用于降低发展为非酒精性脂肪性肝病风险的婴儿配方物

摘要

本发明涉及用于婴儿的营养组合物，其用于降低处于发展为非酒精性脂肪性肝病风险的婴儿发展为非酒精性脂肪性肝病的风险。

说明书

技术领域

本发明涉及用于婴儿的营养组合物，特别是婴儿配方物、后续配方物(follow-onformula)或成长乳，其用于降低处于发展为非酒精性脂肪性肝病风险的婴儿发展为非酒精性脂肪性肝病的风险。

背景技术

对于婴儿营养物，人乳是无可争议的黄金标准。然而，在某些情况下，由于医疗原因或选择不进行母乳喂养，使得母乳喂养不充分或不成功。针对这种情况，已经开发了婴儿配方物或后续配方物。如今，市售婴儿配方物通常用于在生命早期提供补充或唯一的营养来源。这些配方物包含一系列营养素以满足成长中婴儿的营养需求，并且通常包括脂肪、碳水化合物、蛋白质、维生素、矿物质以及其他有助于最佳婴儿生长和发育的营养素。市售婴儿配方物旨在尽可能地模仿人乳的组成和功能。

已知人乳脂质具有由平均众数直径为约4μm的大脂质球组成的独特物理结构，其存在由三层膜、即乳脂球膜(MFGM)包覆的甘油三酯核。由于工业加工步骤，标准婴儿配方物中脂滴的众数直径通常为约0.3-0.5μm，以获得稳定且可重复的最终产品，并且脂滴不是被MFGM包围，而是主要被乳蛋白包围。已经记载了具有结构更类似于人乳中的脂质球的脂质球的婴儿配方物。

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在世界各地越来越普遍，尤其是在西方国家。在美国，它是最常见的慢性肝病形式，影响了大约四分之一的人群。虽然早在1850年代的文献中就可以找到对成人NAFLD的详细记载，但在1983年报道了首例小儿NAFLD。它现在是儿童和青春期最普遍的慢性肝病形式，影响西方世界大约10％-20％的普通儿科人群。

NAFLD是一个综合术语，指的是影响几乎不喝酒或不喝酒的人的一系列肝脏疾病。顾名思义，NAFLD的主要特征是肝细胞中储存的脂肪过多。孤立性脂肪变性，定义为超过5％的肝细胞中脂肪异常积聚，是一种相对良性的疾病。一些NAFLD个体可能会发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，这是一种侵袭性脂肪性肝病，其标志是肝脏炎症，并可能进展为晚期瘢痕形成(肝硬化)和肝功能衰竭。

NAFLD被认为是更广泛和潜在的代谢功能障碍的肝脏表现，并且与许多代谢危险因素密切相关，包括胰岛素抵抗、血脂异常、心血管疾病和肥胖。然而，对支撑这些关系的病理生理机制的理解仍然不完整。例如，肥胖的人并不总是会患上NAFLD，反之亦然，患有NAFLD的人并不总是超重或肥胖。

小儿NAFLD的临床发现使得人们猜测小儿NAFLD的起源可能在于早期宫内的接触。有迹象表明，与正常母亲的婴儿相比，肥胖和/或妊娠糖尿病母亲所生的人类婴儿的肝脏脂肪增加。

Brumbaugh等人[J Pediatr.2013，162(5)，930-936]记载了一项研究设计，其中25名新生儿，由体重正常的母亲(n＝13)和患有妊娠糖尿病(GDM)的肥胖母亲(n＝12)所生，接受MRI以测量皮下和腹内脂肪，并且磁共振波谱用于测量1-3周龄时的肝细胞内(IHCL)脂肪。与正常体重母亲所生婴儿相比，肥胖/GDM母亲所生婴儿的IHCL平均增加68％。对于所有婴儿，IHCL与母体孕前BMI相关，但与皮下肥胖无关。

Ayonrinde等人[J Hepatol.2017，67(3)，568-576]在西澳大利亚怀孕(Raine)队列研究(Western Australian Pregnancy(Raine)Cohort study)中诊察了母体因素和婴儿营养与随后诊断为青少年NAFLD的关系。在接受诊察的1,170名青少年中，有15.2％被诊断为NAFLD。94％的人在婴儿时期接受过母乳喂养。开始补充乳之前的母乳喂养时间为≥4个月的占54.4％，≥6个月的占40.6％。在不添加补充乳的母乳喂养为≥6个月的情况下，母体孕前肥胖和青少年肥胖与NAFLD相关，与17岁时的西方饮食模式无关。与母乳喂养＜6个月的青少年相比，母乳喂养≥6个月的NAFLD青少年的代谢不良情况较少。与6个月之后开始补充乳相比，6个月之前开始补充乳与NAFLD的更高患病率和超声严重程度相关。

有人认为，非酒精性脂肪性肝病编程在妊娠期间面临代谢健康挑战(如肥胖和GDM)的母亲的后代中。在存在此类挑战的情况下，妊娠环境会将增加的代谢燃料(metabolic fuel)输送至胎儿，从而导致胎儿肝脏脂肪堆积、免疫细胞启动、表观遗传变化(首次产生不良影响)。这种胎儿肝脏现在已经为产后脂肪储存和炎症“做好了准备”。生命后期的肥胖环境(第二次产生不良影响)引发进一步的脂肪变性、肝细胞损伤、炎症和纤维化，从而引发脂肪变性发展为脂肪性肝炎并最终形成肝硬化。如Brumbaugh等人在PediatrRes.2014，75(0)，140-147中所述。

