一种基于荧光铜纳米颗粒免标检测T4多聚核苷酸激酶/磷酸酶及其抑制剂的新方法

摘要

本发明公开了一种基于荧光铜纳米颗粒免标检测T4多聚核苷酸激酶/磷酸酶及其抑制剂的新方法，它是通过以下步骤实现的：一、设计3′端磷酸化修饰的发夹探针，5′端为富含T碱基的序列；二、将上述探针用Tris‑HCl缓冲溶液稀释到浓度为100～1000nM，并把一定量T4 PNKP、Klenow Fragment、dNTPs与之混合，37℃反应40～150min；三、将上述反应液稀释为MOPS缓冲体系，并加入硫酸铜、抗坏血酸钠，室温下反应1～30min；四、最终所得反应液用荧光仪检测其荧光强度，得到体系荧光强度与T4 PNKP浓度之间的对应关系，本发明方法操作简单、成本低、灵敏度高、选择性好，能够定量检测并筛选T4 PNKP及其抑制剂，为其他末端修饰酶检测方法的建立和分子生物学诊断提供了潜在的应用价值。