基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用

摘要

本发明提供了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，在正畸压力侧或张力侧局部注射影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，可以提高生物钟核心基因Bmal1表达量，可以有效促进牙槽骨的代谢活动，提高正畸治疗的速度，进而提出了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，为牙齿正畸治疗提供了新的药物治疗方案。

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，具体涉及基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用。

背景技术：

口腔颌面畸形是一类严重影响口颌功能、美观、健康的疾病，与龋病和牙周病一起并称为口腔三大疾病，其患病率高达29.3％。目前，口腔颌面部畸形的主要治疗手段是通过正畸技术来实现畸形的矫治，平均治疗周期大约在2-3年。因此，加快调整正畸牙齿移动速度、缩短矫治时间具有重大的社会需求。

当前调控正畸牙齿移动速度的方案大致分为手术治疗和非手术治疗两大类。手术干预包括骨皮质切开术、减阻牵张成骨术、嵴上纤维环切术等术式，而非手术干预则包括激光治疗、振动治疗、药物治疗、超声治疗、电磁治疗等途径。其中，药物治疗旨在通过使用能促进骨代谢的物质来增强牙槽骨的代谢活动、影响正畸牙移动速率。

基因Bmal1作为重要的核心生物钟基因，不仅具有非常强大的促成骨功能，同时在正畸牙齿移动过程中也具有调控破骨的作用，是理想的调控正畸骨改建速率的潜在靶点。目前调控正畸牙移动速率的手段或多或少都存在一定的局限性，同时缺乏针对基因Bmal1所研发的影响正畸牙齿移动速率的药物及产品，因此，如何利用生物钟核心基因Bmal1来进一步调控正畸牙齿移动速率将是目前亟需解决的问题。

发明内容：

(一)解决的技术问题

针对上述背景，本发明通过研究发现通过在正畸压力侧或张力侧局部注射影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，可以提高生物钟核心基因Bmal1表达量，可以有效促进牙槽骨的代谢活动，提高正畸治疗的速度，进而提出了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，为牙齿正畸治疗提供了新的药物治疗方案。

(二)技术方案

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用。

进一步地，所述应用为制备影响生物钟基因Bmal1表达量的药物。

进一步地，所述基因Bmal1通过诱导THP-1细胞迁移与破骨向分化，来影响正畸牙齿移动速率。

进一步地，通过动物实验来对基因Bmal1影响正畸牙齿移动速率进行验证,包括以下步骤:

步骤1，构建大鼠正畸模型；

步骤2，在正畸压力侧或张力侧局部注射影响生物钟基因Bmal1表达量的药物；

步骤3，在正畸加力并局部注射药物一周后，利用Micro-CT方法或免疫组化手段观察效果。

所述影响生物钟基因Bmal1表达量的药物为U0126或GSK4112，所述U0126由Selleck公司生产，货号为S1102，化学式为C18H16N6S2·C2H6O；GSK4112由MedChemExpress生产，货号为HY-14414，化学式为C18H21ClN2O4S。

所述大鼠基因Bmal1的cDNA核苷酸序列为NCBI参考序列中标识符为NM_024362.2的序列，具体如序列表SEQ ID NO：1所示，氨基酸序列为NCBI参考序列中标识符为NP_077338.2的序列。

构建所述大鼠正畸模型的方法如下：

S1、采用戊巴比妥钠，以40mg/kg的剂量腹腔注射麻醉大鼠；

S2、以大鼠一侧的上颌作为对照侧，仅在上颌的第一磨牙和第二磨牙之间穿过直径为0.2mm的结扎丝并结扎于牙颈部，不施加正畸力，另一侧作为加力侧，在上颌的第一磨牙和第二磨牙之间穿过同样直径的结扎丝，在第一磨牙近中侧连接上一个镍钛螺旋弹簧，弹簧的另一头也同样连接上结扎丝；

S3、在正畸加力开始前，使用测力计来确定50g力值下弹簧的拉伸长度，并用高速涡轮在同侧的中切牙颈部磨出倒凹用以固定结扎丝；大鼠的左侧上颌作为对照侧。

S4、加力7天后，采用过量麻药处死大鼠，收集大鼠双侧上颌骨组织，置于4％的多聚甲醛中固定3天。

收集实验大鼠上颌骨，去除附着于骨组织上的软组织，4％多聚甲醛溶液固定72h后，更换为无水乙醇浸泡标本；使用Micro-CT进行分辨率为9μm的扫描，并利用InstaRecon/NRecon Research Workplace软件来重建断层扫描图像并进行量化。

