茴香醛/美罗培南或其联合在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用

摘要

本发明公开了一种茴香醛/美罗培南或其联合在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用；本发明首次发现茴香醛对欧文氏菌生物被膜形成有抑制作用；美罗培南对欧文氏菌生长具有抑制抑制作用；茴香醛联合美罗培南能有效抑制欧文氏菌被膜的形成；并且茴香醛能增强美罗培南欧文氏菌的药敏性；预示着具有较好的预防和/或治疗欧文氏菌感染的农业药物中应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药技术，尤其涉及一种茴香醛/美罗培南或其联合在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用。

背景技术

细菌性软腐病是一种广泛存在于世界各地的植物病害，其侵染宿主范围广，主要以粮食作物和蔬菜为主。细菌性软腐病主要由欧文氏菌(Erwinia)引起，由欧文氏菌引起的粮食作物和蔬菜腐败造成了严重的经济损失。使用化学杀菌剂是防治欧文氏菌感染的主要途径，然而，化学杀菌剂的长期使用一方面造成了该菌产生耐药性，另一方面其药物残留也给人类健康造成了潜在危害。如何降低欧文氏菌耐药、减少化学杀菌剂的使用量，是当前科学界所面临的一大难题。

生物被膜的形成是欧文氏菌产生耐药的重要原因之一，抑制欧文氏菌生物被膜的形成是降低该菌产生耐药的重要途径。寻求生物被膜抑制剂与传统化学杀菌剂联合用药，既能降低欧文氏菌耐药，又能减少化学杀菌剂的使用剂量，是防治欧文氏菌感染的重要解决方案。

茴香醛(Anisic aldehyde，CAS登记号：123-11-5)是从香料八角茴香中提取出来的一种醛类物质，其结构如下：

茴香醛具有抗菌和抗肿瘤活性，但至今尚未见茴香醛防治欧文氏菌感染的研究。

美罗培南(CAS登记号：96036-03-2)是一种碳青霉烯类的抗生素，对于临床上常见的革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均有良好抗菌活性，常用于治疗对该药敏感细菌诱发的感染。其结构如下：

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种茴香醛/美罗培南或其联合在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用。

技术方案：本发明所述的茴香醛/美培罗南在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用。

进一步地，所述茴香醛通过抑制欧文氏菌生物被膜形成而达到预防和/或治疗感染的目的，茴香醛的终浓度为0.5-1μL/mL。

进一步地，所述美罗培南抑制欧文氏菌的生长而达到预防和/或治疗感染的目的，所述美罗培南MIC为0.5μg/mL。

本发明还提供一种茴香醛联合美罗培南在制备预防和/或治疗欧文氏菌感染药物中的应用。

进一步地，所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌的生长而达到预防和/或治疗感染的目的。

进一步地，所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌的生长而达到预防和/或治疗感染的目的中，茴香醛的终浓度为0.5-1μL/mL，美罗培南的终浓度为0.125-0.5μg/mL。

进一步地，所述所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌的生长而达到预防和/或治疗感染的目的中，茴香醛的终浓度为0.25-1μL/mL，美罗培南的终浓度为0.25-0.5μg/mL。

进一步地，所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌生物被膜形成而达到预防和/或治疗感染的目的。

进一步地，所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌生物被膜形成而达到预防和/或治疗感染的目的中，茴香醛的终浓度为0.5-1μL/mL，美罗培南的终浓度为0.125-0.25μg/mL。

进一步地，所述所述茴香醛联合美罗培南通过抑制欧文氏菌生物被膜形成而达到预防和/或治疗感染的目的中，茴香醛的终浓度为0.5-1μL/mL，美罗培南的终浓度为0.25μg/mL。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著的优点：

(1)茴香醛对欧文氏菌生物被膜形成有抑制作用；美罗培南对欧文氏菌生长具有抑制抑制作用。

(1)茴香醛能增强美罗培南对欧文氏菌的药敏性。

(2)茴香醛联合美罗培南能有效抑制欧文氏菌生物被膜的形成，预示着具有较好的预防和/或治疗感染欧文氏菌的农业药物应用前景。

附图说明

图1为茴香醛/美罗培南或其联合对欧文氏菌生长的抑制作用；

图2为茴香醛/美罗培南或其联合抑制欧文氏菌生物被膜的形成。

具体实施方式

下面结合实施例对发明的技术方案作进一步说明。

实施例1

对欧文氏菌生长的抑制作用：

药物：茴香醛由香料植物八角茴香分离提取获得。本领域技术人员采用的茴香醛可直接购置于上海源叶生物科技有限公司。美罗培南可直接购置于上海源叶生物科技有限公司。

菌株：欧文氏菌由江南大学姚卫蓉教授赠送。

挑取欧文氏菌单菌落接种到LB培养基中，28℃、180rpm培养17h。取培养好的菌液5μL接种到5mL新鲜的LB培养基中，同时分别加入终浓度为0.25、0.5、1μL/mL的茴香醛(Ana)，终浓度为0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5μg/mL的美罗培南，以及不同浓度的茴香醛与美罗培南的联合用药，以DMSO代替美罗培南为阴性对照，其中-Ana代表茴香醛浓度为0μL/mL，28℃、180rpm培养12h。培养后的菌液用多功能酶标仪测定OD

试验结果：如图1所示，DMSO对照组结果显示，单独使用0.25、0.5、1μL/mL浓度的茴香醛对欧文氏菌生长抑制作用较弱。单独使用美罗培南时对欧文氏菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.5μg/mL。

当美罗培南与1μL/mL的茴香醛联合用药时，美罗培南的MIC由0.5μg/mL降低到0.125μg/mL；0.5μL/mL的茴香醛虽然不能降低美罗培南对欧文氏菌的MIC值，但能显著增强美罗培南对欧文氏菌的抑制效果。

实施例2

对欧文氏菌生物被膜形成的抑制作用：

挑取欧文氏菌单菌落接种到LB培养基中，28℃、180rpm培养17h。取培养好的菌液以0.1％的接种量接种到TSB培养基中(含1％甘油)，混匀后分别加入终浓度为0.5和1μL/mL的茴香醛，终浓度为0.125和0.25μg/mL的美罗培南，以及不同浓度的茴香醛与美罗培南的联合用药，以DMSO代替美罗培南为阴性对照，其中-Ana表示茴香醛浓度为0μL/mL。取各处理组的混合菌液1mL加入到24孔板中，28℃静置培养24h。吸去上层培养液，用PBS水洗3遍，洗去浮游的细菌，置于60℃烘箱中烘干水分，加入200μL甲醇固定15min。吸去甲醇，60℃烘箱中干燥。加入100μL 0.05％的结晶紫染色15min。吸去结晶紫，PBS水洗3遍，去掉多余的未附着的结晶紫染料，放入60℃烘箱中干燥。干燥后加入200μL 95％乙醇，摇床中37℃、180rpm脱色15min。取150μL脱色液，酶标仪测定OD

试验结果：如图2所示，DMSO对照组结果显示，单独使用浓度为0.5和1μL/mL的茴香醛处理后，能显著抑制欧文氏菌被膜的形成，其抑制率分别为20％和31％。

单独使用美罗培南浓度为0.125和0.25μg/mL时对被膜没有抑制作用。

当美罗培南与茴香醛联合用药后，其对欧文氏菌被膜的抑制作用显著增强。茴香醛与0.125μg/mL的美罗培南联合用药时，被膜的抑制率分别为51％和86％，而当茴香醛与0.25μg/mL的美罗培南联合用药后，被膜的抑制率提高到88％和93％。