大鼠脊髓一侧横断完整取材方法、脊髓损伤模型及应用

摘要

本发明涉及大鼠解剖，公开了一种大鼠脊髓一侧横断完整取材方法，包括以下步骤：S1、固定大鼠：选取脊髓受损的死亡大鼠，在实验台上通过固定装置将大鼠的头、四肢固定，使其保持趴卧姿势；S2、椎骨分离：用组织剪从大鼠脊椎骨之间的缝隙处进刀，进刀角度为向前向外10°～20°，将椎骨逐一剪断、分离椎骨，直至将所有椎骨分离结束；S3、脊髓分离：椎骨分离结束后将椎骨翻开，使椎骨与脊髓上的被膜分离，再使用弯镊将脊髓与残留在其上的椎骨分离，直至分离出完整的损伤段脊髓。本发明通过上述操作能够防止脊髓在剥离脊髓的过程中受损，以此来保证剥离出的脊髓的完整性。

说明书

技术领域

本发明涉及大鼠解剖，尤其是涉及一种大鼠脊髓一侧横断完整取材方法、脊髓损伤模型及应用。

背景技术

脊髓损伤是由高能量创伤引起脊柱骨折或脱位而导致的脊髓神经受损，目前世界范围内脊髓损伤导致的残疾达数百万人。损伤导致患者病损节段以下感觉、运动、自主神经功能缺失，造成社会和家庭沉重的负担。由于SCI后的病理生理机制复杂，目前疗效尚不理想。制作动物SCI模型来研究人类SCI机制及其治疗方法是现阶段研究SCI的主要手段。动物模型应反映人类SCI的临床病理过程和模式，并满足可重复、标准化的要求，也应允许进一步深入研究病理、生理及其他变化。

医学大鼠常被拿来进行临床研究，在对大鼠的脊髓研究中，打开脊柱椎管是剥离脊髓的前提，而如何快速、完整的打开医学大鼠的椎管，充分暴露脊髓，完整剥离脊髓，一直是一个难题。常用的脊髓提取法的不足:脊髓外围有坚硬的椎骨包围,椎管与脊髓的空隙较狭小,脊髓又是比较柔软的组织,这使得提取脊髓组织变得困难。现有的研究大都集中于脊髓背角或脊髓背根神经节，而脊髓背角极易破坏，需要操作者非常小心，这更加剧了脊髓提取的难度。因此，常用的脊髓提取法操作复杂，一不小心就可能破坏组织的完整性，且需要的时间较长，这对于需要提取新鲜组织的实验非常不利。因此需要一种新的方法来将脊髓完整的进行剥离。

发明内容

本发明所要解决的主要技术问题是提供了一种大鼠脊髓一侧横断完整取材方法，能够将脊髓完整剥离，防止产生二次损伤。

为了解决上述技术问题，本发明一方面提供了一种大鼠脊髓一侧横断完整取材方法，包括以下步骤：

S1、固定大鼠：选取脊髓受损的死亡大鼠，在实验台上通过固定装置将大鼠的头、四肢固定，使其保持趴卧姿势；

S2、分离椎骨：在大鼠头部齐平枕骨后断颈、剪头，再将椎骨边缘的肌肉组织剥离、修剪，修剪至断颈、剪头处，再将修剪好的脊椎剪下，完成椎骨的分离；

S3、分离脊髓：将脊椎背面朝上，从脊椎一侧下方的锥孔与脊髓之间的空腔缝隙处进刀，进刀角度为向前向外10°～20°，然后将脊椎一侧的椎弓逐一剪断，当将脊髓受损段的椎弓全部剪断后，再将剪断的椎骨向脊椎另一侧翻开，使椎骨与背面脊髓上的被膜分离，随后将周围神经根和腹面脊髓进行剥离，即可完整取出损伤段脊髓。

优选地，采用组织剪从大鼠脊椎左侧下方的锥孔与脊髓之间的空腔缝隙处进刀，所述组织剪的进刀角度为向前向外15°；采用小型弯镊将腹面脊髓和周围神经根分离。通过该优选技术方案，采用该进刀角度讲椎骨逐一剪断，能够最大限度的保证脊髓组织在分离过程中的完整性。

进一步优选地，S2中，大鼠椎骨边缘的肌肉组织修剪至断颈、剪头处向下2-2.5cm。

优选地，所述组织剪的进刀位置为椎骨背面，并且远离脊髓的损伤部位一侧进刀。

通过上述优选技术方案，由于受损处的脊髓相对于未受损的脊髓可能受损的概率更高，因此为了避免受损处的脊髓在分离的过程中可能产生二次受损，因此采用上述的进刀方式来将椎骨进行分离能够尽可能规避在分离过程中脊髓的受损，保证脊髓剥离的完整性。