Bruce等人[Hepatology 2009，50(6)，1796-808]记载了一项研究，其中雌性小鼠在妊娠和哺乳之前和期间喂食高脂肪(HF)或对照食物(C)饮食。由此产生的后代在断奶之后喂食C或HF饮食，以产生四个后代组；HF/HF、HF/C、C/HF、C/C。在15周龄时，C/C和HF/C后代的肝脏组织学均正常。Kleiner评分显示，虽然C/HF后代发展为了非酒精性脂肪性肝病，但HF/HF后代发展为了非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在30周时，组织学分析和Kleiner评分显示HF/C组和C/HF组均患有NAFLD，而HF/HF组患有更严重的NASH形式。因此，即使是仅在怀孕和哺乳期间接触HF食物并且从断奶之后仅喂食对照食物的后代，也会在30周时患上NAFLD。

Thorn等人[Diabetes 2014，63，2702-2713]记载了一项研究，其中他们诊察了母体对慢性母体高脂肪(HF)饮食的反应以及断奶之后健康饮食对1岁时幼年非人类灵长类动物(NHP)后代的NAFLD患病机制的影响。与喂食对照组(CON)的母亲相比，HF饮食的妊娠雌性被分为胰岛素抵抗(IR；HF+IR)或胰岛素敏感(IS；HF+IS)。HF+IR母亲具有增加的体重，增加的甘油三酯以及增加的胎盘细胞因子。断奶时，将后代置于CON或HF饮食中。只有来自HF+IR母亲的后代具有增加的肝脏甘油三酯，肝脏会重新进行脂质合成并且炎症通路上调，这在改用健康饮食后是不可逆的。Thorn等人观察到与来自HF+IS母亲的幼年后代(很大程度上类似于CON后代)不同，来自HF+IR母亲的后代表现出与NAFLD早期阶段一致的肝脏基因表达、细胞因子和脂肪生成反应模式。此外，Thorn等人观察到尽管没有产后肥胖、胰岛素抵抗或全身或局部脂肪组织炎症，但NAFLD表型仍然存在。Thorn等人得出的结论是，这些发现表明母体代谢功能障碍会影响NAFLD表型，并表明产后饮食可能无法逆转或纠正幼年后代的这种疾病。

WO 2010/0027258和WO 2010/0027259涉及具有被磷脂包覆的大脂质球的婴儿配方物，用于预防生命后期的肥胖。在这些文件中的实例中，观察到在生命后期接触西式饮食后，在生命早期食用被磷脂包覆的大脂质球的饮食的小鼠组和食用不含磷脂涂层的小球的对照饮食的小鼠组之间的肝脏重量差异。观察到，在生命早期食用含有磷脂涂层的大脂质球的饮食的小鼠组的肝脏重量略低。

本发明旨在提供婴儿营养物，其有益地影响处于发展为NAFLD风险的受试者发展为NAFLD的风险。

发明内容

本发明人惊奇地发现，在生命早期食用包含用磷脂包覆的大脂质球的营养组合物可防止在处于发展为NAFLD风险的受试者中，当与致肥胖环境接触之后在生命后期的肝脏中过度储存脂肪，因此降低生命后期发展为NAFLD的风险。

使用了一种小鼠模型，其中通过给母鼠喂食高脂肪饮食(以降低胰岛素敏感性)并将它们与三种温和的链脲佐菌素触发剂接触(以降低β细胞容量)来诱导母鼠中的GDM样表型。这些GDM母鼠的后代在生命早期被喂食根据本发明的营养组合物，即包含用磷脂包覆的大脂质球的营养组合物，或包含没有磷脂涂层的小脂质球的对照营养组合物。GDM母鼠的后代更多地具有发展为NAFLD的风险。在生命后期长期接触西式饮食(WSD)后，在生命早期喂食这两种营养组合物的后代的体重和肥胖率没有显著差异。然而，与喂食对照营养组合物的后代相比，在生命早期喂食根据本发明的营养组合物的后代中肝脏甘油三酯的量显著降低。由于两个后代组的能量摄入非常相似，出人意料地是，在生命早期喂食IMF中脂质球设计(具有PL涂层的较大脂质球)的差异对在生命后期受到挑战时的肝脏中过多的脂肪储存具有如此的保护作用。

这表明在生命早期食用根据本发明的营养组合物，即包含具有磷脂涂层的大脂质球，降低了处于发展为NAFLD风险的人群在生命后期发展为脂肪性肝病的风险。

因此，本发明涉及一种营养组合物，其选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳，用于降低选自人类受试者发展为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的风险，所述人类受试者选自：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有妊娠糖尿病(GDM)的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时对胎龄(LGA)而言偏大的婴儿；

所述营养组合物包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，其中所述脂质为脂质球形式，并且其中：

i.脂质球具有基于体积计的至少1.0μm的众数直径和/或基于总脂质体积计至少45体积％的脂质球具有2至12μm的直径；和

ii.脂质球在表面上至少部分地被磷脂包覆，存在于营养组合物中的磷脂的量基于总脂质计为0.5至20重量％的磷脂。

具体实施方式

对于一些司法管辖区，本发明还可以表述为脂质球在制造选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳的营养组合物的用途，其用于降低人类受试者发展为非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的风险，所述人类受试者选自：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有妊娠糖尿病(GDM)的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时对于其胎龄(LGA)而言偏大的婴儿；

