鸡外周血单核淋巴细胞PD-L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用

摘要

本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，涉及鸡外周血单核淋巴细胞PD‑L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集雏鸡淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD‑L1目的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳检测，并回收纯化；将PD‑L1目的基因片段与pMD 18‑T载体连接，转化至感受态细胞DH5α中，提取重组质粒；经克隆筛选后进行测序分析，选取与目的基因片段相同序列的阳性质粒作为标准品质粒，按拷贝浓度绘制成标准曲线；根据荧光信号变化及标准曲线测出PD‑L1的基因丰度。本发明的PD‑L1基因丰度实时检测方法具有检测通量高、敏感性高、特异性强、操作简便、成本低及定量准确等优点。