本发明还提供了一种影响正畸牙齿移动速率的方法，所述方法通过在正畸压力侧或张力侧局部注射可以影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，通过上调基因Bmal1的表达水平，来影响正畸牙齿移动速率。

(三)有益效果

本发明产生的有益效果是：本发明提供了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，在正畸压力侧或张力侧局部注射影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，可以提高生物钟核心基因Bmal1表达量，可以有效促进牙槽骨的代谢活动，提高正畸治疗的速度，进而提出了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，为牙齿正畸治疗提供了新的药物治疗方案。

附图说明：

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1：正畸力诱导大鼠牙周膜组织BMAL1表达上调

图中为正畸施力7天后大鼠上颌骨第一磨牙的Mico-CT、H&E染色、TRAP染色和BMAL1免疫组化染色图像。右图为TRAP阳性细胞统计图(黑色箭头表示正畸牙移动方向，AB表示牙槽骨，R表示牙根，C表示压力侧，T表示张力侧)；

图2：过表达与敲低BMAL1牙周膜细胞的成功构建与实验方案

图A为牙周膜细胞转染过表达和敲低BMAL1慢病毒后的Western blot结果，表明过表达和敲低BMAL1的牙周膜细胞构建成功。图B为实验方案图，表示从经过不同处理的牙周膜细胞收集的上清液用于刺激THP-1细胞迁移或破骨细胞向分化；

图3：来自BMAL1过表达与敲低牙周膜细胞的上清液对THP-1细胞迁移和破骨分化的影响

图A为使用来自Vehicle、BMAL1-OE、Scramble及BMAL1-KD牙周膜细胞的上清液刺激后迁移的THP-1细胞结晶紫染色图像，图B为使用来自Vehicle、BMAL1-OE、Scramble及BMAL1-KD牙周膜细胞的上清液刺激后被诱导破骨分化的THP-1细胞的TRAP染色图像。

图4：体外细胞施加压力模型示意图；

图5：使用U0126处理后的牙周膜细胞的蛋白水平

图A为使用ERK磷酸化抑制剂U0126处理经过压力刺激24小时后的PDLCs中p-ERK、ERK、和BMAL1的Western blot结果，图B为使用ERK磷酸化抑制剂U0126处理经过压力刺激24小时后的牙周膜细胞的免疫荧光染色图像；

图6：大鼠上颌第一磨牙牙周局部注射示意图；

图7：U0126/GSK4112给药方案示意图；

图8：抑制ERK/AP1/BMAL1信号轴影响破骨细胞活性与正畸牙齿移动

其中图A为使用BMAL1抑制剂GSK4112处理后进行24小时压力刺激的牙周膜细胞中BMAL1的Western blot结果，图B和图C分别为正畸加力合并U0126或GSK4112局部注射7天后大鼠上颌第一磨牙BMAL1免疫组化染色图(B)和TRAP染色图(C)，图D为正畸加力合并U0126或GSK4112局部注射7天后大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像。

具体实施方式：

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例一、通过构建大鼠正畸模型，发现机械力刺激下牙周膜细胞中的Bmal1表达增加。

1.构建大鼠正畸牙齿移动模型

(1)将购入的6～8周大小的雄性SD在12小时光照/12小时黑暗的光照循环环境中饲养两周以适应环境；

(2)按照40mg/kg的剂量给大鼠腹腔注射戊巴比妥钠，麻醉大鼠；

(3)以大鼠一侧的上颌作为对照侧，仅在在上颌的第一磨牙和第二磨牙之间穿过直径为0.2mm的结扎丝并结扎于牙颈部，不施加正畸力；另一侧作为加力侧，在上颌的第一磨牙和第二磨牙之间穿过同样直径的结扎丝，在第一磨牙近中侧连接上一个镍钛螺旋弹簧，弹簧的另一头也同样连接上结扎丝；

