柴胡的检测方法及其在质量控制中的应用

摘要

本发明公开一种柴胡的检测方法及其在质量控制中的应用，属于中药材质量检测和控制技术领域，包括以下步骤：S1：参照物溶液的制备；S2：供试品溶液的制备；S3：色谱条件与系统适用性试验；S4：测定法。本发明摸索供试品溶液制备时，提取体征图谱，温浸时间、温浸温度、未温浸，从而确定制备过程不温浸；对供试品的取用量、加水量、初馏液、重馏液体积进行对比优化，确定称样量200g，加水量1800ml，初馏液800ml，重馏液200ml；对柴胡药材增加特征图谱检验及峰5比值，让方法更完善、全面、更严格，提高药材质量。

说明书

技术领域

本发明涉及中药材质量检测和控制技术领域，特别涉及一种柴胡的检测方法及其在质量控制中的应用。

背景技术

柴胡是伞形科的一种宿根草本植物，是常用的解表药，有和解表里，疏肝，升阳的功效，用于感冒发热，寒热往来，疟疾，肝郁气滞，胸肋胀痛、脱肛、子宫脱落、月经不调等。为更好的提升产品质量，需从源头做起，严把药材进厂检验质量关，现有药材检查存在的缺陷，1.药材标准未对特征图谱及峰5比值进行控制；2.采用柴胡注射液质量标准对药材进行提取，费时费力。因此，需要研发一种柴胡的检测方法，以便对药材质量进行控制。

公开号为CN 103529158 A的专利文献公开了一种全程监控柴胡口服液质量的方法，在该方法中第一步是构建柴胡药材、中间体浸膏和柴胡口服液成品的指纹图谱；第二步是测定柴胡药材、中间体浸膏和柴胡口服液成品的指纹图谱；第三步是柴胡药材、中间体浸膏和柴胡口服液成品的指纹图谱与标准指纹图谱比较，柴胡药材的整体相似度符合要求的作为原料进行生产，中间体浸膏的指纹图谱与其标准指纹图谱的整体相似度符合要求的进入下一道工序，柴胡口服液成品中指纹图谱与其标准指纹图谱的整体相似度符合要求的作为合格品出厂。该方法可从药材到中间体浸膏再到成品的全程质量监控，使生产工艺更容易控制，调整也更科学、合理，最终使成品的质量达到稳定、一致。但是，该方法仅仅通过指纹图谱进行比较，不够精确。

公开号为CN 111089913 A的专利文献一种南柴胡注射液的质量控制方法，包括步骤有：气相色谱法建立南柴胡注射液对照指纹图谱、测定各品种柴胡注射液检测样品的指纹图谱、计算检测样品的相似度、考察目标峰与参照物峰峰面积比值、检查是否符合要求，该方法通过建立南柴胡注射液的指纹图谱，应用指纹图谱和含量测定对南柴胡注射液的质量进行质控，具有重复性好，稳定性高等优点，可有效监控南柴胡注射液的质量，提升南柴胡注射液临床使用的稳定性和安全性。该方法是对柴胡注射液进行检测，无法对柴胡药材原料的质量进行监控，且该方法采用两个峰的峰面积进行对比，成本高，效率有待提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种柴胡的检测方法及其在质量控制中的应用，作为柴胡药材进厂检验验收的依据，对药材的质量提出更高的要求，做到对购进的药材项目更严格控制。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种柴胡的检测方法，包括以下步骤：

S1：参照物溶液的制备：取正己醛对照试剂适量，精密称定，加二甲基甲酰胺，制成每1ml含25mg的溶液，再用含0.3％聚山梨酯80与0.9％氯化钠的溶液稀释至每1ml含5μg的溶液，精密量取1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，制成参照物溶液；

S2：供试品溶液的制备：取北柴胡适量剪段，称取100-200g，置圆底烧瓶中，加水1100-2200ml，置电热套中，加热经蒸馏，连接回流冷凝管，用圆底烧瓶收集初馏液；将初馏液，再重新蒸馏，收集重馏液，摇匀，精密量取本品1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，得到供试品溶液；

S3：色谱条件与系统适用性试验：以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷HP-5为固定相的毛细管柱，柱温为程序升温，初始温度为35℃，保持2分钟，以每分钟1℃升温至40℃，保持2分钟，以每分钟3℃升温至60℃，保持3分钟，以每分钟7℃升温至200℃，保持3分钟；用氢火焰离子化检测器检测，检测器温度260℃；进样口温度230℃，分流进样，分流比为20:1；载气为氮气，流速为每分钟1.0ml；顶空进样，顶空瓶平衡温度85℃，平衡时间为15分钟，进样阀温度100℃，传输线温度115℃；顶空瓶充压时间0.2分钟，定量环填充时间0.2分钟，定量环平衡时间0.5分钟，进样时间1.0分钟；理论板数按正己醛峰计算不低于40000；