其中营养组合物包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，其中脂质为脂质球的形式，并且其中：

i.脂质球具有基于体积计的至少1.0μm的众数直径和/或基于总脂质体积计至少45体积％的脂质球具有2至12μm的直径；和

ii.脂质球在表面上至少部分地被磷脂包覆，存在于营养组合物中的磷脂的量基于总脂质计为0.5至20重量％的磷脂。

对于一些司法管辖区，本发明还可以表述为一种降低人类受试者发展为非酒精性脂肪性肝(NAFLD)的风险的方法，所述人类受试者选自：

a.在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b.在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c.患有妊娠糖尿病(GDM)的母亲所生的婴儿；和

d.在出生时对于其胎龄(LGA)而言偏大的婴儿；

所述方法包括给所述人类受试者喂食营养组合物，所述营养组合物选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳，所述营养组合物包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，其中所述脂质为脂质球的形式，并且其中：

i.脂质球具有基于体积计的至少1.0μm的众数直径和/或基于总脂质体积计至少45体积％的脂质球具有2至12μμm的直径；和

ii.脂质球在表面上至少部分地被磷脂包覆，存在于营养组合物中的磷脂的量基于总脂质计为0.5至20重量％的磷脂。

在本发明的上下文中，婴儿配方物或后续配方物不是天然的牛乳或人乳。

在本发明的上下文中，成长乳也可以称为幼儿配方物。

在本发明的上下文中，在受孕时超重或肥胖的母亲是基于母亲在怀孕之前的BMI。在一个实施方案中，怀孕之前的BMI定义为在受孕之前至少六个月的时间段内测量的BMI。

在本说明书中，下述术语具有如下赋予它们的含义(Chiu M等人Diabetes Care，2011，34：1741-1748)：

如本文所使用的，术语“BMI”定义为体重除以身高的平方，并以kg/m

本文中的术语“体重过轻”、“正常体重”、“超重”和“肥胖”定义如下：体重过轻对所有女性而言定义为BMI＜18.5kg/m

在本发明的上下文中，“在受孕时患有糖尿病的母亲”是由卫生保健专业人员诊断出患有1型糖尿病或2型糖尿病的母亲。在本发明的上下文中，1型或2型糖尿病的诊断由卫生保健专业人员最迟在怀孕婴儿过程中的孕早期(the 1sttrimester)结束时进行。优选地，在受孕时患有糖尿病的母亲是患有2型糖尿病的母亲。

在本发明的上下文中，“患有妊娠糖尿病的母亲”是已被卫生保健专业人员诊断为在怀孕期间患有妊娠糖尿病(GDM)的母亲。在本发明的上下文中，优选GDM诊断基于IADPSG标准(IADPSG：国际糖尿病和妊娠研究小组协会(International Association ofDiabetes and Pregnancy Study Group))。通常，GDM诊断最早在怀孕过程中的孕中期(thesecond trimester)进行。GDM发生在无糖尿病病史的孕妇中且为短暂的，即当妇女不再怀孕时，所述病状消失。

在本发明的上下文中，“在出生时对于其胎龄(LGA)而言偏大的婴儿”是指出生时体重、身长或头围处于超过该胎龄的90％的婴儿。孕前超重或肥胖的妇女所生的婴儿以及患有糖尿病(1型糖尿病、2型糖尿病或GDM)的妇女所生的婴儿都具有较高的LGA风险。

应用

人类受试者选自：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有GDM的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时为LGA的婴儿。

上面列出的婴儿a)-d)都被本领域技术人员认为是在生命后期处于发展为NAFLD风险的人群。

在一个优选的实施方案中，人类受试者选自：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；和

c)患有GDM的母亲所生的婴儿。

在一个更优选的实施方案中，人类受试者选自：

a)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；和

b)患有GDM的母亲所生的婴儿。

在一个甚至更优选的实施方案中，人类受试者是患有GDM的母亲所生的婴儿。在一个甚至更优选的实施方案中，人类受试者是在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿，并且其中该母亲也患有GDM。

在一个优选的实施方案中，营养组合物用于降低发展为小儿NAFLD的风险。

在本发明的上下文中，与未食用根据本发明的选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳的营养组合物的处于发展为NAFLD风险的受试者相比，发展为NAFLD的风险降低。优选地，为了适当比较受试者的年龄、受试者的类型[(a)、b)、c)或d)]以及给予营养组合物的时期是对应的。

在本发明的优选的实施方案中，与选自以下的人类受试者中发展为NAFLD的风险相比，发展为NAFLD的风险降低：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有GDM的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时为LGA的婴儿；

其中受试者被喂食营养组合物，选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳，包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，所述营养组合物包含基于总脂质计小于0.5重量％的磷脂并且脂质球的众数直径基于体积计为约0.5μm。

在本发明的另一个优选的实施方案中，与选自以下的人类受试者中发展为NAFLD的风险相比，发展为NAFLD的风险降低：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有GDM的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时为LGA的婴儿；

其中受试者被喂食营养组合物，选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳，包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，其中脂质包含基于总脂肪酸计的至少10重量％的棕榈酸，然而少于15％的棕榈酸残基位于甘油三酯的sn-2位，所述营养组合物包含基于总脂质计少于0.5重量％的磷脂，并且其中脂质球的众数直径基于体积计为约0.5μm。

在本发明的又一个优选的实施方案中，与选自以下的人类受试者中发展为NAFLD的风险相比，发展为NAFLD的风险降低：

a)在受孕时超重和/或肥胖的母亲所生的婴儿；

b)在受孕时患有糖尿病的母亲所生的婴儿；

c)患有GDM的母亲所生的婴儿；和

d)在出生时为LGA的婴儿；

其中受试者被喂食营养组合物，选自婴儿配方物、后续配方物和成长乳，包含可消化的碳水化合物、蛋白质和脂质，其中所述脂质不包含哺乳动物乳脂肪，所述营养组合物包含基于总脂质计的小于0.5重量％的磷脂并且其中脂质球的众数直径基于体积计为约0.5μm。

因此，对于这些非根据本发明的对比营养组合物，直径2至12μm的脂质球的体积％优选低于20体积％，更优选低于15体积％，最优选低于10体积％。

这些非本发明的对比营养组合物优选选自婴儿配方物和后续配方物，更优选这些非本发明的对比营养组合物是婴儿配方物。

脂质球大小

根据本发明，脂质以脂质球的形式存在于营养组合物中。当营养组合物呈液体形式时，这些脂质球在水相中乳化。或者，当营养组合物呈粉末形式时，脂质球存在于粉末中并且粉末适合用水或另一种食品级水相重新调配。脂质球包含核和表面。