(4)在正畸加力开始前，使用测力计来确定50g力大小下弹簧的拉伸长度，并用高速涡轮在同侧的中切牙颈部磨出倒凹用以固定结扎丝。大鼠的左侧上颌作为对照侧，操作方法基本同右侧，但是弹簧不加力、不拉伸。

(5)加力7天后，采用过量麻药处死大鼠，收集大鼠双侧上颌骨组织，置于4％的多聚甲醛中固定3天。

2.Micro-CT分析

收集大鼠上颌骨组织，去除多余的软组织后，将标本置于4％的多聚甲醛中固定3天后，将4％的多聚甲醛更换为无水乙醇。使用小动物活体Micro-CT成像仪器以9μm的分辨率扫描样品，并用InstaRecon/NRecon Research Workplace软件来重建断层扫描图像。

3.制作大鼠上颌骨组织石蜡切片

(1)完成Micro-CT扫描后，将无水乙醇更换为脱钙液，脱钙持续30d；

(2)使用70％-100％的乙醇依次梯度脱水；

(3)无水乙醇与二甲苯1：1混合的液体浸泡标本10min，再用新的二甲苯浸泡标本30min；

(4)将标本从二甲苯中取出，浸泡在56℃的液体石蜡内进行包埋，确定好标本包埋方向后连同包埋专用盒一起取出，待石蜡冷却凝固形成蜡块；

(5)将石蜡切片机的工作厚度调整为5μm后进行连续切片，将切片的正面置于43℃左右的水浴锅中展片后，用防脱载玻片捞起，使切片尽量平整的贴合在防脱载玻片上。在37℃恒温箱中烘烤切片过夜，收集切片常温保存。

4.切片TRAP染色

(1)使用TRAP固定液在4℃下固定30s～3min；

(2)自来水冲洗切片，稍微晾干；

(3)配制好TRAP孵育液；

(4)切片入TRAP孵育液，置于37℃温箱，浸染45～60min，水洗；

(5)复染：苏木素染色液染色5～8min或甲基绿染色液染色2～3min；

(6)水洗、晾干、封片。

5.切片Bmal1免疫组化染色

(1)烤片、脱蜡、水化；

(2)每一玻片上每个组织滴3％H2O240μL，室温静置10min，PBS洗10min×3次；

(3)抗原修复：采取热修复方法，高压锅中倒入0.01M枸橼酸钠缓冲溶液1L，保证缓冲液可以浸没固定在玻片架上的所有切片，盖好锅盖升温升压到液体沸腾。1min后凉水冲洗高压锅来降温，10min后拿出玻片，PBS冲洗3次，每次10min；

(4)在每一组织上滴加40μL山羊血清，室温下封闭1h，甩干；

(5)在组织上滴加Bmal1一抗工作液40μL，置于湿盒，4℃过夜；

(6)次日，将湿盒放置于37℃复温45min，取出玻片，PBS洗10min×3次；

(7)根据一抗种属选择相应二抗，稀释为二抗工作液，在玻片组织上滴加40μL，置湿盒中，室温静置孵育1h，PBS冲洗3次，每次10min；

(8)DAB显色，边染色边在光镜下调控染色程度，染色约10min，流水冲洗切片10min；

(9)苏木素复染2min，盐酸酒精浸泡10s，流水冲洗切片10min；

(10)脱水、透明：将切片固定在玻片架上，依次浸泡在70％乙醇、80％乙醇中各2min，95％乙醇、无水乙醇各5min，二甲苯浸泡两次每次10min；中性树脂封片，显微镜下检测。如图1所示，Micro-CT结果显示大鼠正畸模型构建成功；H&E染色、TRAP染色及BMAL1免疫组化染色结果显示正畸力刺激下大鼠牙周膜组织中的Bmal1表达增加，与TRAP阳性细胞分布一致。

实施例二、通过构建过表达和敲低Bmal1的牙周膜细胞并收集其上清液用于刺激单核细胞的迁移和破骨分化，发现来源于Bmal1高表达的牙周膜细胞的上清液可促进单核细胞的迁移与破骨向分化。

