法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-07-29
公开
国际专利申请公布
技术领域
本发明总体上涉及用于检测糖尿病(前期)的蛋白质标记，更具体地是LAMA2、PLXDC2及MLL4用于检测、预防和治疗糖尿病前期和糖尿病的用途。
背景技术
糖尿病是一种威胁生命的代谢疾病，其特征是因胰岛素阻抗(insulinresistance)和/或β细胞功能异常导致高血糖症及碳水化合物代谢失调。尽管过去几年第2型糖尿病(T2D)的诊断和疗法有一些改善与进展，它仍然是一种无法治愈的疾病。越来越多的证据显示预防重于治疗，因为早期的预防和干预可以显著地降低第2型糖尿病的发生率和并发症。例如饮食控制、运动和减重手术(bariatric surgery)可预防高风险个体的第2型糖尿病。预防性投予二甲双胍(metformin)也可以降低第2型糖尿病的发生率。因此在临床发病之前识别第2型糖尿病的高风险个体是预防这个疾病的关键。
为了识别第2型糖尿病的基因和蛋白质标记，已经投注了许多的努力。尽管基因标记具有高度可靠性，但它们并不令人满意，因为它们出现在第2型糖尿病而非糖尿病前期，同时灵敏度和特异性并不高。另一方面，蛋白质标记具有高灵敏度和特异性，因为它们可以系统地和动态地反映疾病的进展。此外，蛋白质水平受到细胞刺激的严格调控。因此蛋白质标记对于诊断具有潜在的用途。
发明内容
在一方面，本发明涉及一种用于检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组，包括：(i)基板，其具有顶部表面和与该顶部表面相对的底部表面，以及顶端和与该顶端相对的底端；(ii)样本装载区域；(iii)捕捉抗体区域，其包含捕捉抗体以捕获包含MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；(iv)试剂区域，其含有调节试剂；(v)检测抗体区域，其包含检测抗体以检验被捕获的包含MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；以及(vi)可选地阳性对照区域；其中所述样本装载区域、所述检测抗体区域、所述试剂区域、所述捕捉抗体区域和所述阳性对照区域位于所述基板的顶部表面，该些区域可允许流体连通，所述样本装载区域位于所述顶端和所述捕捉抗体区域位于所述底端，并且所述可选地阳性对照区域位于所述捕捉抗体区域之后或之前。
在一个实施方式中，所述捕捉抗体区域包含捕捉抗体用来捕获一或多个除了MLL4、LAMA2及PLXDC2之外的其他糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记。
在另一个实施方式中，所述诊断套组可更包含(vii)说明书，其显示根据本发明实施检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病的方法。
所述调节试剂可包含缓冲溶液、洗涤剂、蛋白酶抑制剂、盐类和/或二价阳离子。所述试剂区域可更包含形成颜色的试剂和调节试剂。
在一个实施方式中，所述捕捉抗体、所述调节试剂和所述检测抗体涂布在所述基板的顶部表面。所述基板可以是硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)。
在另一个实施方式中，本发明的该诊断套组装置/设备通过侧向流动免疫测定(lateral flow immunoassay)来优化性能。
在另一方面，本发明涉及一种用于检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病的方法，包括：(a)提供如本发明所述的诊断套组；(b)提供来自有需求的对象的血清样本；以及(c)与健康对照相比，检测该血清样本中包括MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记的水平是否增加，其中所述蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平增加即表示该有需求的对象患有糖尿病前期或糖尿病。
在更另一方面，本发明涉及一种用于检测和识别糖尿病前期和糖尿病的方法，包括：(a)提供来自有需求的对象的血清样本；以及(b)与健康对照相比，检测该血清样本中包括MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记的水平是否增加，其中所述蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平增加即表示该有需要的对象患有糖尿病前期或糖尿病。
在一个实施方式中，所述蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平在受者作用特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线下面积大于0.91即表示该有需求的对象罹患糖尿病前期或糖尿病。
在另一个实施方式中，所述蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平在受者作用特征曲线下面积大于0.95即表示该有需求的对象罹患糖尿病前期或糖尿病。
在另一个实施方式中，所述糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记还可包含一种或多种其他糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记。
所述检测步骤可更进一步包括：(d)提供分别针对MLL4、LAMA2和PLXDC2具特异性的捕捉抗体，以分别形成被捕获的蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2；(e)提供调节试剂；以及(f)提供检测抗体以分别检验被捕获的蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2。
所述供应步骤进一步包括提供用于检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组的步骤，其中所述诊断套组包括：(i)基板，其具有顶部表面和与该顶部表面相对的底部表面，以及顶端和与该顶端相对的底端；(ii)样本装载区域；(iii)捕捉抗体区域，其包含捕捉抗体以捕获包含MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；(iv)试剂区域，其含有调节试剂；(v)检测抗体区域，其包含检测抗体以检验被捕获的包含MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；以及(vi)可选地阳性对照区域；其中所述样本装载区域、所述检测抗体区域、所述试剂区域、所述捕捉抗体区域和所述阳性对照区域位于所述基板的顶部表面，该些区域可允许流体连通，所述样本装载区域位于所述顶端和所述捕捉抗体区域位于所述底端，并且所述可选地阳性对照区域位于所述捕捉抗体区域之后或之前。
在另一个实施方式中，所述检测步骤通过可视的颜色变化来执行。
所述捕捉抗体和所述检测抗体可以是多克隆抗体。在另一个实施方式中，所述捕捉抗体和所述检测抗体是单克隆抗体。在更另一个实施方式中，所述捕捉抗体是多克隆抗体且所述检测抗体是单克隆抗体，或反之亦然。
在另一个实施方式中，所述检测抗体以胶体金或产生颜色的酶标记，且所述调节试剂包含所述产生颜色的酶的底物。
在另一个实施方式中，所述方法通过侧向流动免疫测定实施。
本发明进一步涉及对病患使用探针组来检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病。
在更另一方面，本发明涉及对包含MLL4、LAMA2及PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性结合亲和力的探针组在制造本发明的用于检测糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组中的用途。
所述探针组包括：(a)第一探针，所述第一探针对所述MLL4具有特异性结合亲和力；(b)第二探针，所述第二探针对所述LAMA2具有特异性结合亲和力；以及(c)第三探针，所述第三探针对所述PLXDC2具有特异性结合亲和力。