进一步优选地，使用所述组织剪沿直线将所述脊椎左侧的椎弓逐一剪断，采用咬骨钳将剪断的椎骨与背面脊髓上的被膜分离。通过该优选技术方案，采用组织剪沿直线将椎弓逐一剪断，再采用咬骨钳分离椎骨与背面脊髓上，以此来提高椎骨与脊髓进行剥离时的速度，提高取材的效率。

优选地，所述组织剪为圆头组织剪。通过该优选技术方案，采用圆头组织剪能够避免在进刀的过程中，组织剪的端部将脊髓划伤，从而影响到脊髓剥离的完整性。

进一步优选地，所述固定装置包括用于容纳所述大鼠的台板、以及用于固定大鼠头、四肢的绑带，所述台板能够在竖直方向上转动，且能够在任一转动角度上实现锁紧，以适应取材中不同进刀角度的需求。通过该优选技术方案，通过将固定装置设置为能够在竖直方向上进行转动调节，以此来适应不同进刀角度的需求，以此来提高实验人员在进行实验操作时的便捷性。

优选地，用于容置大鼠的所述台板内开设有多个通道，以能够通过多个所述通道将大鼠取材时流出的血液排出。通过该优选技术方案，通过在台板上开设多个通道，通过多个通道能够将大鼠取材实验时流出的血液排出，以此来保证实验环境的整洁。

本发明第二方面提供了一种脊髓损伤模型，包括本发明第一方面所提供的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法。

本发明第三方面提供了一种在脊髓损伤疾病中的应用，根据本发明第二方面所提供的脊髓损伤模型。

通过上述技术方案，本发明的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法，通过采用组织剪从大鼠脊椎骨左侧下方的锥孔与脊髓之间的空腔缝隙处进刀，进刀角度为10°～20°，然后将椎骨左侧的椎弓一一剪断并分离，然后将椎骨与背面脊髓上的被膜分离，随后将周围的神经根和负面脊髓进行玻璃，即可完整剥离出损伤段脊髓。通过上述操作能够防止脊髓在剥离脊髓的过程中受损，以此来保证剥离出的脊髓的完整性。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

图1为本发明具体实施方式的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法的流程示意图；

图2为本发明具体实施方式的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法的脊椎示意图。

附图标记

1A 脊髓损伤处 1B 进刀处

1C 剪切线

具体实施方式

以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置”、“连接”应做广义理解，例如，术语“连接”可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或者是一体连接；可以是直接连接，也可以是通过中间媒介间接连接，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

本发明的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法的一个实施例，如图1所示，大鼠脊髓的完整取材包括以下步骤：

S1、固定大鼠：选取脊髓受损的死亡大鼠，在实验台上通过固定装置将大鼠的头、四肢固定，使其保持趴卧姿势；

S2、分离椎骨：在大鼠头部齐平枕骨后断颈、剪头，再将椎骨边缘的肌肉组织剥离、修剪，修剪至断颈、剪头处，再将修剪好的脊椎剪下，完成椎骨的分离。

S3、分离脊髓：将脊椎背面朝上，从脊椎左侧下方的锥孔与脊髓之间的空腔缝隙处进刀，进刀角度为向前向外10°～20°，将脊椎左侧的椎弓逐一剪断，当将脊髓受损段的椎弓全部剪断后，再将剪断的椎骨向右翻开，使椎骨与背面脊髓上的被膜分离，随后将周围神经根和腹面脊髓进行剥离，即可完整取出损伤段脊髓。

所采用的实验大鼠购置湖南斯莱克景达实验动物有限公司。大鼠编号：DWGT-202203080846。

在对大鼠脊髓受损段完整取材前，需要使正常大鼠的脊髓受损，大鼠脊髓受损的方法采用RST横断术制作大鼠急性脊髓损伤模型，大鼠术前禁食8h，实验时随机抓取大鼠，在尾部进行标记后，运用Basso Beattie Bresnahan(BBB)方法及量表进行运动功能评分，大鼠腹腔注射10％水合氯醛(4ml/kg)麻醉，颈曲突向上俯卧位固定，在手术显微镜下分离软组织和浅层肌肉，可见大量肌肉附着在C2棘突上，去除C2棘突右侧附着的部分竖脊肌，暴露C3、C4椎弓及之间的黄韧带，切开黄韧带，暴露脊髓。确认脊神经背根，用12号手术刀片从背根相连处向外侧横断右侧半脊髓后外侧索，后逐层缝合肌肉，动物苏醒后可见右侧前肢屈曲，紧贴躯干，运动不协调，右前爪不能张开，表明造模成功。