优选地，营养组合物中的脂质球的众数直径基于体积计为至少1.0μm，更优选至少3.0μm，最优选至少4.0μm。优选地，脂质球的众数直径基于体积计为1.0至10μm，更优选2.0至8.0μm，甚至更优选3.0至7.0μm，并且最优选4.0μm至6.0μm。

或者，或优选另外，脂质球的粒度分布优选以这样一种方式，即至少45体积％(vol.％)，优选至少55体积％，甚至更优选至少65体积％，最优选至少75体积％的脂质球具有2至12μm的直径。在一个优选的实施方案中，至少45体积％、优选至少55体积％、更优选至少65体积％、最优选至少75体积％的脂质球具有2至10μm的直径。在一个更优选的实施方案中，至少45体积％、更优选至少55体积％、甚至更优选至少65体积％、最优选至少75体积％的脂质球具有4至10μm的直径。优选小于5体积％的脂质球具有大于12μm的直径。

标准婴儿配方物、后续配方物或成长乳中的脂质球的众数直径基于体积计为低于0.5μm。研究发现存在众数直径基于体积计为至少1μm的大脂质球，或脂质球的显著部分基于体积计具有2至12μm的直径，会降低处于发展为NAFLD风险的婴儿发展为NAFLD的风险。

脂质球的体积百分比基于总脂质的体积计。众数直径是指基于总脂质的体积存在最多的直径，或图形表示中的峰值，X-作为直径，Y-作为体积(％)。

脂质球的体积及其粒度分布可以使用粒度分析仪如Mastersizer(MalvernInstruments，Malvern，UK)适当地确定，例如通过在Michalski等人，2001，Lait 81：787-796中所记载的方法。

磷脂

营养组合物基于总脂质计包含0.5至20重量％的磷脂，更优选0.5至10重量％，更优选0.75至8重量％，甚至更优选1.0至8重量％，最优选1.5至5重量％的磷脂，基于总脂质计。

磷脂是两亲性的，包括甘油磷脂和鞘磷脂。“涂层(coating)”是指脂质球的外表面层包含磷脂，而脂质球的核中几乎不存在磷脂。确定磷脂是否位于脂质球表面的合适方法是共聚焦激光扫描显微镜或透射电子显微镜；例如参见Gallier等人(A novel infantmilk formula concept：Mimicking the human milk fat globule structure，Colloidsand Surfaces B：Biointerfaces 136(2015)329-339)。

营养组合物优选包含甘油磷脂。甘油磷脂的实例是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)。优选地，营养组合物包含PC、PS、PI和PE中的一种或多种，更优选地，营养组合物包含至少PC。

营养组合物优选包含鞘磷脂。鞘磷脂具有与神经酰胺的1-羟基酯化的磷酸胆碱或磷酸乙醇胺分子。它们被归类为磷脂和鞘脂，但不被归类为甘油磷脂或鞘糖脂。优选地，营养组合物包含基于总脂质计的0.05至10重量％的鞘磷脂，更优选0.1至5重量％，甚至更优选0.2至2重量％。优选地，营养组合物包含基于总磷脂计的至少5重量％的鞘磷脂，更优选5至40重量％，更优选10至35重量％，甚至更优选15至35重量％，基于总磷脂计。

营养组合物优选包含鞘糖脂。优选地，营养组合物包含基于总脂质计的0.1至10重量％的鞘糖脂，更优选0.5至5重量％，甚至更优选2至4重量％，基于总脂质计。在本文中，术语鞘糖脂特别是指具有氨基醇鞘氨醇的糖脂。鞘氨醇主链与带电荷的头部基团如乙醇胺、丝氨酸或胆碱主链O-连接。主链也是与脂肪酰基相连的酰胺。鞘糖脂是具有一个或多个糖残基的神经酰胺，其在1-羟基位置以β-糖苷键连接，并且包括神经节苷脂。优选营养组合物含有神经节苷脂，更优选至少一种神经节苷脂选自GM3和GD3。

营养组合物优选包含胆固醇。营养组合物优选包含基于总脂质计的至少0.005重量％的胆固醇，更优选至少0.02重量％，更优选至少0.05重量％，甚至更优选至少0.1重量％的胆固醇，基于总脂质计。优选地，胆固醇的量不超过10重量％，基于总脂质计，更优选不超过5重量％，甚至更优选不超过1重量％，基于营养组合物中的总脂质计。

提供磷脂、鞘糖脂和/或胆固醇的优选来源是蛋脂质、乳脂肪、酪乳脂肪和黄油血清脂肪(例如β血清脂肪)。磷脂，特别是PC的优选来源是大豆卵磷脂和/或向日葵卵磷脂。

营养组合物优选包含源自哺乳动物乳的磷脂。优选地，营养组合物包含衍生自哺乳动物乳的磷脂和鞘糖脂。优选地，胆固醇也从哺乳动物乳中获得。优选地，营养组合物包含来自奶牛、母马、绵羊、山羊、水牛、马和/或骆驼的哺乳动物乳的磷脂、鞘糖脂和/或胆固醇。更优选地，营养组合物包含来自牛乳的磷脂、鞘糖脂和/或胆固醇。

优选地，源自乳汁的磷脂包括分离自乳脂质、奶油脂质、奶油血清脂质、黄油血清脂质(β血清脂质)、乳清脂质、干酪脂质和/或酪乳脂质的磷脂。酪乳脂质通常在酪乳的制造过程中获得。黄油血清脂质或β血清脂质通常在从黄油制造无水乳脂肪期间获得。优选地，磷脂、鞘糖脂和/或胆固醇从奶油中获得。来自乳汁的磷脂的合适的可商购来源的实例是Corman的BAEF、SM2、SM3和SM4粉末、Glanbia的Salibra、Lecico的Lipamin M20和Arla的LacProdan MFGM-10或PL20。