在另一方面，本发明涉及对包含MLL4、LAMA2及PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性结合亲和力的探针组在制造用于检测糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组中的用途，其中所述探针组包含(a)第一探针，所述第一探针对该MLL4具有特异性结合亲和力；(b)第二探针，所述第二探针对该LAMA2具有特异性结合亲和力；以及(c)第三探针，所述第三探针对该PLXDC2具有特异性结合亲和力。
在另一个实施方式中，所述探针组的用途更包含调节试剂和底物在制造用于检测糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组中的用途。
所述探针组可更进一步包含一或多个对除了MLL4、LAMA2及PLXDC2之外的其他糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性结合亲和力的探针。
在另一个实施方式中，所述探针是抗体，其包含捕捉抗体和检测抗体。
更进一步，本发明涉及筛选糖尿病前期和糖尿病以照护和/或治疗。
在另一方面，本发明涉及一种照护和治疗糖尿病前期和/或糖尿病的方法，包括以下步骤：(I)对有需求的对象检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病；以及(II)被识别为罹患糖尿病前期或糖尿病的该有需求的对象具有糖尿病前期或糖尿病的照护和/或治疗方案。该检测和识别步骤更包括：(a)提供来自有需求的对象的血清样本；以及(b)与健康对照相比，检测该血清样本中包括MLL4、LAMA2和PLXDC2的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记的水平是否增加，其中所述蛋白质标记MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平增加为指示该有需要的对象患有糖尿病前期或糖尿病。
通过结合以下附图对优选实施方式的以下描述，这些和其他方面将变得显而易见，但是在不脱离本公开的新颖概念的精神和范围的情况下可以实施变化和修改。
下述用于阐述一个或多个本发明实施方式的图式及其说明，是用以解释本发明的基本原理。只要有可能，图式中所使用的相同附图标记代表实施方式中相同或相似的组件。
附图说明
图1为发现小鼠和人类来源的血清蛋白的实验设计的流程图，接着验证它们存在于人类血清中。小鼠与人分别经16和12小时禁食空腹后，从3个健康小鼠/志愿者和3个糖尿病前期小鼠/患者中收集血清样本。将来自3只健康小鼠的血清汇集在一起并以
图2显示从人类血清中所选蛋白质转化的火山图分析。将来自人类血清的总蛋白质以
图3显示使用
图4显示健康和糖尿病(前期)人来源血清中LAMA2、PLXDC2和MLL4的免疫印迹法分析、诊断功效和诊断值的结果。A.收集健康和糖尿病(前期)对象的血清样本，然后以裂解缓冲液裂解。离心后，按照指示将全部裂解产物以抗体处理进行免疫印迹法分析。B.以受者作用特征(ROC)曲线分析诊断效力。C.评估灵敏度、特异性和准确性的诊断数值。D.利用多种蛋白质标记检测糖尿病(前期)的诊断套组设备图式。
图5为与健康志愿者相比，选择具有统计意义(P<0.05)的糖尿病前期患者的血清蛋白，分析其生物学过程(A)、分子功能(B)和细胞成分(C)的基因本体学(gene ontology)圆饼图。
具体实施方式
本文所述的“糖尿病(前期)”一词通常是指糖尿病前期和糖尿病。
“健康对照”一词通常是指既不是糖尿病前期也不是糖尿病的健康对象。
本文所述的诊断套组是指用于诊断糖尿病前期和/或糖尿病的糖尿病(前期)蛋白质标记的组或集合，或能够组装成诊断套组装置/设备的糖尿病(前期)蛋白质标记的组或集合，或者是指包含这样的糖尿病(前期)蛋白质标记的组或集合的诊断套组装置/设备。
“试剂区域”一词可与“试剂库”交换，通常是指包含“调节试剂”的区域。
“调节试剂”一词是指优化检测或测定方法所需的试剂。
“检测抗体”一词通常是指对糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性的抗体，其与酶或其他分子共轭使得蛋白质标记与捕获其的抗体的结合反应可视化。
“捕捉抗体”一词通常是指对糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性的抗体。捕捉抗体通过其与蛋白质标记的特异性结合来捕获蛋白质标记。
“捕捉抗体区域”一词和“测试读取区域”是可以互换的。
“照护和/或治疗方案”通常是指用于预防或最大程度降低糖尿病前期发展成完全糖尿病的机会或用于治疗糖尿病前期或糖尿病的药物或医疗方案。
糖尿病前期和糖尿病单白质标记的氨基酸序列如下：MLL4(SEQ ID NO:I)；LAMA2(SEQ ID NO:2)；PLXDC2(SEQ ID NO:3)。
缩写如下：BW,体重；FBG,空腹血糖；IDF,国际糖尿病联合会；
本发明涉及识别和使用蛋白质标记以诊断和治疗糖尿病前期和糖尿病。
公开了一种识别糖尿病前期蛋白质标记的方法，该方法包括：(a)分别从非糖尿病前期(健康)对象和糖尿病前期对象采集血清样本；(b)去除血清样本中的高丰度(high-abundance)蛋白质；(c)用胰蛋白酶消化剩余的蛋白质以获得血清样本中消化过的蛋白质片段；(d)用不同的同位素标签标记每个消化过的蛋白质片段，以得到带有同位素标记的蛋白质片段用于相对和绝对定量；(e)在血清样本中混合带有同位素标记的蛋白质片段；(f)以色谱法分离血清样本中的同位素标记的蛋白质片段并收集级分(fractions)；(g)以液相色谱串联质谱仪(LC-MS/MS)和Mascot软件分析识别级分中的低丰度(low-abundance)蛋白质；(h)通过对识别出的低丰度蛋白质进行火山图分析来选择糖尿病前期蛋白质标记的候选对象；(i)根据生物学功能将选定的候选对象分组；以及(j)将p<0.01和平均相对比率>1.3的候选对象识别为糖尿病前期蛋白质标记。所述选择步骤可以选择在火山图分析中大于1.3倍数变化且p值等于或小于0.05的候选对象。所述高丰度蛋白质可能包含白蛋白和IgG。
发现三种蛋白质Lama2、PLXDC2和MLL4可作为糖尿病前期和糖尿病的潜在诊断生物标记。这些蛋白质标记Lama2、PLXDC2和MLL4对糖尿病前期和糖尿病患者的照护和治疗方面具有临床应用，包括但不限于针对Lama2、PLXDC2和MLL4的特异性抗体在制造诊断套组中的用途、检测和识别糖尿病前期和/或糖尿病的方法、用于检测糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组以及使用所述诊断套组的方法。所述抗体包括捕获抗体和检测抗体。
在诊断套组装置/设备中，捕捉抗体和检测抗体的水平得到了优化，因此，只有当标记的水平超过临床上显著的阈值时，测试区域才会显示颜色信号。
实施例
方法
化学药品和试剂。使用的化学药品/试剂包括乙腈(acetonitrile,ACN)、三(2-羰基乙基)膦(Tris 2-carboxyethyl phosphine,TCEP)、甲硫代磺酸甲酯(methylmethanethiosulfonate,MMTS)、三乙基碳酸氢铵(triethylamonium bicarbonate,TEAB)、三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)、磷酸二氢钾(potassium dihydrogen phosphate,KH2P04)和氯化钾(potassium chloride,KCl)。
采集小鼠与人类血清样本。招募健康人和被诊断患有糖尿病前期的患者进行血液采集。在禁食12小时的条件下，从健康志愿者和糖尿病前期患者采集血液样本。从全血中分离出血清样本，分装样本以避免重复冷冻-解冻循环，然后保存在-80℃。测量体重和身高以计算身体质量指数(BMI)。空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酸甘油酯(TRIG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、胰岛素和白蛋白通过自动化临床实验室方法进行测定。C57Bl/6J和C57Bl/6J肥胖(db/db)小鼠在4周龄和6周龄时，如前所述方法测量体重、空腹血糖、糖化血红蛋白、三酸甘油酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、胰岛素和白蛋白水平(n＝3/每组)。从禁食16小时的小鼠采集血液样本。通过离心将血清自全血中分离并保存在-80℃。在无特定病原菌的动物房内以标准小鼠饲料和水饲养小鼠，该动物房具有控制的温度(22±2℃)、湿度(55±10％)和明/暗周期(12小时/12小时)。本研究的所有动物的照护及使用均基于实验动物照护及使用的规定。