S4：测定法：分别精密量取参照物溶液和供试品溶液顶空瓶气体，注入气相色谱仪，测定。

进一步的，所述步骤S2：供试品溶液的制备：取北柴胡适量剪段，称取200g，置圆底烧瓶中，加水1600-2200ml，置电热套中，加热经蒸馏，连接回流冷凝管，用圆底烧瓶收集初馏液800ml；将初馏液800ml，再重新蒸馏，收集重馏液200ml，摇匀，精密量取本品1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，得到供试品溶液。

进一步的，所述步骤S2：供试品溶液的制备：取北柴胡适量剪段，称取200g，置圆底烧瓶中，加水1800ml，置电热套中，加热经蒸馏，连接回流冷凝管，用圆底烧瓶收集初馏液800ml；将初馏液800ml，再重新蒸馏，收集重馏液200ml，摇匀，精密量取本品1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，得到供试品溶液。

进一步的，所述步骤S3：色谱条件与系统适用性试验：毛细管柱的柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚度为0.25μm。

进一步的，所述的柴胡的检测方法在质量控制中的应用，测得供试品特征图谱中有6个特征峰，其中一个色谱应峰与正己醛参照物峰保留时间相同，与正己醛参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间。

进一步的，所述的柴胡的检测方法在质量控制中的应用，规定峰1相对保留时间为0.301，峰2相对保留时间为0.317，峰3相对保留时间为0.331，峰4相对保留时间为0.586，S峰相对保留时间为1.000，峰5相对保留时间为1.593。

进一步的，所述的柴胡的检测方法在质量控制中的应用，相对保留时间应在规定值的±8％之内。

进一步的，所述的柴胡的检测方法在质量控制中的应用，测得重馏液峰5与对参照物峰峰面积比值为1.522-3.161。

进一步的，所述的柴胡的检测方法在质量控制中的应用，重馏液峰5与对参照物峰峰面积比值越高，柴胡的疗效越好。

柴胡是一味常用的中药，味苦辛平，入心包、肝、三焦、胆经，有轻清、生散和疏泄的特点，能解表退热，疏肝解郁，升举阳气，在临床上使用很广泛，涉及中医内、外、妇、儿、五官、传染病、精神神经等各科，在中药饮片和中成药的生产中需求量很大。柴胡按产地可分为北柴胡和南柴胡，北柴胡清热解表之力偏强，南柴胡疏肝解郁之力偏强，出处不同，形色长短黑白不同，功用内外两伤主治也不同。相同产地的柴胡，在生长过程中受气候、土壤、光照、气温和降水等影响，得到的柴胡的品质也不同，柴胡药材质量的优劣直接影响临床用药的效果。为了提高药物的质量和疗效，需要在柴胡药材进厂时严格控制。

目前，常用的方法是抽样检验，依据国家药典标准、卫生部部颁标准、国家局局颁标准等。现有的检测方法大多是对柴胡皂苷含量进行测定，柴胡皂苷a、d的含量与柴胡的解热抗炎功效密切相关，因此所含柴胡皂苷a、d含量的多少常作为柴胡药材质量控制的重要指标，但是这种检测方法不够全面，缺乏特征图谱,理化特性的鉴别方法，具有一定的局限性，不足以从整体上控制柴胡的质量。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明柴胡药材增加特征图谱及峰5比值检验项目，柴胡药材现有标准执行2020年版《中国药典》一部中柴胡药材标准,未控制特征图谱和峰5比值，为更好的提升产品质量，需从源头做起，严把药材进厂检验质量关，予以在药材检测中增加特征图谱和峰5比值，并通过试验摸索数据药材加水量、初馏液及重蒸馏液的收集量，做到节能降耗，降本增效。

作为柴胡药材进厂检验验收的依据，对药材的质量提出更高的要求，做到对购进的药材项目更严格控制，本发明具有以下优点：

1、摸索供试品溶液制备时，提取体征图谱，温浸时间、温浸温度、未温浸，从而确定制备过程不温浸。

2、对供试品的取用量、加水量、初馏液、重馏液体积进行对比优化，确定称样量200g，加水量1800ml，初馏液800ml，重馏液200ml，这些关键代表性技术参数,节能降耗，降本增效。

