外生菌根真菌乳牛肝菌属内不同菌株分子鉴定及遗传关系研究

摘要

选取分离于不同地点、不同宿主的子实体或菌根的27株乳牛肝菌属真菌，使用ITS-RFLP和rDNA ITS序列分析对其进行分子鉴定和遗传多样性研究，并构建进化树对其系统发育进行探究。经序列比对分析，SP1、SP2、SP3、SP4、SP5、SP6、SP7、SP8、SP9、SF1、SF2、sF3、P.Lac-1、P.Lac-2、3′、3″、3＃属于褐环乳牛肝菌(Suillus. luteus)。根据序列相似系数将27株乳牛肝菌属真菌分为3个遗传类型。ITS-RFLP方法将27株乳牛肝菌属真菌分为两个酶切图谱，序列分析结果和酶切图谱基本吻合，樟Ⅱ和1″与其余菌株的遗传距离较大，其原因可能是宿主和生境的影响。序列分析方法能够更准确地分析出遗传差异，但ITS-RFLP方法更简单、实用，可以用于初步的菌株鉴定。两种方法结合可以更有效和准确的研究外生菌根真菌的分子鉴定和遗传多样性。

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声明

1引言

1.1菌根及外生菌根概述

1.2乳牛肝菌属真菌概述

1.3分子生物学在外生菌根研究中的应用

1.3.1 RAPD在外生菌根分子鉴定和遗传关系研究中的应用

1.3.2 AFLP在外生菌根分子鉴定和遗传关系研究中的应用

1.3.3 RFLP在外生菌根分子鉴定和遗传关系研究中的应用

1.3.4 rDNA序列分析在外生菌根分子鉴定和遗传关系研究中的应用

1.4本研究意义和目的

2实验材料

2.1供试菌株

2.2供试培养基

2.2.1 PACH平板培养基

2.2.2LB培养基

2.3试剂及配方

2.4主要实验仪器

3实验方法

3.1总DNA提取

3.2 PCR扩增rDNA ITS区段

3.3 PCR扩增产物的纯化

3.4 ITS-RFLP方法

3.5 PCR扩增产物的克隆及测序

3.6供试菌株ITS区序列分析与鉴定

4结果与分析

4.1 PCR扩增产物的检测与分析

4.2 ITS-RFLP图谱结果与分析

4.3 27株乳牛肝菌属真菌测序结果

4.4 27株乳牛肝菌属真菌分子鉴定结果

4.5序列同源性和聚类分析结果

4.6系统发育分析结果

5结论

6讨论

7展望

致谢

参考文献

附录

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