蛋白质去除(depletion)。为了增强对低丰度蛋白质的检测和识别，使用
蛋白质消化(Protein digestion)和
强阳离子交换色谱(Strong cation exchange chromatography,SCX)分离。使用聚磺乙基(polysulfoethyl)A管柱(2.1x 200mm、粒径5um、
LC-MS/MS分析。将干燥的级分溶解在200ul的5％ACN/0.5％TFA中，使用C18旋转管柱脱盐，再次以离心浓缩机干燥，并以40ul的5％ACN/0.1％FA溶解进行LC-MS/MS分析。QEXACTIVE
蛋白质信号传递途径及功能分析。通过
免疫印迹法。从C57BL/6(B6)、非糖尿病(ND)和糖尿病前期(PD)db/db小鼠收集血清样本，然后用RIPA裂解缓冲液裂解。用6％和10％十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离对照组和糖尿病前期小鼠的每个器官/组织的总蛋白(50ug)，转移到硝酸纤维素膜上，使用抗LAMA2(1:2500,LifeSpan BioSciences，西雅图,W A,USA)、MLL4(1:500，圣克鲁斯,达拉斯,TX,USA)、PLXDC2(1:1000，Novus Biologicals,Littleton,科罗拉多,USA)的抗体和辣根过氧化物酶(HRP)-结合山羊和兔抗小鼠IgG作为二抗进行免疫印迹法。使用增强的化学发光(ECL)底物(EMD Millipore,Billerica,MA,USA)显影后，使用FLUORCHEM
ROC曲线。真阳性率(灵敏度)是根据ROC曲线中参数的不同截止点(cut-offpoint)的伪阳性率(100-特异性)绘制。ROC曲线上的每个点代表对应于特定决策阈值的灵敏度/特异性对(a sensitivity/specificity pair)。MLL4、LAMA2和PLXDC2的ROC曲线下面积(AUC)是衡量区分两个诊断组(患病/正常)程度的参数。
统计分析。实验数据以平均值±标准误差(standard error of the mean,SEM)表示。除非另有说明，否则以学生t检定来比对两组之间的差异。多组之间的比较则以ANOVA进行。P值小于0.05视为具统计上显著。
结果
使用定量蛋白质组学方法比较小鼠和人类来源的健康和糖尿病前期血清中差异表达的蛋白质。为了表征糖尿病(前期)的新颖且可靠的标记，结合
表1
各组的参数以平均值±标准误差表示。在健康小鼠和糖尿病前期小鼠之间具有显著变化的参数(P≤0.05)以星号表示。
健康和糖尿病前期小鼠根据其空腹血糖分组。我们发现两组之间的BW、FBG、HbA1c、TRIG和空腹胰岛素显著不同(表1)。收集两组的血清样本，然后去除其中大量的蛋白质，然后分别以胰蛋白酶进行消化处理。将三只健康小鼠的血清汇集在一起以使个体变异性最小化，然后用
我们以相同的方法来表征健康和糖尿病前期对象的血清蛋白，以比较和验证人类与小鼠之间的标记(发现，图1)。分析了人类对象的身体质量指数(BMI)和血清生化数值(表2)。我们发现健康组和糖尿病前期组之间的年龄、FBG、HbA1c、空腹胰岛素和白蛋白有显著差异(P≤0.05)(表2)。收集了男性的血清样本。去除大量蛋白质后，以胰蛋白酶消化处理剩余的蛋白质。汇集3名健康志愿者的血清并用
表2
各组的参数以平均值±标准误差表示。在健康小鼠和糖尿病前期小鼠之间具有显著变化的参数(P≤0.05)以星号表示。
表3结果显示，与健康志愿者相比，糖尿病前期患者的血清蛋白具有统计学意义(P<0.05)。
表3
为了进一步评估血清蛋白作为糖尿病前期标记的潜力，根据平均相对比率和p值对总共500种人来源的血清蛋白进行了火山图分析(图2)。转换后的火山图数据指出，人类血清蛋白中，倍数变化>1.3且P≤0.05的70种蛋白质可能是糖尿病前期的候选标记(图2和表3)，并需要再进行验证。
所选血清蛋白的基因本体学和生物途径分析
为了获得关于所选如表3所示的70种蛋白质其生物学功能的深入信息，通过基因本体学和
接下来，我们通过选择P<0.01且平均相对比率>1.3的蛋白质来缩小候选标记的数量。在这种严格的选择条件下脱颖而出有七个蛋白质：层粘连蛋白亚基α2(LAMA2)、血清淀粉样蛋白A2(SAA2)、含丛蛋白结构域2(PLXDC2)、单核细胞分化抗原CD14(CD14)、CD99抗原(CD99)、组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶MLL4(MLL4)和簇蛋白(CLU)。以这种筛选策略作为识别糖尿病(前期)潜在标记的效果很好。例如，CD99抗原(EP1828774A1)和CLU(US8673644B2)已申请作为糖尿病标记的专利。SAA据报导在肥胖和胰岛素抗性者的人的血浆中增加，且作为小鼠胰岛素抗性的标记。CD14据报导可调节发炎驱动的胰岛素抗性，并确定作为糖尿病和葡萄糖耐量降低(impaired glucose tolerance)女性的发炎标记。这4种蛋白质显示我们的数据高度可靠。此外，一些证据显示，其余3种蛋白质是糖尿病的新标记。MLL4据报导与转录因子相互作用以调节胰岛β细胞功能。LAMA2突变被证明可导致缺乏分层蛋白(merosin)的先天性肌肉营养不良。已知PLXDC2在神经系统发育过程中调节分化和增殖。
为了更好地理解T2D之前和期间这些蛋白质变化的生物学意义，使用了基于网络的
通过免疫印迹法确认具有潜力的标记MLL4、LAMA2以及PLXDC2。
为了验证使用7种血清蛋白MLL4、LAMA2、PLXDC2、CD99、CLU、SAA2和CD14作为糖尿病前期标记的可行性，选择具有高统计信赖度且新颖性的MLL4、LAMA2和PLXDC2。已发表过的标记CD99、CLU、SAA2和CD14则用于与新型标记的可靠度进行比较。我们使用免疫印迹法来证实数据。免疫印迹法数据指出，在5位糖尿病前期对象血清中，MLL4、LAMA2和PLXDC2的水平上调(图4A)。ROC曲线被用来作为诊断测试评估的工具。ROC曲线图用于说明血清MLL4、LAMA2和PLXDC2的诊断功效。他们的鉴别阈值和曲线下面积(AUC)被用来评估每种蛋白质的诊断价值。MLL4、LAMA2和PLXDC2的曲线下面积分别为0.95795、0.9257和0.91445(图4B)。MLL4、LAMA2和PLXDC2的灵敏度、特异性和准确性分别为71.42％,71.42％和71.42％(图4C)。
图4D显示了使用多种蛋白质标记用于检测糖尿病前期和/或糖尿病的诊断套组装置/设备(“诊断套组”)400。诊断套组400包括：(i)基板402，其具有顶部表面404和与该顶部表面404相对的底部表面406，以及顶端408和与该顶端408相对的底端410；(ii)样本装载区域420；(iii)捕捉抗体区域(测试读取区域)426，其包含捕捉抗体以捕获包括MLL4 428、LAMA2 430和PLXDC2 432的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；(iv)试剂区域424，涂布有调节剂；(v)检测抗体区域422，其包含检测抗体以可视化该捕捉抗体区域(测试读取区域)426中被捕获的包含MLL4 428、LAMA2430和PLXDC2 432的糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记；(vi)可选地阳性对照区域434，其中所述样本装载区域420、所述检测抗体区域422、所述试剂区域424、所述捕捉抗体区域426和所述阳性对照区域434位于所述基板402上的顶部表面404，这些区域可以流体连通，所述样本装载区域420位于所述顶端408，所述捕捉抗体区域426位于所述底端410，所述可选的阳性对照区域434位于所述捕捉抗体区域426之后或之前。
