3 本章小结

结论

参考文献

致谢

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