一种凝胶渗透色谱表征滴眼液中聚乙烯醇及聚维酮分子量分布的分析方法

摘要

本发明属于分析技术领域，具体涉及一种用凝胶渗透色谱(GPC)表征含有聚维酮的聚乙烯醇滴眼液中两者相对分子量及其分布，并确定聚维酮型号的研究方法，采用液相色谱仪，串联Waters Ultrahydrogel保护柱和两根Waters Ultrahydrogel凝胶柱，采用RID示差折光检测器，以磷酸水溶液为流动相，采用五种不同分子量的聚乙烯醇为标准品，通过GPC软件得到的logMw‑洗脱时间的标准曲线计算得出聚乙烯醇样品的相对分子质量及其分布，并根据聚维酮不同K值对应的分子量确定聚维酮的型号。本发明所使用的方法选择了较为理想的分析方法，并给出了较为理想的前处理方案，此方法便于逆向解析制剂中聚乙烯醇和聚维酮的分子量范围及型号，具有成本低、简单易行、稳定性及重现性好的优点。

说明书

技术领域

本发明属于分析技术领域，具体涉及一种用凝胶渗透色谱(GPC)表征含有聚维酮的聚乙烯醇滴眼液中两者相对分子量及其分布，并确定聚维酮型号的研究方法。

技术背景

聚乙烯醇滴眼液临床用于预防或治疗眼部干涩、异物感、眼疲劳等刺激症状或改善眼部的干燥症状。聚维酮在药剂中应用广泛，在眼用制剂中常用于增稠剂，聚维酮不同的聚合度导致聚合物不同的分子量，分子量可用聚维酮水溶液相对于水的黏度来表征，以K值来表示，K值在10～120之间。聚乙烯醇和聚维酮同属高分子化合物，目前市面上含有聚维酮的聚乙烯醇滴眼液中聚乙烯醇和聚维酮的分子量不一，因此，对含有聚乙烯醇滴眼液中聚乙烯醇及聚维酮的分子量测定显得尤为重要，传统的分子量检测方法有热力学法、粘度法、光学法、端基分析法等只能检测聚合物的数均分子量且对环境因素要求敏感，而质谱法和激光散射法成本大，操作要求高，且鉴于此提出凝胶渗透色谱法检测聚乙烯醇滴眼液中聚乙烯醇的分子量分布，确定聚维酮型号，确保聚乙烯醇滴眼液产品在研发和生产过程中的质量稳定性。

发明内容

针对现有技术的局限性，本发明提供了一种用凝胶渗透色谱(GPC)表征聚乙烯醇滴眼液中聚乙烯醇相对分子量分布及聚维酮型号的分析检测方法。

实现本发明上述目的技术方案为：

以聚乙烯醇标准品为标样建立相对分子量标准曲线，以磷酸水溶液水溶液为流动相，采用凝胶色谱仪检测，具体步骤如下：

(1)样品溶液配制：精密量取适量聚乙烯醇滴眼液(约含聚乙烯醇5mg)，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为样品溶液；

(2)GPC标定-窄分布标样校正法：依次精密称取重均分子量Mw从55200至207700的五个聚乙烯醇标准样品配制成0.5mg/ml的分子量标准品溶液；上机分析，然后利用GPC软件输入各标准样品的Mw值，得到聚乙烯醇相对分子量标准曲线；

(3)凝胶渗透色谱仪分析：将处理好的标样及样品放入自动进样品中，以磷酸水溶液水溶液为流动相，流速为0.7ml/min，柱温为40℃，检测器为示差检测器(RID)，色谱柱为Waters Ultrahydrogel凝胶柱，进样量为100μl进行数据采集，以上述聚乙烯醇标样数据建立相对分子量标准曲线，通过GPC软件计算，对样品相对分子量分布，并根据聚维酮不同K值对应的分子量确定聚维酮的型号。

优选的，步骤(2)中依次精密称取重均分子量Mw分别是55200、85500、102060、167500、207700的聚乙烯醇标准样品，用水溶解为浓度为0.5mg/ml的系列标准溶液。

优选的，步骤(2)中，绘制logMw-洗脱时间的标准曲线。

优选的，所述的软件为岛津凝胶渗透色谱仪自带GPC。

优选的，步骤(3)中色谱柱为Waters Ultrahydrogel保护柱串联两根凝胶柱，Waters Ultrahydrogel 1000和Waters Ultrahydrogel500；柱长300mm、内径7.5mm。

优选的，步骤(3)中各种级别的聚维酮分子量不同，根据分析得到的聚维酮分子量确定聚维酮的型号。

本发明所使用的方法选择了较为理想的分析方法，并且给出了理想的前处理方案，选择过程中考察了纯水、磷酸水溶液、硝酸钠三种流动相与溶剂，磷酸水溶液对聚乙烯醇和聚维酮的分离度最佳；水溶剂对样品中的聚维酮和聚乙烯醇的出峰没有干扰，最终选定磷酸水溶液水溶液为凝胶渗透色谱流动相，以水溶液为溶剂，同时考察了前处理过程中不同的加热温度及时间对样品溶解性和分子量的影响，最终确定了上述方法，获得的检测数据有较好的重现性，具有简单易行、准确度高且重复性好的特点。

附图说明

图1为聚乙烯醇标样的色谱流出图。

图2为聚维酮标样的色谱流出图。

图3为分子量系列的标准曲线图。

图4为凝胶渗透色谱分析聚乙烯醇滴眼液的GPC谱图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括根据具体实施方式的内容进行适当延伸。

实施例1

现有一聚乙烯醇滴眼液样品需要对其相对分子量及其分子量分布进行检测。

所采用的凝胶渗透色谱的条件为：流速为0.7ml/min，柱温为40℃，检测器为示差检测器(RID)，色谱柱为Waters Ultrahydrogel凝胶柱，进样量为100μl。

具体步骤如下：

1.样品溶液配制：精密量取适量聚乙烯醇滴眼液(约含聚乙烯醇5mg)，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为样品溶液。

2.相对分子量标准曲线的建立：以聚乙烯醇标准品为标样，购自Americanpolymer standards corporation，依次精密称取重均分子量Mw从55200至207700的五个聚乙烯醇标准样品配制成0.5mg/ml的分子量标准品溶液；上机分析，然后利用GPC软件输入各标准样品的Mw值，得到聚乙烯醇相对分子量标准曲线。

3.凝胶渗透色谱仪分析：将处理好的标样及样品放入自动进样品中，以磷酸水溶液水溶液为流动相，流速为0.7ml/min，柱温为40℃，检测器为示差检测器(RID)，色谱柱为Waters Ultrahydrogel凝胶柱，进样量为100μl进行数据采集，以上述聚乙烯醇标样数据建立相对分子量标准曲线，通过GPC软件计算，对样品相对分子量分布，并根据聚维酮不同K值对应的分子量确定聚维酮的型号。

本实例中聚乙烯醇滴眼液样品中聚乙烯醇和聚维酮分子量测定结果如表1，表2所示：

表1 聚乙烯醇相对分子质量

表2 聚维酮相对分子质量

4.重现性实验：精密移取适量聚乙烯醇滴眼液样品用水稀释(和步骤1一样的样品)，配制成浓度为0.5mg/mL的样品溶液，分别置于三个样品瓶中，按步骤3进行分析测定。具体测定数据见表3，表4。

表3 聚乙烯醇相对分子质量

表4 聚维酮相对分子质量

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。