其他糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记也可以与MLL4 428、LAMA2 430和PLXDC2432一起包括在本发明的诊断套组装置/设备400中。在这种情况下，所述捕获抗体还包含针对其他糖尿病前期和糖尿病蛋白质标记具有特异性的抗体。所述样本装载区域420、所述检测抗体区域422、所述试剂区域424和所述捕捉抗体区域426可以依序地位于所述基板402的顶部表面404上，并且所述任选地阳性对照区域434位于所述捕捉抗体区域426之后或之前。或者，所述样本装载区域420、所述试剂区域424、所述检测抗体区域422和所述捕捉抗体区域426依序地位于所述任选的阳性对照区域434，其位于所述捕捉抗体区域426之后或之前。
所述捕捉抗体区域426包含针对分析物(蛋白质标记)的抗体(一抗)，其被固定在所述区域426上。所述检测抗体区域422包含针对与酶或其他分子缀合的分析物(蛋白质标记)的抗体(二抗)，以可视化所述捕捉抗体区域(或测试读取区域)426中的结合反应。酶的例子可以是辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。当使用基于酶的测定检测系统时，所述试剂区域可以包含形成颜色的底物和缓冲液，或者当使用基于不是酶的测定检测系统时，所述试剂区域可以仅包含缓冲液。所述阳性对照区域用来表示诊断套组功能正常。它可能包含固定住的非缀合酶，或者固定住的针对一种或多种检测抗体的抗体。所有抗体和试剂都被吸附、涂布或固定在基板上。
本发明的诊断套组装置/设备被设计用于进行如美国专利第8,399,261号和Serebrennikova等人(2018)(“Herarchical Nanogod Labels to Improve theSensitivity of Lateral Flow Immunoassay”Nano-Micro Lett.10:24)所公开的侧向流动免疫测定，这两个文献皆完整地通过引用纳入本文。
总而言之，我们结合了
选择和描述了实施方式和实施例用以解释本发明的原理及其实际应用，以便使所属领域的其他技术人员能够利用本发明和各种实施方式并进行各种修改，以适合于预期的特定用途。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，替代实施方式对于本发明所属领域的技术人员将变得显而易见。本说明书中引用和讨论的所有参考文献均以参考文献的形式完整地纳入本说明书，其程度与每个参考文献以参考文献的方式单独纳入本说明书相同。
SEQUENCE LISTING
<110> 施明哲
<120> LAMA2、PLXDC2 及 MLL4 作为糖尿病前期和糖尿病的新型生物标记
<130> 10011-060PCT
<150> 62849118
<151> 2019-05-16
<150> 62849118
<151> 2019-05-16
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2715
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Ala Ala Ala Ala Gly Gly Gly Ser Cys Pro Gly Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Arg Gly Arg Phe Pro Gly Arg Pro Arg Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Arg Gly Gly Arg Gly Asn Gly Ala Glu Arg Val Arg Val Ala Leu Arg
35 40 45
Arg Gly Gly Gly Ala Thr Gly Pro Gly Gly Ala Glu Pro Gly Glu Asp
50 55 60
Thr Ala Leu Leu Arg Leu Leu Gly Leu Arg Arg Gly Leu Arg Arg Leu
65 70 75 80
Arg Arg Leu Trp Ala Gly Pro Arg Val Gln Arg Gly Arg Gly Arg Gly
85 90 95
Arg Gly Arg Gly Trp Gly Pro Ser Arg Gly Cys Val Pro Glu Glu Glu
100 105 110
Ser Ser Asp Gly Glu Ser Asp Glu Glu Glu Phe Gln Gly Phe His Ser
115 120 125
Asp Glu Asp Val Ala Pro Ser Ser Leu Arg Ser Ala Leu Arg Ser Gln
130 135 140
Arg Gly Arg Ala Pro Arg Gly Arg Gly Arg Lys His Lys Thr Thr Pro
145 150 155 160
Leu Pro Pro Pro Arg Leu Ala Asp Val Ala Pro Thr Pro Pro Lys Thr
165 170 175
Pro Ala Arg Lys Arg Gly Glu Glu Gly Thr Glu Arg Met Val Gln Ala
180 185 190
Leu Thr Glu Leu Leu Arg Arg Ala Gln Ala Pro Gln Ala Pro Arg Ser
195 200 205
Arg Ala Cys Glu Pro Ser Thr Pro Arg Arg Ser Arg Gly Arg Pro Pro
210 215 220
Gly Arg Pro Ala Gly Pro Cys Arg Arg Lys Gln Gln Ala Val Val Val
225 230 235 240
Ala Glu Ala Ala Val Thr Ile Pro Lys Pro Glu Pro Pro Pro Pro Val
245 250 255
Val Pro Val Lys His Gln Thr Gly Ser Trp Lys Cys Lys Glu Gly Pro
260 265 270
Gly Pro Gly Pro Gly Thr Pro Arg Arg Gly Gly Gln Ser Ser Arg Gly
275 280 285
Gly Arg Gly Gly Arg Gly Arg Gly Arg Gly Gly Gly Leu Pro Phe Val
290 295 300
Ile Lys Phe Val Ser Arg Ala Lys Lys Val Lys Met Gly Gln Leu Ser
305 310 315 320
Leu Gly Leu Glu Ser Gly Gln Gly Gln Gly Gln His Glu Glu Ser Trp
325 330 335
Gln Asp Val Pro Gln Arg Arg Val Gly Ser Gly Gln Gly Gly Ser Pro
340 345 350
Cys Trp Lys Lys Gln Glu Gln Lys Leu Asp Asp Glu Glu Glu Glu Lys
355 360 365
Lys Glu Glu Glu Glu Lys Asp Lys Glu Gly Glu Glu Lys Glu Glu Arg
370 375 380
Ala Val Ala Glu Glu Met Met Pro Ala Ala Glu Lys Glu Glu Ala Lys
385 390 395 400
Leu Pro Pro Pro Pro Leu Thr Pro Pro Ala Pro Ser Pro Pro Pro Pro
405 410 415
Leu Pro Pro Pro Ser Thr Ser Pro Pro Pro Pro Leu Cys Pro Pro Pro
420 425 430
Pro Pro Pro Val Ser Pro Pro Pro Leu Pro Ser Pro Pro Pro Pro Pro
435 440 445
Ala Gln Glu Glu Gln Glu Glu Ser Pro Pro Pro Val Val Pro Ala Thr
450 455 460
