一种不受外源生长素调控的外生菌根真菌菌株

摘要

本发明公开的一种不受外源生长素调控的外生菌根真菌菌株，该菌株分类命名为橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY‑9)，所述橙黄硬皮马勃的保藏编号为CCTCC M20221812。本发明的橙黄硬皮马勃菌株不受外源生长素的影响，从宿主植物角度研究外源生长素如何调控外生菌根发育时，排除了外源激素对外生菌根真菌生长的调控作用对菌根发育的影响，仅从宿主植物角度探究生长素在菌根发育中的调控作用。

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，更具体地，涉及一种不受外源生长素调控的外生菌根真菌菌株。

背景技术

外生菌根真菌能与6000多种木本植物根系形成共生体(菌根)，对提升植物抗逆性，促进养分吸收具有重要作用。外生菌根共生机制成为近年来研究热点，Liao等人研究表明生长素是菌根形成过程中不可缺少的响应因子。对于生长素在菌根发育过程中的作用研究通常通过外源添加生长素或其抑制剂观察菌根侵染率作为基础判断。

然而，添加外源激素可同时调控宿主植物和真菌的生长。若要从宿主植物角度来探讨菌根共生过程中外源激素的调控作用，关键在于排除外源激素对外生菌根真菌生长的调控作用对菌根发育的影响。因此，开展不受生长素调控的外生菌根真菌菌株筛选工作，对从宿主植物角度来探究外生菌根发育机理具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种不受外源生长素调控的外生菌根真菌菌株，其生长不受外源生长素影响。

本发明所述的菌株橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)已于2022年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M20221812，保藏地址：武汉大学保藏中心，邮编：430072。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种不受外源生长素调控的外生菌根真菌菌株，该菌株分类命名为橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)，所述橙黄硬皮马勃的保藏编号为CCTCC M20221812。

优选的，所述橙黄硬皮马勃的ITS rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1的序列如下所示：

GCCGGAACAAGGCCTAGGAGGTCCCCCGCCTCCGAAGCTTCGAACCCTTTGACACCGGTGTGCACCCGCCGTAGGTCCTTCGGGACCTATGTCTTCTCTTTCGAACTCGTATGTCTACAGAACGTATCGCGTCGCTCCGGCGACGGGCTAAAGCGCCCCCATACAACTTTCAGCAATGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGGACGCAGCGAATCGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGATTTTCCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATCGAAACCTCGAACCCAAAGCGTCCTTCGATCCGTCGGAGCTTTGTTTTCGGACCATGGGAGCATGCGGGCGGCGACGTCGGCTCTCCTCAAAAGCATTAGCTGTGGGCGTCGAGCCTTGCGCGACACACGGCCTCGTTCGACGTCGTAAACGATCGTCGTGGGCTGGAGGCGCGCGCGGACGGACTAGTCCCATGCTTCGCAACCTTCTGCGGGACGACCGCACGTAACCAAGGCTTGACCTCAAATCAGGCAGGACTACCCGCCGAACTTAAGCATATCAAAAGGCGGAGGAACTCCTTTTGTCTCTCC

优选的，所述的橙黄硬皮马勃从板栗林下蘑菇子实体分离获得。

优选的，所述菌株不受生长素的影响。

优选的，所述生长素包括IBA。

优选的，所述菌株不受生长素抑制剂的影响。

优选的，所述生长素抑制剂包括TFIBA。

本发明的有益效果为：本发明的橙黄硬皮马勃菌株不受外源生长素的影响，从宿主植物角度研究外源生长素如何调控外生菌根发育时，排除了外源激素对外生菌根真菌生长的调控作用对菌根发育的影响，仅从宿主植物角度探究生长素在菌根发育中的调控作用。

附图说明

图1的1a是橙黄硬皮马勃(LY-9)在不同浓度IBA下生长21d的菌落直径，1b是橙黄硬皮马勃(LY-9)在不同浓度IBA下生长21d的菌丝干质量。

图2的2a是不同菌株在不同浓度IBA下生长21d的菌落直径，2b是不同菌株在不同浓度IBA下生长21d的菌丝干质量。

图3是橙黄硬皮马勃(LY-9)在不同浓度TFIBA下生长21d的菌落直径。

图4是橙黄硬皮马勃(LY-9)的菌丝图。

图5中5A为橙黄硬皮马勃在IBA下的生长情况；5B为橙黄硬皮马勃在TFIBA下的生长情况。

图6为5个外生菌根真菌菌株在不同浓度IBA下生长21d的菌落直径，从A至E依次为中华豆马勃(Pisolithus orientalis LY-8)、橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)硬皮马勃属的2个未知种(Scleroderma sp.1LY-17-2和Scleroderma sp.2LY-20-2)、土生空团菌(Cenococcum geophilum CG)。