1.原代PDLCs的分离与培养

(1)收集：将刚拔除的前磨牙浸泡于含有200U/mL青霉素-链霉素双抗的无菌无血清α-MEM培养液中；

(2)漂洗：在超净工作台内，取出收集到的前磨牙置于无菌安瓿瓶中，用含有200U/mL青霉素-链霉素双抗的无菌PBS缓冲液漂洗3～5次；

(3)刮取：漂洗完成后，将前磨牙平放于直径为6cm的培养皿中，牙根表面用少量无菌无血清α-MEM培养液湿润，左手用眼科弯镊固定前磨牙，右手持刀片刮取牙根中1/3部分的牙周组织；

(4)消化：将刮取下来的PDL组织收集于1.5mL的EP管中，加入1mL浓度为3mg/mL的I型胶原酶与浓度为3mg/mL的中性酶的1：1混合液，用无菌眼科镊充分剪碎组织后，将EP管置于37℃的水浴锅中消化1.5小时(每半小时轻轻摇晃EP管使PDL组织充分接触消化液)；

(5)离心：以1000rpm的转速将充分消化的牙周膜组织进行离心，时间5分钟；

(6)终止消化：离心完成后，在超净工作台内打开EP管，去除消化液后，加入含有20％FBS和100U/mL青霉素-链霉素双抗的α-MEM培养基1mL，与PDL组织充分混匀后，移入直径为3cm的培养皿或T12.5培养瓶中，将培养皿或培养瓶放入含有5％二氧化碳、潮湿环境的37℃恒温培养箱中培养，每三天更换一次培养基。

2.慢病毒转染：

(1)选择生长状态良好的P2代PDLCs，在T25瓶中大约长至90％左右的密度时用胰酶消化，细胞计数后种至6孔板内，使每孔细胞数大约在2×105左右，将每孔中的液体用完全培养基补齐至2mL后，将6孔板放入37℃恒温培养箱中；

(2)待在显微镜下观察到每孔细胞增殖到密度大约在30％～40％左右时，在超净工作台内打开6孔板，使用PBS缓冲液润洗细胞2遍后，每孔中加入1mL完全培养基，并根据MOI＝20、所需转染细胞量与病毒浓度计算出加入的病毒原液体积，与可提高逆转录病毒感染细胞效率的polybrene在无血清培养基中充分混匀后，加入到6孔板各孔中并轻轻晃动，放入37℃恒温培养箱中；

(3)转染慢病毒18小时后，在超净工作台中给细胞换液，每孔中加入2mL完全培养基；

(4)根据公司提供的慢病毒载体信息，选择相符合的抗生素筛选转染病毒后的细胞，每天观察细胞状态、更换培养基，根据观察到的细胞融合度可在转染病毒的3～7天后消化细胞并将其转移到T25培养瓶中，继续抗生素筛选培养，在细胞密度达到90％左右后，可取部分细胞提取RNA或蛋白质用以检测Bmal1的表达水平，以评估慢病毒转染效果；

(5)对转染筛选后的细胞进行传代、冻存，以备后续实验。

3.诱导THP-1细胞迁移实验

(1)收集经过处理的牙周膜细胞的上清液，在-20℃或-80℃的低温冰箱中保存待用，使用前提前放入4℃冰箱中解冻；

(2)将预先收集好的牙周膜细胞上清液添加到Transwell小室的下室；

(3)将THP-1细胞按照每孔1×105细胞的密度添加到Transwell小室的上室中，同时加入PMA，使其终浓度为100ng/L(对于需要阻断CCL2功能的实验，THP-1细胞在加入Transwell小室的上室之前，需要先用50nmol/L的CCR2拮抗剂预处理30分钟，再添加到Transwell小室的上室中)；

(4)将细胞放入37℃恒温培养箱中培养24小时；

(5)24小时之后从培养箱中取出细胞，用移液枪吸净Transwell上室与下室中的培养液后，PBS缓冲液润洗2遍；

(6)用4％的多聚甲醛溶液固定细胞10～30分钟，固定完成后用移液枪吸净多聚甲醛溶液，PBS缓冲液润洗2遍；

(7)结晶紫染料染色30分钟；

(8)利用棉签将Transwell上室中未穿膜的细胞小心擦除后，用PBS润洗3遍；

(9)将Transwell小室取出，放到载玻片上，使用倒置显微镜拍摄照片。Transwell小室底部表面被结晶紫染色的细胞被认为是迁移的细胞。

如图2所示，其中图A为牙周膜细胞转染过表达和敲低BMAL1慢病毒后的Westernblot结果，表明过表达和敲低BMAL1的牙周膜细胞构建成功。图B为实验方案图，表示从经过不同处理的牙周膜细胞收集的上清液用于刺激THP-1细胞迁移或破骨细胞向分化。