Cys Ser Arg Lys Arg Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Ser Gln Arg Ala
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Glu Arg Glu Ala Ala Arg Ala Gly Pro Glu Gly Thr Ser Pro Pro Thr
485 490 495
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Val Ala Pro Lys Ser Thr Thr Phe Leu Lys Asn Ile Arg Gln Phe Ile
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Met Pro Val Val Ser Ala Arg Ser Ser Arg Val Ile Lys Thr Pro Arg
530 535 540
Arg Phe Met Asp Glu Asp Pro Pro Lys Pro Pro Lys Val Glu Val Ser
545 550 555 560
Pro Val Leu Arg Pro Pro Ile Thr Thr Ser Pro Pro Val Pro Gln Glu
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Pro Ala Pro Val Pro Ser Pro Pro Arg Ala Pro Thr Pro Pro Ser Thr
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Pro Val Pro Leu Pro Glu Lys Arg Arg Ser Ile Leu Arg Glu Pro Thr
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Pro Pro Pro Pro Pro Ala Pro Ser Pro Pro Pro Ala Pro Ala Thr Ser
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Ser Arg Arg Pro Leu Leu Leu Arg Ala Pro Gln Phe Thr Pro Ser Glu
645 650 655
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Val Glu Ala Lys Arg Glu Arg Pro Ser Gly Pro Glu Ser Pro Val Gln
850 855 860
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Met Arg Met Ala Arg Cys Gly His Cys Arg Gly Cys Leu Arg Val Gln
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Asn Val Leu Ile Gly Ser Ile Arg Ile Asp Ser Leu Gly Thr Leu
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Pro Pro Glu Asp Leu Gly Pro Asp Phe Glu Asp Met Glu Val Val
1970 1975 1980
Ser Gly Leu Ser Ala Ala Asp Leu Asp Phe Ala Ala Ser Leu Leu
1985 1990 1995
Gly Thr Glu Pro Phe Gln Glu Glu Ile Val Ala Ala Gly Ala Met
2000 2005 2010
Gly Ser Ser His Gly Gly Pro Gly Asp Ser Ser Glu Glu Glu Ser
2015 2020 2025
Ser Pro Thr Ser Arg Tyr Ile His Phe Pro Val Thr Val Val Ser
2030 2035 2040
Ala Pro Gly Leu Ala Pro Ser Ala Thr Pro Gly Ala Pro Arg Ile
2045 2050 2055
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Gly Val Val Arg Ala Gly Val Leu Gly Ala Ala Gly Asp Arg Ala
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2420 2425 2430
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2435 2440 2445
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2450 2455 2460
Leu Leu Gly Ile His His Asp Ala Val Ile Phe Leu Ala Glu Gln
2465 2470 2475
Leu Pro Gly Ala Gln Arg Cys Gln His Tyr Lys Phe Arg Tyr His
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2495 2500 2505
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2510 2515 2520
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2525 2530 2535
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2540 2545 2550
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2630 2635 2640
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2645 2650 2655
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2660 2665 2670
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<210> 2
<211> 3122
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
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210 215 220
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225 230 235 240
Ile Arg Leu Arg Phe Gln Arg Ile Arg Thr Leu Asn Ala Asp Leu Met
245 250 255
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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485 490 495
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515 520 525
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Val Lys Gly Leu Pro Asn Asp Cys Gln Gln Cys Ala Cys Pro Leu
1460 1465 1470
Ile Ser Ser Ser Asn Asn Phe Ser Pro Ser Cys Val Ala Glu Gly
1475 1480 1485