取材时，将脊髓受损的大鼠处死，处死后，需要避免脊髓受损大鼠的脊髓二次受损，将脊髓受损的死亡大鼠通过固定装置固定住大鼠的头、四肢，使其保持趴卧姿势，椎骨背面面向实验人员，用剪刀在大鼠头部齐平枕骨后断颈剪头，再用剪刀剥离修剪脊椎边缘肌肉组织，修剪至从断头处往下2-2.5cm即可，再将修剪好的脊椎剪下，此段脊椎包含造模时的横断伤口。

此段脊髓1A和进刀处1B如图2所示，剥离脊髓时，先将脊椎背面朝上，用组织剪从左侧下方锥孔与脊髓之间的空腔缝隙处进刀，进刀角度为向前向外10°～20°，将脊椎左侧的椎弓逐一剪断，当将脊髓受损段的椎弓全部剪断后，使用咬骨钳将剪断的椎骨向右翻开，使椎骨与背面脊髓上的被膜分离，再使用小型弯镊剥离周围神经根和腹面脊髓，即可完整取出此段脊髓。

在对进刀角度的选择中，进刀角度优选为向前向外约15°，采用15°的进刀角度将椎骨逐一剪断能够最大限度的保证脊髓组织不受破坏，从而保证脊髓分离的完整性。

另外，将组织剪的进刀位置选择在椎骨的背面，并且远离脊髓的损伤部位一侧进刀。由于脊髓受损后，脊髓表面的活性以及延展性较小，因此在对脊髓进行分离的过程中需要尽可能避免对脊髓的受损段产生二次损伤。而将组织剪的进刀位置选择在椎骨背面，并远离脊髓损伤部分的一侧进刀，能够规避在进刀的过程中对受损处脊髓产生的作用力，使进刀时对脊髓产生的压力完全集中在相对于受损处脊髓的一侧，与受损处脊髓相对一侧的脊髓由于未受损，其活性以及表面延展性更好，因此能够更好的承受组织剪进刀时对脊髓产生的压力，以此来保证脊髓在剥离的过程中二次受损，保证脊髓的完整性。

在将椎骨与脊髓分离时，首先需要将脊髓受损段的椎弓全部剪断。采用组织剪如图2中所示的剪切线1C将脊椎一侧的椎弓逐一剪断，椎弓剪断的位置相对于脊髓受损一侧。将椎骨剪断后，再使用咬骨钳将剪断的椎骨向脊椎另一侧翻开，使得大块的椎骨与脊髓上的被膜分离。采用此种椎骨与脊髓的分离方式，能够大幅度的节约实验人员的操作时间，提高取材的效率。

在对实验器材的选择中，组织剪为圆头组织剪。由于新鲜的脊髓组织非常柔软，在进行剥离的过程中极易发生撕裂，从而产生毁坏组织的情况。因此，为了避免实验器材在脊髓分离的过程中对脊髓产生影响，采用圆头组织剪进刀时，组织剪的圆头部分相对于尖头组织剪，在进刀时对脊髓产生的压迫力更小。尖头组织剪在进刀的过程中，虽然能够通过尖头部分实现更加精准的操作，但是采用尖头组织剪在剪切的过程中，需要极其注意避免尖头组织剪在剪切的过程中造成脊髓损伤，而圆头组织剪的由于端部设置为圆弧状，因此在进行脊髓分离的过程中，组织剪圆弧状的端部不会对脊髓产生的较为集中的压力，从而能够有效避免在剪切的过程中圆头组织剪造成脊髓损伤，影响到脊髓的完整取材。

椎骨分离结束后，需要再将椎骨与脊髓进行分离，以得到完整的损伤段脊髓。首先需要将椎骨分离结束后的椎骨翻开，使得大块的椎骨与脊髓上的被膜之间分离，将大块的椎骨与被膜之间分离结束后，再采用小型弯镊将周围的神经根和腹面脊髓进行剥离，完全剥离后即可得到完整的损伤段脊髓。

为了方便实验人员对大鼠的脊髓进行完整取材，采用固定装置将大鼠进行固定。固定装置包括用于容纳大鼠的台板、以及用于固定大鼠头、四肢的绑带，并且台板能够在竖直方向上转动，且台板能够在任一转动角度上实现锁紧，以此来适应脊髓取材中不同进刀角度的需求，从而方便了实验人员能够从不同的角度进刀，以此来完成对于大鼠椎骨与脊髓的分离操作。

并且，在台板内还开设有多个通道，通过多个通道能够将大鼠脊髓取材时流出的血液排出，以此来避免在对大鼠进行脊髓分离时，大鼠流出的血液在实验台上流淌，从而影响到实验环境的整洁。

在本发明的脊髓损伤模型中，使用了本发明任一实施例的大鼠脊髓一侧横断完整取材方法，因而也具有上述优点。

脊髓损伤模型在脊髓损伤疾病中的应用，能够避免在脊髓分离的过程中产生的二次损伤。

在本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“一种实施方式”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本发明中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个具体技术特征以任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。但这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。