使用来自乳脂质的磷脂有利地包含使用乳脂球膜，这更容易类似于人乳中的情况。因此，同时使用源自乳汁的磷脂和源自植物脂质的甘油三酯能够制造具有更类似于人乳涂层的包覆的脂质球，同时提供最佳的脂肪酸组成。

优选地，磷脂源自乳脂质，更优选地源自牛乳脂质。优选地，磷脂源自乳脂球膜(MFGM)或形成乳脂球膜的一部分，更优选地源自奶牛的MFGM或形成奶牛的MFGM的一部分。

优选地，营养组合物包含磷脂和鞘糖脂。在一个优选的实施方案中，磷脂∶鞘糖脂的重量比为2∶1至12∶1，更优选2∶1至10∶1，甚至更优选2∶1至5∶1。

优选地，营养组合物包含磷脂、鞘糖脂和胆固醇。

用于获得尺寸增加和/或用磷脂包覆的脂质球的方法例如公开于WO 2010/0027258和WO 2010/0027259中。

脂质

营养组合物包含脂质。本发明中的脂质包含选自下述的一种或多种：甘油三酯、极性脂质(如磷脂、胆固醇、糖脂、鞘磷脂)、游离脂肪酸、甘油单酯和甘油二酯。

优选地，脂质提供营养组合物总热量的30至60％。更优选地，营养组合物包含提供总热量的35至55％的脂质，甚至更优选地，营养组合物包含提供总热量的40至50％的脂质。优选地，脂质以3至7g/100kcal的量存在，更优选以4至6g脂质/100kcal的量存在，最优选以4.5至5.5g脂质/100kcal的量存在。当呈液体形式时，例如作为即食液体，营养组合物优选包含2.1至6.5g脂质/100ml，更优选3.0至4.0g/100ml。基于干重计，营养组合物优选包含10至50重量％，更优选12.5至40重量％的脂质，甚至更优选19至30重量％的脂质。

脂质优选包含植物脂质。植物脂质的存在有利地实现了多不饱和脂肪酸高和/或更类似于人乳脂肪的最佳脂肪酸组成。仅来自非人类哺乳动物乳(例如牛乳)的脂质不能提供最佳的脂肪酸组成。非人类哺乳动物乳中必需脂肪酸的含量太低。

优选地，营养组合物包含至少一种，优选至少两种选自以下的植物脂质来源：亚麻籽油(亚麻油)、油菜籽油(例如菜油、低芥酸油菜籽油和菜籽油)、向日葵油、高油酸向日葵油、红花油、高油酸红花油、橄榄油、椰子油、棕榈油和棕榈仁油。

在一个优选的实施方案中，营养组合物包含5至100重量％的植物脂质，基于总脂质计，更优选10至95重量％，更优选20至80重量％，甚至更优选25至75重量％，最优选40至70重量％的植物脂质，基于总脂质计。因此应注意，营养组合物还可包含非植物脂质。非植物脂质可以包括哺乳动物乳脂肪、哺乳动物乳衍生的脂质作为优选的磷脂来源，并且包括鱼、海洋油(marine oil)和/或微生物油作为长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的来源。

位于甘油三酯sn-2位的棕榈酸(PA)

甘油三酯是营养组合物中脂质的主要部分。甘油三酯包含通过酯键与三个脂肪酸残基连接的甘油部分，三个脂肪酸残基可以相同或不同，并且通常选自含有4至26个碳原子的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸。此类甘油三酯在存在的脂肪酸残基上可能不同和/或在脂肪酸残基相对于甘油主链的各个位置(例如在sn-1、sn-2和/或sn-3位置)上可能不同。优选地，营养组合物包含基于总脂质计的至少70重量％、更优选至少80重量％、更优选至少85重量％的甘油三酯，甚至更优选基于总脂质计的至少90重量％的甘油三酯，最优选基于总脂质计的至少95重量％的甘油三酯。

可用于增加位于甘油三酯中sn-2位的PA量(基于总PA计)的脂质是可商购获得的，例如来自Loders Croklaan名为Betapol

用于增强甘油三酯中sn-2或β位的PA的甘油三酯的优选来源是非人类动物脂肪，更优选非人类哺乳动物乳脂肪，甚至更优选牛乳脂肪。优选地，非人类哺乳动物乳脂肪(特别是牛乳脂肪)以无水乳脂肪、酥油(butter oil)、黄油脂肪或黄油的形式使用。优选地，乳脂肪的来源是均匀的脂肪相，例如酥油或无水乳脂肪，而不是以水包油乳液例如奶油的形式，因为本发明的脂质球更容易在营养组合物的制造过程中制备脂质体，当将脂质作为均质脂肪相添加到水相中时，在其上处理混合物以形成乳液。

优选地，包含在甘油三酯的sn-2位置上具有增加量的棕榈酸残基的的甘油三酯的脂质来源的量基于总脂质计为10至70重量％、更优选20至65重量％、甚至更优选30至60重量％。这种脂质来源优选是哺乳动物乳脂肪，更优选这种脂质来源是非人哺乳动物乳脂肪。哺乳动物乳脂肪优选选自黄油、黄油脂肪、酥油或无水乳脂肪。优选地，营养组合物包含基于总脂质计的10至70重量％，更优选20至75重量％，甚至更优选基于总脂质计的30至60重量％的选自黄油、黄油脂肪、酥油或无水乳脂肪的哺乳动物乳脂肪。