Leu Asp Asp Tyr Arg Cys Thr Ala Cys Pro Arg Gly Tyr Glu Gly
1490 1495 1500
Gln Tyr Cys Glu Arg Cys Ala Pro Gly Tyr Thr Gly Ser Pro Gly
1505 1510 1515
Asn Pro Gly Gly Ser Cys Gln Glu Cys Glu Cys Asp Pro Tyr Gly
1520 1525 1530
Ser Leu Pro Val Pro Cys Asp Pro Val Thr Gly Phe Cys Thr Cys
1535 1540 1545
Arg Pro Gly Ala Thr Gly Arg Lys Cys Asp Gly Cys Lys His Trp
1550 1555 1560
His Ala Arg Glu Gly Trp Glu Cys Val Phe Cys Gly Asp Glu Cys
1565 1570 1575
Thr Gly Leu Leu Leu Gly Asp Leu Ala Arg Leu Glu Gln Met Val
1580 1585 1590
Met Ser Ile Asn Leu Thr Gly Pro Leu Pro Ala Pro Tyr Lys Met
1595 1600 1605
Leu Tyr Gly Leu Glu Asn Met Thr Gln Glu Leu Lys His Leu Leu
1610 1615 1620
Ser Pro Gln Arg Ala Pro Glu Arg Leu Ile Gln Leu Ala Glu Gly
1625 1630 1635
Asn Leu Asn Thr Leu Val Thr Glu Met Asn Glu Leu Leu Thr Arg
1640 1645 1650
Ala Thr Lys Val Thr Ala Asp Gly Glu Gln Thr Gly Gln Asp Ala
1655 1660 1665
Glu Arg Thr Asn Thr Arg Ala Lys Ser Leu Gly Glu Phe Ile Lys
1670 1675 1680
Glu Leu Ala Arg Asp Ala Glu Ala Val Asn Glu Lys Ala Ile Lys
1685 1690 1695
Leu Asn Glu Thr Leu Gly Thr Arg Asp Glu Ala Phe Glu Arg Asn
1700 1705 1710
Leu Glu Gly Leu Gln Lys Glu Ile Asp Gln Met Ile Lys Glu Leu
1715 1720 1725
Arg Arg Lys Asn Leu Glu Thr Gln Lys Glu Ile Ala Glu Asp Glu
1730 1735 1740
Leu Val Ala Ala Glu Ala Leu Leu Lys Lys Val Lys Lys Leu Phe
1745 1750 1755
Gly Glu Ser Arg Gly Glu Asn Glu Glu Met Glu Lys Asp Leu Arg
1760 1765 1770
Glu Lys Leu Ala Asp Tyr Lys Asn Lys Val Asp Asp Ala Trp Asp
1775 1780 1785
Leu Leu Arg Glu Ala Thr Asp Lys Ile Arg Glu Ala Asn Arg Leu
1790 1795 1800
Phe Ala Val Asn Gln Lys Asn Met Thr Ala Leu Glu Lys Lys Lys
1805 1810 1815
Glu Ala Val Glu Ser Gly Lys Arg Gln Ile Glu Asn Thr Leu Lys
1820 1825 1830
Glu Gly Asn Asp Ile Leu Asp Glu Ala Asn Arg Leu Ala Asp Glu
1835 1840 1845
Ile Asn Ser Ile Ile Asp Tyr Val Glu Asp Ile Gln Thr Lys Leu
1850 1855 1860
Pro Pro Met Ser Glu Glu Leu Asn Asp Lys Ile Asp Asp Leu Ser
1865 1870 1875
Gln Glu Ile Lys Asp Arg Lys Leu Ala Glu Lys Val Ser Gln Ala
1880 1885 1890
Glu Ser His Ala Ala Gln Leu Asn Asp Ser Ser Ala Val Leu Asp
1895 1900 1905
Gly Ile Leu Asp Glu Ala Lys Asn Ile Ser Phe Asn Ala Thr Ala
1910 1915 1920
Ala Phe Lys Ala Tyr Ser Asn Ile Lys Asp Tyr Ile Asp Glu Ala
1925 1930 1935
Glu Lys Val Ala Lys Glu Ala Lys Asp Leu Ala His Glu Ala Thr
1940 1945 1950
Lys Leu Ala Thr Gly Pro Arg Gly Leu Leu Lys Glu Asp Ala Lys
1955 1960 1965
Gly Cys Leu Gln Lys Ser Phe Arg Ile Leu Asn Glu Ala Lys Lys
1970 1975 1980
Leu Ala Asn Asp Val Lys Glu Asn Glu Asp His Leu Asn Gly Leu
1985 1990 1995
Lys Thr Arg Ile Glu Asn Ala Asp Ala Arg Asn Gly Asp Leu Leu
2000 2005 2010
Arg Thr Leu Asn Asp Thr Leu Gly Lys Leu Ser Ala Ile Pro Asn
2015 2020 2025
Asp Thr Ala Ala Lys Leu Gln Ala Val Lys Asp Lys Ala Arg Gln
2030 2035 2040
Ala Asn Asp Thr Ala Lys Asp Val Leu Ala Gln Ile Thr Glu Leu
2045 2050 2055
His Gln Asn Leu Asp Gly Leu Lys Lys Asn Tyr Asn Lys Leu Ala
2060 2065 2070
Asp Ser Val Ala Lys Thr Asn Ala Val Val Lys Asp Pro Ser Lys
2075 2080 2085
Asn Lys Ile Ile Ala Asp Ala Asp Ala Thr Val Lys Asn Leu Glu
2090 2095 2100
Gln Glu Ala Asp Arg Leu Ile Asp Lys Leu Lys Pro Ile Lys Glu
2105 2110 2115
Leu Glu Asp Asn Leu Lys Lys Asn Ile Ser Glu Ile Lys Glu Leu
2120 2125 2130
Ile Asn Gln Ala Arg Lys Gln Ala Asn Ser Ile Lys Val Ser Val
2135 2140 2145
Ser Ser Gly Gly Asp Cys Ile Arg Thr Tyr Lys Pro Glu Ile Lys
2150 2155 2160
Lys Gly Ser Tyr Asn Asn Ile Val Val Asn Val Lys Thr Ala Val
2165 2170 2175
Ala Asp Asn Leu Leu Phe Tyr Leu Gly Ser Ala Lys Phe Ile Asp
2180 2185 2190
Phe Leu Ala Ile Glu Met Arg Lys Gly Lys Val Ser Phe Leu Trp
2195 2200 2205
Asp Val Gly Ser Gly Val Gly Arg Val Glu Tyr Pro Asp Leu Thr