具体实施方式

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

本发明中橙黄硬皮马勃菌株在MMN培养基中菌丝呈黄色，气生菌丝较稀疏，菌丝有隔，在30℃条件下生长最好。本实施例所用的MMN培养基的组成成分为：3g/L麦芽浸膏，10g/L葡萄糖，0.25g/L(NH4)2HPO4，0.5g/L KH2PO4，0.15g/L MgSO4·7H2O，0.05g/LCaCl2，1.2mL 1％ FeCl3，0.025g/L NaCl，0.1g/L VB1，13g/L琼脂粉，去离子水，pH 5.5～5.7。IBA及TFIBA浓度分别为：0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100μM，使用前先用100％乙醇溶解备用。

本发明的橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)的菌丝图如图4所示，图中标尺＝100μm。

图5A为橙黄硬皮马勃在IBA下的生长情况；图5B为橙黄硬皮马勃在TFIBA下的生长情况，其中IBA/TFIBA浓度从左到右依次为0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100μM。

图6为5个外生菌根真菌菌株在不同浓度IBA下生长21d的菌落直径，从A至E依次为中华豆马勃(Pisolithus orientalis LY-8)、橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)硬皮马勃属的2个未知种(Scleroderma sp.1LY-17-2和Scleroderma sp.2LY-20-2)、土生空团菌(Cenococcum geophilum CG)；其中IBA浓度从左到右依次为0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100μM。

实施例1

本发明从板栗林下蘑菇子实体通过分离纯化得到外生菌根真菌菌株橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum LY-9)。

用橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum)接种于MMN培养基，在30℃下培养21天。将获得的培养物分别接种于含有：0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100μM IBA的MMN固体和液体培养基中培养，该培养基预先已经在121℃下消毒15分钟。接种后，分别将固体和液体放置于恒温培养箱和振荡培养机中培养(160r/min)，培养周期为21天，分别测定菌落直径(每隔7d测定一次)和菌丝生物量，测试结果如图1所示。

由图1可知，各浓度下的LY-9菌落直径和菌丝生物量之间均没有显著差异(P>0.05)。由此可知橙黄硬皮马勃菌株不受生长素IBA的影响。

实施例2

用其它4株外生菌根真菌菌株中华豆马勃(Pisolithus orientalis LY-8)、硬皮马勃属的2个未知种(Scleroderma sp.1LY-17-2和Scleroderma sp.2MB)、土生空团菌(Cenococcum geophilum CG)分别在在30℃下培养21天。将获得的培养物接种于含有：0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100Μm IBA的MMN固体和液体培养基中培养，该培养基预先已经在121℃下消毒15分钟。接种后，分别将固体和液体放置于恒温培养箱和振荡培养机中培养(160r/min)，培养周期为21天，分别测定菌落直径(每隔7d测定一次)和菌丝生物量，测试结果如图2所示。

由图2可知，橙黄硬皮马勃菌株在不同IBA浓度下的菌落直径和菌丝生物量无显著差异，且生长较好。

实施例3

用橙黄硬皮马勃(Scleroderma citrinum)接种于MMN培养基，在30℃下培养21天。将获得的培养物接种于含有：0μM、0.1μM、1μM、10μM、50μM、100μM TFIBA的MMN固体和液体培养基中培养，该培养基预先已经在121℃下消毒15分钟。接种后，分别将固体和液体放置于恒温培养箱和振荡培养机中培养(160r/min)，培养周期为21天，分别测定菌落直径(每隔7d测定一次)和菌丝生物量，测试结果如图3所示。

由图3可知，各浓度下的橙黄硬皮马勃菌落直径和菌丝生物量之间均没有显著差异，由此可知橙黄硬皮马勃菌株不受生长素抑制剂TFIBA的影响。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。