一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法

摘要

本发明公开了一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体包括以下步骤：a、供试品溶液的制备两份；b、供试品溶液的制备；c、对照品溶液的制备；d、分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明通过特定的样品溶剂和色谱条件，可以检测法莫替丁注射液中维生素C，结果准确，快速、灵敏度高，为含维生素C的法莫替丁注射液的质量控制提供了新方法。

说明书

技术领域

本发明涉及药品检测领域，具体涉及一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法。

背景技术

法莫替丁注射液属于抑制胃酸分泌药，有效成分法莫替丁是组胺H2受体阻滞药，对胃酸有明显的抑制作用，可以抑制胃蛋白酶分泌，对实验性胃溃疡有保护作用，因此，对于胃酸所致的胃炎以及相关的溃疡都有治疗作用。

法莫替丁注射液中的主药法莫替丁属氧敏感物质，易被氧化，通过加入另一种易感物质维生素C，可与法莫替丁竞争氧气，从而起到保护药物活性成分法莫替丁的作用。但由于维生素C在法莫替丁注射液中不稳定，也难被有效分离，故对加入维生素C的法莫替丁注射液的质量不易控制。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法，它包括以下步骤：

a、对照品溶液的制备：取维生素C对照品，加溶剂溶解，即得；

b、供试品溶液的制备：取法莫替丁注射液，加溶剂稀释3～5倍，即得；

c、分别吸取对照品溶液和法莫替丁注射液注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈水溶液为流动相B；进样器温度：4℃；

梯度洗脱程序为：

d、按如下公式计算维生素C含量：

其中：A

所述溶剂为含乙二胺四乙酸二钠和磷酸二氢钾的水溶液；

进一步地，步骤a所述维生素C对照品与溶剂的质量体积比为5mg：20ml。

进一步地，步骤b所述法莫替丁注射液与溶剂的体积比为2.5ml：10ml。

进一步地，步骤c所述色谱条件中色谱柱为GL Inertsustain C18，250×4.6mm、5μm，波长200～250nm，柱温25～40℃，进样器温度4℃，进样量5～25μl。

更进一步地，所述柱温30℃，波长210nm，进样量5μl。

进一步地，所述溶剂为pH值2.0～4.0每1ml含0.3～0.67mg乙二胺四乙酸二钠和1.0～3.0mg磷酸二氢钾的水溶液。

更进一步地，所述溶剂为pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液。

进一步地，所述流动相A为1～5mg/mL磷酸二氢钾溶液；所述流动相B为70～80％，ml/ml乙腈水溶液。

更进一步地，所述流动相A为2.04mg/mL磷酸二氢钾溶液；所述流动相B为73％，ml/ml乙腈水溶液。

进一步地，步骤d所述

其中，A

更进一步地，所述法莫替丁注射液的成分包括法莫替丁、烟酰胺、维生素C、D-甘露醇、乳酸、氢氧化钠和注射用水。

经检测分析试验发现，组成成分中含维生素C的法莫替丁注射液，经高效液相色谱常温进样检测的准确性和精密度差，维生素C含量比实际添加量偏低2％～5％。本发明法莫替丁注射液中维生素C含量检测方法，通过特定的样品溶剂和色谱条件，可以检测法莫替丁注射液中维生素C，结果准确，快速、灵敏度高，为含维生素C的法莫替丁注射液的质量控制提供了新方法，也为法莫替丁注射液的质量控制标准的提高提供了方法依据，同时为扩大法莫替丁注射液的临床应用提供了参考依据，具有良好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1溶剂空白色谱图