2210 2215 2220
Ile Asp Asp Ser Tyr Trp Tyr Arg Ile Val Ala Ser Arg Thr Gly
2225 2230 2235
Arg Asn Gly Thr Ile Ser Val Arg Ala Leu Asp Gly Pro Lys Ala
2240 2245 2250
Ser Ile Val Pro Ser Thr His His Ser Thr Ser Pro Pro Gly Tyr
2255 2260 2265
Thr Ile Leu Asp Val Asp Ala Asn Ala Met Leu Phe Val Gly Gly
2270 2275 2280
Leu Thr Gly Lys Leu Lys Lys Ala Asp Ala Val Arg Val Ile Thr
2285 2290 2295
Phe Thr Gly Cys Met Gly Glu Thr Tyr Phe Asp Asn Lys Pro Ile
2300 2305 2310
Gly Leu Trp Asn Phe Arg Glu Lys Glu Gly Asp Cys Lys Gly Cys
2315 2320 2325
Thr Val Ser Pro Gln Val Glu Asp Ser Glu Gly Thr Ile Gln Phe
2330 2335 2340
Asp Gly Glu Gly Tyr Ala Leu Val Ser Arg Pro Ile Arg Trp Tyr
2345 2350 2355
Pro Asn Ile Ser Thr Val Met Phe Lys Phe Arg Thr Phe Ser Ser
2360 2365 2370
Ser Ala Leu Leu Met Tyr Leu Ala Thr Arg Asp Leu Arg Asp Phe
2375 2380 2385
Met Ser Val Glu Leu Thr Asp Gly His Ile Lys Val Ser Tyr Asp
2390 2395 2400
Leu Gly Ser Gly Met Ala Ser Val Val Ser Asn Gln Asn His Asn
2405 2410 2415
Asp Gly Lys Trp Lys Ser Phe Thr Leu Ser Arg Ile Gln Lys Gln
2420 2425 2430
Ala Asn Ile Ser Ile Val Asp Ile Asp Thr Asn Gln Glu Glu Asn
2435 2440 2445
Ile Ala Thr Ser Ser Ser Gly Asn Asn Phe Gly Leu Asp Leu Lys
2450 2455 2460
Ala Asp Asp Lys Ile Tyr Phe Gly Gly Leu Pro Thr Leu Arg Asn
2465 2470 2475
Leu Ser Met Lys Ala Arg Pro Glu Val Asn Leu Lys Lys Tyr Ser
2480 2485 2490
Gly Cys Leu Lys Asp Ile Glu Ile Ser Arg Thr Pro Tyr Asn Ile
2495 2500 2505
Leu Ser Ser Pro Asp Tyr Val Gly Val Thr Lys Gly Cys Ser Leu
2510 2515 2520
Glu Asn Val Tyr Thr Val Ser Phe Pro Lys Pro Gly Phe Val Glu
2525 2530 2535
Leu Ser Pro Val Pro Ile Asp Val Gly Thr Glu Ile Asn Leu Ser
2540 2545 2550
Phe Ser Thr Lys Asn Glu Ser Gly Ile Ile Leu Leu Gly Ser Gly
2555 2560 2565
Gly Thr Pro Ala Pro Pro Arg Arg Lys Arg Arg Gln Thr Gly Gln
2570 2575 2580
Ala Tyr Tyr Ala Ile Leu Leu Asn Arg Gly Arg Leu Glu Val His
2585 2590 2595
Leu Ser Thr Gly Ala Arg Thr Met Arg Lys Ile Val Ile Arg Pro
2600 2605 2610
Glu Pro Asn Leu Phe His Asp Gly Arg Glu His Ser Val His Val
2615 2620 2625
Glu Arg Thr Arg Gly Ile Phe Thr Val Gln Val Asp Glu Asn Arg
2630 2635 2640
Arg Tyr Met Gln Asn Leu Thr Val Glu Gln Pro Ile Glu Val Lys
2645 2650 2655
Lys Leu Phe Val Gly Gly Ala Pro Pro Glu Phe Gln Pro Ser Pro
2660 2665 2670
Leu Arg Asn Ile Pro Pro Phe Glu Gly Cys Ile Trp Asn Leu Val
2675 2680 2685
Ile Asn Ser Val Pro Met Asp Phe Ala Arg Pro Val Ser Phe Lys
2690 2695 2700
Asn Ala Asp Ile Gly Arg Cys Ala His Gln Lys Leu Arg Glu Asp
2705 2710 2715
Glu Asp Gly Ala Ala Pro Ala Glu Ile Val Ile Gln Pro Glu Pro
2720 2725 2730
Val Pro Thr Pro Ala Phe Pro Thr Pro Thr Pro Val Leu Thr His
2735 2740 2745
Gly Pro Cys Ala Ala Glu Ser Glu Pro Ala Leu Leu Ile Gly Ser
2750 2755 2760
Lys Gln Phe Gly Leu Ser Arg Asn Ser His Ile Ala Ile Ala Phe
2765 2770 2775
Asp Asp Thr Lys Val Lys Asn Arg Leu Thr Ile Glu Leu Glu Val
2780 2785 2790
Arg Thr Glu Ala Glu Ser Gly Leu Leu Phe Tyr Met Ala Arg Ile
2795 2800 2805
Asn His Ala Asp Phe Ala Thr Val Gln Leu Arg Asn Gly Leu Pro
2810 2815 2820
Tyr Phe Ser Tyr Asp Leu Gly Ser Gly Asp Thr His Thr Met Ile
2825 2830 2835
Pro Thr Lys Ile Asn Asp Gly Gln Trp His Lys Ile Lys Ile Met
2840 2845 2850
Arg Ser Lys Gln Glu Gly Ile Leu Tyr Val Asp Gly Ala Ser Asn
2855 2860 2865
Arg Thr Ile Ser Pro Lys Lys Ala Asp Ile Leu Asp Val Val Gly
2870 2875 2880
Met Leu Tyr Val Gly Gly Leu Pro Ile Asn Tyr Thr Thr Arg Arg
2885 2890 2895
Ile Gly Pro Val Thr Tyr Ser Ile Asp Gly Cys Val Arg Asn Leu
2900 2905 2910
His Met Ala Glu Ala Pro Ala Asp Leu Glu Gln Pro Thr Ser Ser
2915 2920 2925
Phe His Val Gly Thr Cys Phe Ala Asn Ala Gln Arg Gly Thr Tyr