在一个特别优选的实施方案中，营养组合物中的脂质包含：

a.基于总脂质计的30至90重量％的植物脂肪，和

b.基于总脂质计的10至70重量％的哺乳动物乳脂肪，其中哺乳动物乳脂肪选自黄油、黄油脂肪、酥油或无水乳脂肪。

更优选地，营养组合物中的脂质包含：

a.基于总脂质计的35至80重量％的植物脂肪，和

b.基于总脂质计为20至65重量％的哺乳动物乳脂肪，其中哺乳动物乳脂肪选自黄油、黄油脂肪、酥油或无水乳脂肪。

最优选地，营养组合物中的脂质包含：

a.基于总脂质计的40至70重量％的植物脂肪，和

b.基于总脂质计的30至60重量％的哺乳动物乳脂肪，其中哺乳动物乳脂肪选自黄油、黄油脂肪、酥油或无水乳脂肪。

在一个优选的实施方案中，脂质包含基于总脂肪酸计的至少10重量％的棕榈酸(PA)并且基于总棕榈酸计的至少15重量％的棕榈酸位于甘油三酯的sn-2位置。

优选营养组合物中的脂质选择为使得存在于营养组合物的总脂质中的棕榈酸(PA)的量基于总脂质中的总脂肪酸计为至少10重量％，优选至少为15重量％。优选地，存在于总脂质中的PA的量基于总脂肪酸计为低于30重量％。更优选存在于脂质中的PA的量基于总脂质中的总脂肪酸计为12至26重量％，甚至更优选14至24重量％，甚至更优选16至22重量％。

优选营养组合物中的脂质选择为使得基于脂质中存在的总PA计，至少15重量％，优选至少20重量％，更优选至少25重量％，更优选至少30重量％的PA在甘油三酯的sn-2或β位。优选地，甘油三酯中sn-2位的PA的量不超过45重量％，优选不超过40重量％，基于脂质中存在的总PA计。优选地，甘油三酯中sn-2位的PA的量为25至40重量％，基于总脂质中存在的总PA计。

大脂质球形式的并且包括含有磷脂的涂层的，同时存在增加量的sn-2棕榈酸或存在哺乳动物乳脂肪的脂质显示出对降低处于发展为NAFLD风险的婴儿发展为NAFLD的风险的进一步改善。

脂肪酸组成

SFA是指饱和脂肪酸和/或酰基链，MUFA是指单不饱和脂肪酸和/或酰基链，PUFA是指具有2个或更多个不饱和键的多不饱和脂肪酸和/或酰基链；LC-PUFA是指长链多不饱和脂肪酸和/或在脂肪酰基链中包含至少20个碳原子并具有2个或更多个不饱和键的酰基链；中链脂肪酸(MCFA)是指链长为6、8或10个碳原子的脂肪酸和/或酰基链。n3或ω-3PUFA是指多不饱和脂肪酸和/或具有2个或更多个不饱和键的酰基链，其在脂肪酰基链的甲基端的第三个碳原子上具有不饱和键，n6或ω-6PUFA是指多不饱和脂肪酸和/或具有2个或更多个不饱和键的酰基链，其在脂肪酰基链甲基端的第六个碳原子上具有不饱和键。

DHA是指二十二碳六烯酸和/或酰基链(22：6，n3)；DPA是指二十二碳五烯酸和/或酰基链(22：5 n3)。EPA是指二十碳五烯酸和/或酰基链(20：5 n3)；ARA是指花生四烯酸和/或酰基链(20：4 n6)。LA是指亚油酸和/或酰基链(18：2 n6)；ALA是指α-亚麻酸和/或酰基链(18：3 n3)。PA涉及棕榈酸和/或酰基链(C16：0)。BA是指丁酸(4：0)。

根据本发明使用的营养组合物优选包含LA。LA是n6 PUFA和n6LC-PUFA的前体，并且是人体不能合成的必需脂肪酸。LA优选以足量存在以促进健康的生长和发育，但以尽可能低的量存在以防止对n3PUFA形成的负面、竞争性影响和过高的n6/n3比值。因此，营养组合物优选包含小于15重量％、更优选小于12重量％、更优选小于10重量％的LA，基于总脂肪酸计。营养组合物优选地包含基于脂肪酸计的至少5重量％的LA，优选地至少6重量％的LA，更优选地至少7重量％的LA，基于总脂肪酸计。

营养组合物优选包含ALA。ALA是一种n3 PUFA，是n3 LC-PUFA的前体，并且是必需的脂肪酸，因为其不能被人体合成。优选地，ALA以足以促进婴儿健康生长和发育的量存在。因此，营养组合物优选包含至少1.0重量％，更优选营养组合物包含至少1.5重量％，甚至更优选至少2.0重量％的ALA，基于总脂肪酸计。优选地，营养组合物包含小于10重量％，更优选小于5.0重量％的ALA，基于总脂肪酸计。

LA/ALA的重量比优选平衡良好，以确保细胞膜中的最佳n6/n3 PUFA、n6/n3 LCPUFA和DHA/ARA比值。因此，营养组合物优选包含2至20、更优选3至15、更优选5至12、更优选5至10的LA/ALA重量比。优选地，n6 PUFA/n3 PUFA重量比为3至20，更优选3至15，更优选5至12，更优选5至10。

优选地，营养组合物包含n3 LC-PUFA，例如EPA、DPA和/或DHA，更优选DHA。由于ALA向DHA的转化在婴儿中可能效率较低，优选ALA和DHA都存在于营养组合物中。优选地，营养组合物包含至少0.05重量％、优选至少0.1重量％、更优选至少0.2重量％的DHA，基于总脂肪酸计。优选地，营养组合物包含不超过2.0重量％，优选不超过1.0重量％的DHA，基于总脂肪酸计。