图2未降解空白辅料溶液色谱图

图3未降解供试品溶液色谱图

图4维生素对照品溶液色谱图

图5强氧化降解空白辅料溶液色谱图

图6强氧化降解供试品溶液色谱图

图7强酸降解空白辅料溶液色谱图

图8强酸降解供试品溶液色谱图

图9强碱降解空白辅料溶液色谱图

图10强碱降解供试品溶液色谱图

图11高温降解空白辅料溶液色谱图

图12高温降解供试品溶液色谱图

图13强光降解空白辅料溶液色谱图

图14强光降解供试品溶液色谱图

图15维生素C线性图

具体实施方式

实施例1法莫替丁注射液中维生素C含量测定

a、对照品溶液的制备：取维生素C对照品5mg，精密称定，置20ml量瓶中，用pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液溶解并稀释至刻度，即得，平行配制2份对照品溶液。

b、供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用pH值3.0每1ml含0.56mg乙二胺四乙酸二钠和2.0mg磷酸二氢钾的水溶液稀释至刻度，摇匀。

c、分别吸取5μl对照品溶液和法莫替丁注射液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：

色谱柱：GL Inertsustain C18，250×4.6mm、5μm；检测波长：210nm；柱温：30℃；流动相：以2.04mg/mL磷酸二氢钾溶液为流动相A，以73％乙腈水溶液为流动相B；进样器温度：4℃；梯度洗脱程序为：

d、按下式计算法莫替丁注射液的维生素C：

其中：A

V

以下通过试验例说明本发明的有益效果

试验例1方法学研究

1.用于验证的法莫替丁注射液

法莫替丁注射液的处方(标示装量1mL)

法莫替丁注射液溶配工序：

(1)主药及辅料溶解

于500L浓配罐中加入注射用水，开启氮气，充氮至配液罐顶空残氧量＜2.0％，控制注射用水温度40～50℃，备用。

量取40～50℃充氮后注射用水置于稀配罐中，设置搅拌频率为30±2Hz并开启搅拌，开启氮气，充氮至配液罐顶空残氧量＜2.0％。依次加入乳酸、烟酰胺、维生素C、甘露醇和法莫替丁(避光操作)，再次充氮至配液罐顶空残氧量＜2.0％，搅拌30min至溶液澄清，开启小循环5min。

(2)调节pH

称取充氮后注射用水置于不锈钢桶中，加入氢氧化钠，搅拌至完全溶解，再次充氮5min，即得0.2M氢氧化钠溶液。于配制罐加入氢氧化钠溶液约，调节溶液pH为5.8～6.2。

(3)定容

用35℃以下充氮后注射用水定容至，循环搅拌5min。过程中持续向罐内充氮，保证配液罐顶空残氧量＜2.0％。

2.验证内容

维生素C分析方法的专属性、系统精密度、溶液稳定性、线性与范围、准确度、精密度(重复性与中间精密度)、耐用性。

3.验证可接受标准

表1.验证可接受标准

4.验证的实施步骤

4.1.仪器配置

表2.仪器配置

4.2.验证所使用的试剂与对照品

表3.试剂与对照品

4.3.待验证的分析方法

4.3.1.实验条件

检测波长：210nm；色谱柱：GL Inertsustain C18，250×4.6mm、5μm；柱温：30℃；进样盘温度：4℃；进样量：5μl；流速：0.6～1.5ml/min；流动相A：磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾2.04g，加水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0)；流动性B：73％乙腈；洗针溶液：0.2％磷酸；梯度洗脱：

4.3.2.溶液配制

溶剂：称取乙二胺四乙酸二钠0.56g与磷酸二氢钾2.0g，加入纯化水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0。

对照品溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度。平行配制2份。

供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。平行配制2份。

4.3.3.系统适用性要求

供试品溶液色谱图中，维生素C峰与相邻峰分离度应大于1.5，维生素C峰拖尾因子应不大于1.5，理论塔板数按维生素C峰计算不得低于5000。

4.3.4.测定

取空白(溶剂)、对照品溶液及供试品溶液各5μl，注入色谱仪，记录色谱图。

表4.样品进样针数设置

4.3.5.计算公式

按下式计算供试品的维生素C：

其中：A

m

V

p：对照品的含量；

A

V

4.3.6.标准规定

含维生素C(C

5.方法验证

5.1.专属性试验

5.1.1.干扰性试验

①溶液的配制：

溶剂：称取乙二胺四乙酸二钠0.56g与磷酸二氢钾2.0g，加入纯化水1000ml使溶解，用磷酸调节pH值至3.0。

空白溶剂：溶剂

空白辅料溶液：精密量取空白辅料溶液(取烟酰胺约500mg、D-甘露醇约200mg、乳酸约35mg，用水10ml溶解)2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