4.诱导THP-1细胞破骨分化实验

(1)将THP-1细胞以每孔1×105细胞的密度接种在24孔板中，并添加PMA使其终浓度为100ng/L，放入37℃恒温培养箱中培养48小时；

(2)48小时之后从培养箱中取出细胞，将液体更换为预先收集好的经过处理的牙周膜细胞上清液，并添加M-CSF和RANKL使其终浓度均为20ng/mL。此后每2天更换一次上清液并重新添加M-CSF和RANKL，诱导破骨分化时间共计12天；

破骨分化诱导12天后，从37℃恒温培养箱取出细胞，进行TRAP染色。如图3所示，其中A为使用来自Vehicle、BMAL1-OE、Scramble及BMAL1-KD牙周膜细胞的上清液刺激后迁移的THP-1细胞结晶紫染色图像，我们观察到相较于Vehicle对照组，来自BMAL1过表达PDLCs的上清液可以刺激更多的THP-1细胞从transwell小室的上室中穿到下室；而来自BMAL1敲低PDLCs的上清液相较于Scramble对照组，其刺激的穿过transwell小室膜的THP-1细胞更少。B为使用来自Vehicle、BMAL1-OE、Scramble及BMAL1-KD牙周膜细胞的上清液刺激后被诱导破骨分化的THP-1细胞的TRAP染色图像，与THP-1细胞迁移中观察到的趋势类似，由BMAL1-OE牙周膜细胞上清液诱导的THP-1细胞显示出比Vehicle对照组诱导的细胞更强的破骨分化能力；而经由BMAL1-KD牙周膜细胞上清液诱导的破骨细胞数目，与其Scramble对照组诱导的破骨细胞数目相比，不具有统计学差异。

实施例三、通过构建体外牙周膜细胞受压模型，使用ERK抑制剂U0126，发现其可抑制机械力诱导的Bmal1表达上调。

1.体外细胞受压实验

(1)实验开始前，根据实验需要的施加的压力大小(如1g/cm2或2g/cm2)，计算并向安瓿瓶中加入一定质量的金属珠后，将金属珠连同安瓿瓶一起进行高温高压灭菌处理；

(2)在超净工作台内，将牙周膜细胞以1×106每孔的密度接种于6孔板中，放入37℃恒温培养箱中培养，当在显微镜下观察到细胞的融合度达到70％～80％左右时可进行实验；

(3)在超净工作台内，先用眼科镊夹取大小为24mm×24mm的无菌盖玻片放在细胞层上，随后将消毒灭菌好的装有金属珠的安瓿瓶置于盖玻片上方，将细胞放回37℃培养箱中培养24小时，根据实验需要收集细胞的RNA、蛋白质或上清液等，以备后续实验。如图4所示，为体外细胞受压实验操作示意图

2.细胞IF染色

(1)将直径为25mm的爬片置于6孔板中，以30％的密度将细胞种在爬片上；

(2)第二天，在细胞贴壁后，去除细胞上清，使用PBS缓冲液润洗细胞2遍后，用4％多聚甲醛溶液固定细胞，时间大约在15～30分钟左右；

(3)在固定细胞的同时，可配制好0.5％Triton X-100溶液，在细胞固定完成后去除4％多聚甲醛溶液，用PBS缓冲液润洗细胞3遍后，使用0.5％Triton X-100溶液通透细胞膜(如需要染色的目的蛋白在细胞膜上则此步骤可省略)，时间大约为10～20分钟；

(4)可在通透细胞的同时配制好5％BSA溶液，在通透细胞完成后，去除0.5％Triton X-100溶液，用PBS缓冲液润洗细胞3遍后，加入5％BSA溶液封闭细胞，时间大约为1小时；