营养组合物优选包含ARA。优选地，营养组合物包含至少0.05重量％、优选至少0.1重量％、更优选至少0.2重量％的ARA，基于总脂肪酸计。由于n6脂肪酸类、尤其是花生四烯酸(ARA)类与n3脂肪酸类、尤其是DHA类反作用，营养组合物优选包含相对低量的ARA。优选地，营养组合物包含不超过2.0重量％，优选不超过1.0重量％的ARA，基于总脂肪酸计。优选地，DHA和ARA的重量比为1∶4至4∶1，更优选1∶2至2∶1，更优选0.6至1.5。

可消化的碳水化合物

营养组合物包含可消化的碳水化合物。可消化的碳水化合物优选提供营养组合物总热量的25至75％。优选地，可消化的碳水化合物提供总热量的40％至60％。基于热量计，营养组合物优选包含5至20g可消化的碳水化合物/100kcal，更优选6至16g/100kcal。当呈液体形式时，例如作为即食液体，营养组合物优选包含3至30g可消化的碳水化合物/100ml，更优选6至20，甚至更优选7至10g/100ml。基于干重计，营养组合物优选包含20至80重量％，更优选40至65重量％的可消化的碳水化合物。

优选的可消化的碳水化合物来源是乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、淀粉和麦芽糖糊精。乳糖是存在于人乳中的主要的可消化的碳水化合物。有利地是，乳糖具有低血糖指数。营养组合物优选包含乳糖。营养组合物优选包含可消化的碳水化合物，其中至少35重量％，更优选至少50重量％，更优选至少75重量％，甚至更优选至少90重量％，最优选至少95重量％的可消化的碳水化合物是乳糖。基于干重计，营养组合物优选包含至少25重量％的乳糖，优选至少40重量％的乳糖。

蛋白质

营养组合物包含蛋白质。蛋白质优选提供总热量的5至20％。优选地，营养组合物包含提供总热量的6至12％的蛋白质。优选地，营养组合物包含小于3.5g蛋白质/100kcal，更优选地营养组合物包含1.5-2.1g蛋白质/100kcal，甚至更优选地包含1.6-2.0g蛋白质/100kcal。有利地是，低蛋白质浓度更接近于人乳，因为与牛乳相比，人乳包含较低量的蛋白质，基于总热量计。营养组合物中的蛋白质浓度由蛋白质、肽和游离氨基酸的总和决定。基于干重计，营养组合物优选包含少于12重量％，更优选9.6至12重量％，甚至更优选10至11重量％的蛋白质。基于即饮液体产品计，营养组合物优选包含小于1.5g蛋白质/100ml，更优选1.2至1.5g，甚至更优选1.25至1.35g/100ml。

蛋白质来源的选择应满足必需氨基酸含量的最低要求并确保令人满意的生长。因此，优选蛋白质来源基于牛乳蛋白，例如乳清、酪蛋白及其混合物，并且蛋白质基于大豆、马铃薯或豌豆。在使用乳清蛋白的情况下，蛋白质来源优选基于酸乳清或甜乳清、乳清蛋白分离物或其混合物。优选地，营养组合物包含至少3重量％的酪蛋白，基于干重计。优选地，酪蛋白是完整的和/或未水解的。

非消化性碳水化合物

在一个实施方案中，营养组合物优选包含非消化性寡糖。优选地，营养组合物包含聚合度(DP)为2至250、更优选3至60的非消化性寡糖。

优选地，营养组合物包含低聚果糖、低聚半乳糖和/或低聚半乳糖醛酸，更优选低聚果糖和/或低聚半乳糖，甚至更优选低聚半乳糖，最优选反式低聚半乳糖。在一个优选的实施方案中，营养组合物包含低聚半乳糖和低聚果糖的混合物，更优选反式低聚半乳糖和低聚果糖。合适的非消化性寡糖是例如

优选地，营养组合物包含80mg至2g非消化性寡糖/100ml，更优选150mg至1.5g，甚至更优选300mg至1g/100ml。基于干重计，营养组合物优选包含0.25重量％至20重量％，更优选0.5重量％至10重量％，甚至更优选1.5重量％至7.5重量％的非消化性寡糖。

配方物

需要根据本发明的用途给予婴儿配方物、后续配方物或成长乳。这意指给予的组合物不是人乳。这也意指给予的组合物不是天然的牛乳或来自另一种哺乳动物的天然乳汁。或者，如本文所使用的术语“婴儿配方物”或“后续配方物”或“成长乳”意指它涉及人工制备的组合物，或者换言之，它是合成的。因此，在一个实施方案中，给予的营养组合物是人工婴儿配方物或人工后续配方物或人工成长乳或合成婴儿配方物或合成后续配方物或合成成长乳。

在本文中，婴儿配方物是指人工制备的营养组合物，旨在用于0至约4至6月龄的婴儿并旨在用作人乳的替代品。通常，婴儿配方物适合用作唯一的营养来源。这种婴儿配方物也称为起始配方物。从4至6月龄到12月龄的婴儿的后续配方物旨在作为开始断奶其他食物的婴儿的补充喂养。婴儿配方物和后续配方物受到严格的规定，例如欧盟法规第609/2013号和第2016/127号。在本文中，成长乳是指人工制备的营养组合物，用于12个月至36个月的婴儿，其旨在作为婴儿的补充喂养。

营养组合物优选为婴儿配方物或后续配方物。更优选地，营养组合物为婴儿配方物。

营养组合物优选为婴儿配方物或后续配方物并且优选包含3至7g脂质/100kcal，优选4至6g脂质/100kcal，更优选4.5至5.5g脂质/100kcal，优选包含1.7至3.5g蛋白质/100kcal，更优选1.8至2.1g蛋白质/100kcal，更优选1.8至2.0g蛋白质/100kcal，优选包含5至20g可消化的碳水化合物/100kcal，优选6至16g可消化的碳水化合物/100kcal，更优选10至15g可消化的碳水化合物/100kcal。