维生素C定位溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

②测定法：

精密量取上述空白、空白辅料溶液、对照品溶液与供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

③测定结果：

色谱图结果见图1～4，具体色谱图分析结果见表5。

表5.干扰性试验测定结果

④结论：

空白溶剂、空白辅料不干扰维生素C测定；供试品溶液色谱图中，维生素C峰与相邻峰分离度为3.4大于1.5，拖尾因子为1.1小于1.5，理论塔板数按维生素C峰计算为15993大于5000。

5.1.2.强制降解试验

①溶液的配制：

空白：溶剂

空白辅料溶液：精密量取空白辅料溶液(取烟酰胺约500mg、D-甘露醇约200mg、乳酸约35mg，用水10ml溶解)2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

(1)强氧化降解

精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中，加入0.03％双氧水0.5ml，混匀，放置10min,用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为强氧化降解供试品溶液；精密量取空白辅料溶液2.5ml，置10ml量瓶中，同法操作，作为强氧化降解空白辅料溶液。

(2)强碱降解

精密量取法莫替丁注射液2.5ml,置10ml量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液0.3ml，40℃水浴加热10分钟后，再加入0.1mol/L的盐酸溶液0.3ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为强碱降解供试品溶液；精密量取空白辅料溶液2.5ml，置10ml量瓶中，同法操作，作为强碱降解空白辅料溶液。

(3)高温降解

取法莫替丁注射液适量，于60℃干燥箱中放置4小时，精密量取2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为高温降解供试品溶液；取空白辅料溶液，同法操作，作为高温降解空白辅料溶液。

(4)强酸降解

精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，加入1mol/L盐酸溶液0.5ml，40℃水浴加热10分钟后，再加入1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为强酸降解供试品溶液；精密量取空白辅料溶液2.5ml，置10ml量瓶中，同法操作，作为强酸降解空白辅料溶液。

(5)强光照降解

取法莫替丁注射液适量，同时置紫外光灯(能量不低于200W·hr/m

(6)未降解试验

精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

②测定法：

精密量取上述溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

表6.样品进样针数设置

③测定结果：

强降解色谱图结果见图5～14，具体色谱图分析结果见表7。

表7.专属性测定结果

④结论：

各降解条件下供试品溶液的主峰纯度角度均小于纯度阈值，主峰与相邻杂质的分离度都大于1.5，符合方案要求。

5.2.系统精密度试验

①溶液的配制：

空白：溶剂

对照品溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

②测定法：

取空白与对照品溶液各5μl，注入色谱仪，记录色谱图。

表8.样品进样针数设置

③测定结果：

表9.系统精密度试验结果

④结论：

系统精密度实验中，连续6针维生素C保留时间RSD为0.23％，小于1.0％，峰面积RSD为0.61％，小于2.0％，仪器精密度符合要求。

5.3.溶液稳定性

①溶液的配制：

对照品溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

②测定法：

取对照品溶液5μl，于2℃～8℃条件下分别放置0h、2h、4h、8h、12h、24h注入液相色谱仪，记录色谱图；取供试品溶液5μl，于2℃～8℃条件下分别放置0h、2h、4h、8h注入液相色谱仪，记录色谱图；

③测定结果：

表10.溶液稳定性测定结果

④结论：

放置于2℃～8℃条件下，供试品溶液至少在8h内稳定，对照品溶液至少在24h内稳定。

5.4.线性

①溶液的配制：

对照品贮备溶液的配制：取维生素C对照品约50mg，精密称定，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。

50％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液0.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

80％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液0.8ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

90％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液0.9ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

100％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液1.0ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

110％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液1.1ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

120％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液1.2ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

