鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用

摘要

本发明提供了鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明选用无毒性浓度的鼠李柠檬素进行抗流感病毒药物的应用研究，通过空斑抑制实验发现鼠李柠檬素能在体外有效抑制甲型流感病毒A/PuertoRico/8/1934(H1N1)的复制，并呈现剂量效应相关性，针对MOI＝0.0004剂量的A/PuertoRico/8/1934(H1N1)流感病毒的IC

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用。

背景技术

流感(Influenza)是由流感病毒(Influenza virus)引起的急性呼吸道传染病，具有感染宿主广泛、传播迅速、致病率高等特点。其中甲型流感病毒容易引发流感大流行，对人类和动物的生命健康造成了严重的威胁。疫苗是预防流感的主要策略，但流感病毒的高度变异，疫苗研发的滞后性以及对不同流感毒株不能产生交叉保护作用等缺陷限制了疫苗的有效使用，抗流感病毒药物则成为流感病毒防控的又一重要手段。

目前，临床上可用的抗流感病毒药物包括M2离子通道抑制剂(如，金刚烷胺(Amantadine)、金刚乙胺(Rimantadine)和金刚烷衍生物(Adamantane derivative)、神经氨酸酶抑制剂(如，奥司他韦(Oseltamivir)、帕拉米韦(Palamivir))和扎那米韦(Zanamivir))以及RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase，RdRp)抑制剂(如，法匹拉韦(Favipiravir)和巴洛沙韦(Baloxavir))。M2离子通道抑制剂因多年使用已造成临床流行毒株对其耐药，神经氨酸酶抑制剂的耐药毒株也在日益增加。因此，迫切需要开发更多的新型高效抗流感病毒药物来应对流感疫情。

“老药新用”策略为开发新的药物节约了大量时间和资源成本。从已有小分子化合物中，筛选可能的抗病毒药物成分并完成体外抗病毒药物效果的验证，对于治疗病毒感染性疾病方面具有明显的优势和广阔的发展前景，由于其毒性较低，副作用较小，有着较为广泛的临床适用性。

鼠李柠檬素，英文名为Rhamnocitrin，是一种从黄芪中分离出的类黄酮物质。研究表明，鼠李柠檬素具有抗炎、抗氧化和抗动脉粥样硬化等作用，因此受到广泛关注。但有关鼠李柠檬素抗流感病毒的研究尚未见报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用，鼠李柠檬素能在体外显著抑制甲型流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的复制增殖，具有良好的体外抗流感病毒活性。

本发明提供了鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用。

优选的，所述抗流感病毒包括抑制流感病毒的复制增殖。

优选的，所述流感病毒包括甲型流感病毒。

优选的，所述甲型流感病毒包括甲型流感病毒H1N1。

优选的，所述鼠李柠檬素为所述药物中的唯一活性成分。

本发明还提供了鼠李柠檬素在制备预防和/或治疗流感的药物中的应用。

优选的，所述流感包括甲型流感。

优选的，所述甲型流感包括甲型流感病毒H1N1引起的甲型流感。

优选的，所述鼠李柠檬素为所述药物中的唯一活性成分。

本发明提供了鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用。本发明采用甲型流感病毒H1N1作为模式病毒，使用空斑抑制实验在MDCK细胞上评价了鼠李柠檬素的体外抗流感病毒药效学，探讨了鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的可能性，发现鼠李柠檬素能在体外显著抑制甲型流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的复制增殖，具有良好的体外抗流感病毒活性，为进一步开发广谱抗流感病毒的药物奠定了基础，具有重要的开发价值和推广意义。

附图说明

图1为鼠李柠檬素的化学分子结构示意图；

图2为鼠李柠檬素的细胞毒性检测结果；曲线图为不同浓度鼠李柠檬素作用下的MDCK细胞活性情况拟合曲线；横坐标为鼠李柠檬素的药物浓度，纵坐标为细胞存活率；结果显示，鼠李柠檬素在MDCK细胞中产生的药物50％细胞毒性浓度(HalfcytotoxicConcentration，CC

图3为不同浓度鼠李柠檬素对流感病毒病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的抗病毒效果；其中A为不同浓度鼠李柠檬素对A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)病毒复制的空斑抑制结果示意图；B为不同浓度鼠李柠檬素在MDCK细胞中对A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)病毒复制的抑制效果拟合曲线图。横坐标为鼠李柠檬素的药物浓度，纵坐标为空斑抑制率，其中方框深色点拟合的曲线表示对0.0004MOI剂量的流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)空斑点数的抑制效率。结果显示，鼠李柠檬素在MDCK细胞中可有效抑制A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的病毒复制，使用0.0004MOI剂量的流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)病毒复制效率受到50％抑制的药物半数有效浓度IC

具体实施方式

本发明提供了鼠李柠檬素在制备抗流感病毒药物中的应用。

在本发明中，所述抗流感病毒优选的包括抑制流感病毒的复制增殖。鼠李柠檬素在MDCK细胞中抑制流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的IC

在本发明中，所述流感病毒优选的包括甲型流感病毒；所述甲型流感病毒优选的包括甲型流感病毒H1N1。

在本发明中，所述鼠李柠檬素优选的为所述药物中的唯一活性成分。

本发明还提供了鼠李柠檬素在制备预防和/或治疗流感的药物中的应用。

在本发明中，所述流感优选的包括甲型流感；所述甲型流感优选的包括甲型流感病毒H1N1引起的甲型流感。

在本发明中，所述鼠李柠檬素优选的为所述药物中的唯一活性成分。

在本发明中，所述鼠李柠檬素的化学分子结构示如图1所示。

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如《分子克隆实验指南》(第三版，科学出版社，2005)等本领域常用工具书中所述的条件，或按试剂生产厂家所建议的条件进行。

实施例1：CCK-8法检测鼠李柠檬素的细胞毒性检测

本发明中涉及的流感病毒的敏感细胞系为MDCK细胞，为测试鼠李柠檬素的安全用药浓度，本研究使用CCK-8法检测了鼠李柠檬素在敏感细胞系MDCK中的毒性。

首先制备鼠李柠檬素储存液，1mL DMSO溶液溶解10mg鼠李柠檬素颗粒，配制成终浓度为10mg/mL的溶液，待完全溶解后，0.22μM过滤，置于4℃冰箱保存。之后，将MDCK细胞按照3×10

实施例2：空斑抑制法测定鼠李柠檬素的体外抗流感病毒活性效果

2.1空斑法测定流感病毒A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)的滴度

先配制微晶纤维素(Avicel)储存液，称取2.4gAvicel粉末溶于100mL蒸馏水中，用磁力搅拌器搅拌1h后，121℃高压灭菌30min，室温储存备用；使用2×DMEM高糖培养基配制1.2％浓度的Avicel，并加入终浓度2μg/mL的TPCK-胰蛋白酶作为覆盖层。将MDCK细胞按照2.5×10

2.2病毒感染与药物作用

将MDCK细胞按照2.5×10

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。