一种利用CRISPR/Cas12a体系可视化检测杭白菊黑斑病菌的方法

摘要

本发明提供了一种利用CRISPR/Cas12a体系可视化检测杭白菊黑斑病菌Alternaria alternata的方法，包括如下步骤：借助PCR技术对杭白菊黑斑病菌Alt特异性基因片段进行扩增；在crRNA的介导下，Cas12a可特异性识别扩增产物，并激活核酸酶活性，从而切割两端修饰有FAM和BHQ1的任意碱基序列ssDNA(Reporter)，形成FAM‑ssDNA片段与BHQ1‑ssDNA片段；FAM‑ssDNA和BHQ1‑ssDNA能在蓝光透射仪的照射下展现出荧光，由此实现对于杭白菊黑斑病菌Alt的检测。该方法操作简单便携，不依赖大型仪器设备，成本低廉，且灵敏度高、特异性强，具有一定的应用前景。