二硫桥连双链形式的蛋白质的重组表达

摘要

本发明涉及以双链形式产生多肽或蛋白质的方法，该方法通过在大肠杆菌中的重组表达，由此i)所述多肽或蛋白质作为双链多肽或蛋白质发挥其功能，ii)第一链的C末端氨基酸基团是Arg或Lys基团，iii)所述蛋白质/多肽的第二链在其N末端具有1-20个氨基酸基团和称为PRS的五肽序列VPXGS，其中X可以是任何天然存在的氨基酸，其中V代表Val、Leu、Ile、Ala、Phe、Pro或Gly，P代表Pro、Leu、Ile、Ala、Phe、Val或Gly，G代表Gly、Leu、Ile、Ala、Pro、Phe或Val，而S代表Ser、Tyr、Trp或Thr；以及iv)所述方法包含以下步骤：a)在核酸水平修饰所述多肽或蛋白质，使经修饰形式的该多肽或蛋白质在其环区域包含序列VPXGS，其中X、V、P、G和S如上所定义；b)引入所述在核酸水平修饰的构建体到大肠杆菌细胞中；c)培养并且随后裂解所述宿主细胞；以及d)分离双链多肽或蛋白质。根据本发明的优选实施方案，所述多肽或蛋白质是肉毒杆菌神经毒素，特别是肉毒杆菌神经毒素(BoNT(A))A型。