检测博来霉素的双环发夹探针介导免标记链置换扩增方法

摘要

本发明公开了一种检测博来霉素的双环发夹探针介导免标记链置换扩增方法，当博来霉素存在时，双环发夹探针在识别位点处断裂，并释放触发序列；然后，触发序列与信号探针的环部相结合，并在聚合酶和切刻酶的作用下，发生链置换扩增反应，最终产生大量的G‑四链体序列。与此同时，引物链延伸将信号探针打开，信号探针颈部封存的G‑四链体序列得以暴露。最后，G‑四链体序列绑定NMM分子，产生荧光信号，通过检测到的荧光信号对博来霉素进行定量。本发明通过将触发序列设计在双环发夹探针的颈部，降低检测体系的背景信号；将博来霉素切割与链置换扩增反应相结合，实现对博来霉素的灵敏检测，检测限为0.34nM。该方法具有操作简单，免标记以及特异性好的优势。