3、对柴胡药材增加特征图谱检验及峰5比值，让方法更完善、全面、更严格，把先进的检验技术运用到日常检验中去，提高药材质量。

通过标准检验，可以初步考察上市药品的质量现状，同时也是对现行标准适用性的一次全面检查。根据各检验项目对药品质量控制的可行性以及标准执行过程中发现的问题，综合探索性研究结果有利于标准质量控制水平的进一步提高。

附图说明

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明。

图1为本发明对照特征图谱。

图2为本发明样品重馏液混合液峰5比值的折线图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合说明书附图，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本发明的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种柴胡的检测方法，包括以下步骤：

S1：参照物溶液的制备：取正己醛对照试剂适量，精密称定，加二甲基甲酰胺，制成每1ml含25mg的溶液，再用含0.3％聚山梨酯80与0.9％氯化钠的溶液稀释至每1ml含5μg的溶液，精密量取1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，制成参照物溶液；

S2：供试品溶液的制备：取北柴胡适量剪段，称取100或200g，置圆底烧瓶中，加水1100-2200ml，置电热套中，加热经蒸馏，连接回流冷凝管，用圆底烧瓶收集初馏液600-800ml；将初馏液600-800ml，再重新蒸馏，收集重馏液200ml，摇匀，精密量取本品1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，得到供试品溶液；

S3：色谱条件与系统适用性试验：以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷HP-5为固定相的毛细管柱(毛细管柱的柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚度为0.25μm)，柱温为程序升温，初始温度为35℃，保持2分钟，以每分钟1℃升温至40℃，保持2分钟，以每分钟3℃升温至60℃，保持3分钟，以每分钟7℃升温至200℃，保持3分钟；用氢火焰离子化检测器检测，检测器温度260℃；进样口温度230℃，分流进样，分流比为20:1；载气为氮气，流速为每分钟1.0ml；顶空进样，顶空瓶平衡温度85℃，平衡时间为15分钟，进样阀温度100℃，传输线温度115℃；顶空瓶充压时间0.2分钟，定量环填充时间0.2分钟，定量环平衡时间0.5分钟，进样时间1.0分钟；理论板数按正己醛峰计算不低于40000；

S4：测定法：分别精密量取参照物溶液和供试品溶液顶空瓶气体，注入气相色谱仪，测定。

测得供试品特征图谱中有6个特征峰，其中一个色谱应峰与正己醛参照物峰保留时间相同，与正己醛参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，相对保留时间应在规定值的±8％之内。规定值为：0.301(峰1)、0.317(峰2)、0.331(峰3)、0.586(峰4)、1.0000(峰S)、1.593(峰5)。

实施例1-5

表1验证对象

表2试剂及仪器的准备

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实施例1-5药材用量、加水量、收集初馏液体积、收集重馏液体积、重馏液峰5面积、重馏液比值及平均值见下表3。

表3实施例1-5

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对比例1-23

对比例与实施例相比，区别在于步骤S2：供试品溶液的制备：取北柴胡适量剪段，称取100g，置圆底烧瓶中，加水1100ml，置电热套中，70℃浸温13h，经蒸馏，连接回流冷凝管，用圆底烧瓶收集初馏液；将初馏液，再重新蒸馏，收集重馏液，摇匀，精密量取本品1ml，置10ml顶空瓶中，密封瓶口，得到供试品溶液。对比例1-23，浸温温度及时间情况、收集初馏液体积、收集重馏液体积及重馏液峰5比值见下表4。

表4对比例1-23

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通过设置不同的加水量进行对比，得到峰5比值，重馏液峰5与对参照物峰峰面积比值为1.522-3.161，结合附图2可以看出，各个实施例样品重蒸馏混合液峰5比值为2.5左右，说明200g柴胡，添加2200ml-1600ml的水，对测试结果影响差别不大，添加1800ml水，测出的峰5比值最大。对比例为100g柴胡，添加1100ml水，一部分进行70℃温浸13h，一部分没有进行温浸，收集不同体积的重馏液体，得到的峰5比值不同，对比例4-8可以看出，未温浸的得到的峰5比值优于温浸的。通过摸索供试品溶液制备时，提取体征图谱，温浸时间、温浸温度、未温浸，从而确定制备过程不温浸。对供试品的取用量、加水量、初馏液、重馏液体积进行对比优化，确定称样量200g，加水量1800ml，初馏液800ml，重馏液200ml。对柴胡药材增加特征图谱检验及峰5比值，让方法更完善、全面、更严格，把先进的检验技术运用到日常检验中去，提高药材质量。

虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。