2930 2935 2940
Phe Asp Gly Thr Gly Phe Ala Lys Ala Val Gly Gly Phe Lys Val
2945 2950 2955
Gly Leu Asp Leu Leu Val Glu Phe Glu Phe Arg Thr Thr Thr Thr
2960 2965 2970
Thr Gly Val Leu Leu Gly Ile Ser Ser Gln Lys Met Asp Gly Met
2975 2980 2985
Gly Ile Glu Met Ile Asp Glu Lys Leu Met Phe His Val Asp Asn
2990 2995 3000
Gly Ala Gly Arg Phe Thr Ala Val Tyr Asp Ala Gly Val Pro Gly
3005 3010 3015
His Leu Cys Asp Gly Gln Trp His Lys Val Thr Ala Asn Lys Ile
3020 3025 3030
Lys His Arg Ile Glu Leu Thr Val Asp Gly Asn Gln Val Glu Ala
3035 3040 3045
Gln Ser Pro Asn Pro Ala Ser Thr Ser Ala Asp Thr Asn Asp Pro
3050 3055 3060
Val Phe Val Gly Gly Phe Pro Asp Asp Leu Lys Gln Phe Gly Leu
3065 3070 3075
Thr Thr Ser Ile Pro Phe Arg Gly Cys Ile Arg Ser Leu Lys Leu
3080 3085 3090
Thr Lys Gly Thr Gly Lys Pro Leu Glu Val Asn Phe Ala Lys Ala
3095 3100 3105
Leu Glu Leu Arg Gly Val Gln Pro Val Ser Cys Pro Ala Asn
3110 3115 3120
<210> 3
<211> 480
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Met Ala Arg Phe Pro Lys Ala Asp Leu Ala Ala Ala Gly Val Met Leu
1 5 10 15
Leu Cys His Phe Phe Thr Asp Gln Phe Gln Phe Ala Asp Gly Lys Pro
20 25 30
Gly Asp Gln Ile Leu Asp Trp Gln Tyr Gly Val Thr Gln Ala Phe Pro
35 40 45
His Thr Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Ser His Ala Tyr Ser His Arg
50 55 60
Trp Lys Arg Asn Leu Asp Phe Leu Lys Ala Val Asp Thr Asn Arg Ala
65 70 75 80
Ser Val Gly Gln Asp Ser Pro Glu Pro Arg Ser Phe Thr Asp Leu Leu
85 90 95
Leu Asp Asp Gly Gln Asp Asn Asn Thr Gln Ile Glu Arg Val Asn Leu
100 105 110
Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly His Phe Leu Arg Glu Ile Thr Val
115 120 125
Ala Thr Gly Gly Phe Ile Tyr Thr Gly Glu Val Val His Arg Met Leu
130 135 140
Thr Ala Thr Gln Tyr Ile Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asp Pro Ser
145 150 155 160
Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr Ala Leu
165 170 175
Val Val Gln Trp Asp His Val His Leu Gln Asp Asn Tyr Asn Leu Gly
180 185 190
Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg Ile Ile Phe
195 200 205
Gly Tyr Lys Glu Ile Pro Val Leu Val Thr Gln Ile Ser Ser Thr Asn
210 215 220
His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val His Arg
225 230 235 240
Ile Gln Gln Ile Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr Ile Tyr Glu Tyr His
245 250 255
Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys Ile Thr Asn Ile Ser Ala Val Glu
260 265 270
Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly Pro Cys
275 280 285
Val Ser Ser Gln Ile Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys Leu Gln
290 295 300
Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg His Arg Gln Asp Trp Val Asp Ser
305 310 315 320
Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr Glu Pro
325 330 335
Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr Val Gly Ala Thr Thr Thr
340 345 350
Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr Ser Gln Phe
355 360 365
Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys Ile Ala Leu His Leu
370 375 380
Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys Gly
385 390 395 400
Gly Thr Leu His Ala Gly Leu Ile Ile Gly Ile Leu Ile Leu Val Leu
405 410 415
Ile Val Ala Thr Ala Ile Leu Val Thr Val Tyr Met Tyr His His Pro
420 425 430
Thr Ser Ala Ala Ser Ile Phe Phe Ile Glu Arg Arg Pro Ser Arg Trp
435 440 445
Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg Gly Ser Gly His Pro Ala Tyr Ala Glu
450 455 460
Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu Gly Phe Ile Val Ser Glu Gln Cys
465 470 475 480
机译： LAMA2、PLXDC2和MLL4作为糖尿病前期和糖尿病的新生物标志物
机译： 预防和治疗糖尿病前期，糖尿病和其他胰岛素抵抗病例的新型增效中药配方
机译： 与糖尿病前期，糖尿病和糖尿病相关症状相关的生物标志物