优选地，营养组合物是婴儿配方物或后续配方物，当以即饮形式呈现时，其具有60kcal至75kcal/100ml，更优选60至70kcal/100ml的能量密度。这种密度确保了水合作用和热量摄入之间的最佳平衡。

在一个实施方案中，营养组合物是粉末。适当地，营养组合物是粉末形式，其可以用水或其他食品级含水液体重新调配以形成即饮液体，或者是液体浓缩物形式，其应当用水稀释以形成即饮液体。已发现脂质球在重新调配时维持其大小及涂层。

在本文件及其权利要求中，动词“包含”及其变体以其非限制性意义使用，其意指包括该词之后的项目，但不排除未具体提及的项目。此外，除非上下文明确要求存在一个且只有一个元素，否则不定冠词“a(一个)”或“an(一种)”对元素的引用不排除存在多于一个元素的可能性。因此，不定冠词“a(一个)”或“an(一种)”通常意指“至少一个”。

实施例

进行了一项实验，其中将使用大的磷脂包覆的脂质球(IMF 1)的婴儿配方物(IMF)的效果与具有小脂质球且没有磷脂涂层的对照IMF(IMF 2)的效果进行了比较。

使用妊娠糖尿病(GDM)小鼠模型产生在妊娠期间暴露于GDM条件的后代。母鼠在怀孕之前接受了2次触发，以诱发短暂的GDM状况。这种方法反映了初步研究中的GDM病理生理学(数据未示出)o

在12周龄时，C57BL/6N母鼠饲喂60能量％的高脂肪饮食(HFD)4周以降低胰岛素敏感性。HFD基于AIN93G饮食，其中调整后的脂质部分含有60能量％的脂质。在交配之前连续3天给予低剂量的链脲佐菌素(60mg STZ/kg)。STZ是一种烷化剂，可通过细胞坏死和/或凋亡选择性地杀死胰腺β细胞。通过给予低剂量的STZ，β细胞的能力降低。饲喂HFD一直持续到产后第16天(PN16)断奶。后代用母乳进行母乳喂养/哺乳，直到PN16。在PN16，雄性后代断奶并给予IMF 1(n＝9)或对照IMF 2(n＝8)直到PN42。随后用西式饮食(WSD)饲喂后代15周。WSD基于AIN93G饮食，调整后的脂质部分含有45能量％的脂质。

在PN147，小鼠后代被禁食4小时，随后被处死。收集其肝脏，在Trizol中部分分裂，在液氮中速冻，然后储存在-80℃下直至进一步分析。肝脏样品在冰上均质化。根据Bligh&Dyer的程序(二氯甲烷/甲醇提取)提取肝脂质。通过GPO-PAP酶测定法(Trig/GB试剂盒，Roche，11877771，Mannheim，Germany)测定肝脏甘油三酯(TG)含量。为了将肝脏脂质含量标准化为蛋白质，进行了改编自Lowry方法的蛋白质测定。此外，通过气相色谱分析定量肝脏脂肪酸(FA)组成。脂肪酸组成分析的原理是通过对来自各种生物样品的脂肪酸进行转甲基化，并通过使用气相色谱法相对于外来脂肪酸标准(C17：0)来测量脂肪酸[FA Muskiet等人，J.Chromatogr.278，231-244(1983)]。

后代饮食包含AIN93G之后的常量营养素和微量营养素组合物。后代饮食由28.3％(w/w)IMF 1或对照IMF 2组成。添加蛋白质、碳水化合物和微量营养素以匹配AIN93G。脂肪成分完全来自IMF。包含IMF 1和IMF 2的饮食的脂肪含量和脂肪酸组成相似(表1)。

对于IMF 1，使用无水乳脂、椰子油、低芥酸油菜籽油、向日葵油、高油酸向日葵油与少量大豆卵磷脂和LC-PUFA预混物的混合物。此外，IMF 1包含黄油血清粉末作为乳衍生磷脂的来源。植物脂质的量为约53重量％，基于总脂肪计，并且哺乳动物乳脂肪的量为约47重量％。

对于对照IMF 2，使用棕榈油、椰子油、低芥酸油菜籽油、向日葵油、高油酸向日葵油与少量大豆卵磷脂和LC-PUFA预混物的混合物。最终对照IMF中植物脂质的量为约98重量％，基于总脂肪计，并且哺乳动物乳脂肪的量为约1重量％。

表1

IMF 1以与WO 2010/0027259的实施例1B中所述类似的方式制备。IMF 1的脂质球很大并且被磷脂包覆。用高压均质化制备对照IMF 2，产生小的脂质球。

用于不同IMF的不同实验IMF的脂肪成分的详细特征如表2所示。

表2

在PN147时测量体重和肥胖。在长时间接触WSD后，在饲喂IMF 1或IMF 2的禁食雄性小鼠之间观察到体重和肥胖无统计学显著差异。

测定肝脏中TG和FA的水平。表3示出了TG和FA的测量水平。

表3

＊p值＜0.05IMF 1相对于IMF 2，使用Mann-Whitney检验。

从表3可以推断，与在生命早期食用IMF 2的小鼠的肝脏TG和总肝脏FA的水平相比，在生命早期食用IMF 1并随后暴露于WSD饮食的小鼠中的肝脏TG和肝脏总FA的水平具有明显的不同程度的降低。更低水平的TG和更低水平的总FA被认为更健康，表明在生命早期饲喂IMF1的小鼠发展为非酒精性脂肪性肝病的风险降低。

由于两个后代组的能量摄入非常相似，出人意料地是，在生命早期饲喂的IMF中脂质球设计(具有PL涂层的更大脂质球)的差异对在生命后期受到挑战时的肝脏中过多的脂肪储存具有如此的保护作用。