200％线性溶液：精密量取对照品贮备溶液2.0ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。

②测定：

取上述线性溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

表11.样品进样针数设置

③测定结果：

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归处理，计算回归方程、相关系数、截距与相当于供试品浓度100％所对应的峰面积比值。

表12.维生素C测定线性测定结果

④结论：

维生素C浓度在124.85μg/ml～499.4μg/ml范围内时，线性方程为：y＝4720.9x+14229，相关系数为0.9996，大于0.999，截距为1.21％，小于2.0％，故峰面积与浓度呈良好线性关系。

5.5.准确度

确定供试品50％浓度水平、100％浓度水平及120％浓度水平时维生素C测定的结果与真值的接近程度，是否满足方法准确度要求。

①溶液的配制：

空白辅料溶液：取烟酰胺约5000mg、D-甘露醇约2000mg、乳酸约350mg，精密称定，用水100ml溶解，摇匀，作为空白辅料溶液。

对照品溶液的配制：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。平行配制2份。

对照品贮备溶液的配制：取维生素C对照品约50mg，精密称定，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。

供试品溶液的配制：精密量取法莫替丁注射液空白辅料2.5ml，平行9份，分别置10ml量瓶中，3份中加入对照品贮备溶液0.5ml，作为50％回收率供试品溶液，3份中加入对照品贮备溶液1.0ml，作为100％回收率供试品溶液，3份中加入对照品贮备溶液1.2ml，作为120％回收率供试品溶液，分别用溶剂稀释至刻度，摇匀。

②测定：

取上述溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

表13.样品进样针数设置

③测定结果：

按下面公式计算回收率：

m

式中：η：回收率，％；

m

m

f：校正因子；

V：供试品溶液稀释体积，ml；

A：供试品溶液主峰面积。

表14.准确度测定结果

④结论：

本法测定50％限度水平、100％限度水平和120％限度水平的回收率均在98％～102％之间，平均回收率为100.67％，RSD为0.76％，小于2.0％，结果符合规定。

5.6.精密度

5.6.1.重复性

①溶液的配制：

对照品溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制6份。

②测定：

精密量取供试品溶液与对照溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算维生素C含量。

表15.样品进样针数设置

③测定结果：

表16.重复性测定结果(规格2ml:20mg)

5.6.2.中间精密度

由不同人员，不同时间，使用不同仪器，按“重复性”同法测定。

①溶液的配制：

按“重复性”同法操作。

②测定：

精密量取供试品溶液与对照溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算维生素C含量。

表17.样品进样针数设置

③测定结果：

表18.不同人员不同时间不同仪器维生素C含量测定结果(规格2ml:20mg)

表19.维生素C含量测定中间精密度试验结果(规格2ml:20mg)

④结论：

平行测定6份供试品溶液中维生素C平均含量为95.94％，RSD为0.83％，小于2.0％，重复性良好。12份供试品溶液中维生素C平均含量为94.81％，RSD为1.40％，小于2.0％，故中间精密度良好。

5.7耐用性

为了考察测试条件发生微小变动时，对测定结果的影响，考察了以下几个典型变动因素：流速、pH值、流动相比例、柱温、检测波长、色谱柱，考察情况如下：

表20.耐用性试验考察指标

①溶液的配制：

对照品溶液：取维生素C对照品约12.5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。平行配制2份。

供试品溶液：精密量取法莫替丁注射液2.5ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。平行配制2份。

②测定：

精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱。

表21.样品进样针数设置

③测定结果：

表22.耐用性测定结果

④结论：

当各色谱条件发生微小变动时，维生素C的含量均在80.0％-110.0％范围内，与正常条件的偏差小于2.0％，故本方法耐用性良好。

综上，本发明通过特定的样品溶剂和色谱条件，可以检测法莫替丁注射液中维生素C，结果准确，快速、灵敏度高，为含维生素C的法莫替丁注射液的质量控制提供了新方法，也为法莫替丁注射液的质量控制标准的提高提供了方法依据，同时为扩大法莫替丁注射液的临床应用提供了参考依据，具有良好的应用前景。