(5)封闭的同时，可根据抗体说明书以及实验需求，用一抗稀释液配制相应浓度的一抗工作液；

(6)封闭结束后，将配制好的一抗工作液滴在事先用封口膜铺好的6孔板盖子上，将废旧的1mL注射器针头前部稍微弯曲后，将浸泡在5％BSA溶液中的细胞爬片挑起，滤纸轻轻吸干爬片上的液体后，将种有细胞的一面盖在一抗工作液滴上，使细胞和抗体充分接触(注意排空气泡)；

(7)将爬片放入湿盒中，在4℃冰箱中孵育过夜；

(8)将湿盒从4℃冰箱中取出，在室温下复温45分钟，同时，选择可结合相应相应一抗的荧光二抗，在避光环境下配制好荧光二抗工作液(浓度根据抗体说明书及实验需求来确定)；

(9)复温完成后，将爬片浸泡在PBST溶液中，每次5分钟，重复浸泡三次；

(10)在避光环境中，将二抗工作液滴加在用封口膜铺好的6孔板盖子上，用注射器针头将爬片从PBST溶液中挑起、滤纸吸干爬片上的液体后，将种有细胞的一面盖在二抗工作液滴上使细胞和抗体充分接触(注意排空气泡)，室温环境下避光孵育1小时；

(11)二抗孵育完成后，在避光环境下，将爬片浸泡在PBST溶液中，每次5分钟，重复浸泡三次；

(12)在避光环境下，将DAPI染液滴加在用封口膜铺好的6孔板盖子上，用注射器针头将爬片从PBST溶液中挑起、滤纸吸干爬片上的液体后，将种有细胞的一面盖在DAPI液滴上使细胞和染液充分接触(注意排空气泡)，根据情况孵育10～30分钟，孵育完成后将爬片浸泡在PBST溶液中，每次5分钟，重复浸泡三次；

(13)在载玻片上滴加抗荧光淬灭剂，用注射器针头将爬片从PBST溶液中挑起、滤纸吸干爬片上的液体后，将种有细胞的一面盖在抗荧光淬灭剂上(注意排空气泡)，再用透明色的指甲油封片。实验结果如图5所示，其图中A为使用ERK磷酸化抑制剂U0126处理经过压力刺激24小时后的PDLCs中p-ERK、ERK、和BMAL1的Western blot结果，图B为使用ERK磷酸化抑制剂U0126处理经过压力刺激24小时后的牙周膜细胞的免疫荧光染色图像，结果显示抑制ERK磷酸化可以恢复机械力引起的BMAL1表达上调，表明ERK信号是压力诱导牙周膜细胞中BMAL1上调的主要信号传导途径。

实施例四、在正畸压力侧或张力侧局部注射可以影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，如U0126或GSK4112，方法如图7所示。

本发明中提到的可以影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，U0126由Selleck公司生产，货号为S1102，化学式为C18H16N6S2.C2H6O；GSK4112由MedChemExpress生产，货号为HY-14414，化学式为C18H21ClN2O4S。

结果如图8所示，其中图A为使用BMAL1抑制剂GSK4112处理后进行24小时压力刺激的牙周膜细胞中BMAL1的Western blot结果，图B和图C分别为正畸加力合并U0126或GSK4112局部注射7天后大鼠上颌第一磨牙BMAL1免疫组化染色图(B)和TRAP染色图(C)，D为正畸加力合并U0126或GSK4112局部注射7天后大鼠上颌第一磨牙Micro-CT图像。通过实验可知，局部注射可以影响Bmal1表达的药物，可以调控正畸牙槽骨改建与牙齿移动速率。

综上所述，本发明通过研究发现通过在正畸压力侧或张力侧局部注射影响生物钟基因Bmal1表达量的药物，可以提高生物钟核心基因Bmal1表达量，可以有效促进牙槽骨的代谢活动，提高正畸治疗的速度，进而提出了基因Bmal1在制备影响正畸牙齿移动速率的产品中的应用，为牙齿正畸治疗提供了新的药物治疗方案。

最后需要说明的是，以上实施例仅用于说明本发明而非限制本发明的保护范围。另外，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改或变型，所有的这些等价形式同样属于本申请所要求限定的保护范围之内。