应用高浓度引物的定量聚合酶链反应方法

摘要

本发明是一种分子生物学技术，即一种改进了PCR反应参数和目标产物电泳条带检测程序的定量聚合酶链反应方法。其特点是聚合酶链反应的正、反引物的最终浓度为1-100uM。反应中正、反引物的解链温度为85-92℃，PCR反应的引物长度可为25-50硷基。PCR反应包括高温模板变性、引物与模板退火延伸两步。退火延伸温度为72-82℃。并可以将染色剂SYBR金与PCR样品混合后一起进行电泳，然后定量测定电泳凝胶上PCR产物条带的强度，SYBR金在加样缓冲液中的重量百分比浓度为万分之一至百分之一。本发明PCR反应更为稳定，使PCR平坡出现推迟，目标产物直线累积期增长。从而使经典PCR能在完全保持其简单、快速和专一的优点的同时，实现了定量功能的突破。将SYBR金与样品混合一起进行电泳的作法，则不仅提高了定量染色灵敏度，扩展了定量测定的线性范围，而且省略了染色步骤，减少了染色剂用量。