一种基于RPA-CRISPR-Cas12a体系可视化检测柑橘黄龙病的试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR‑Cas12a体系可视化检测柑橘黄龙病的试剂盒及方法。所述试剂盒包含RPA引物和crRNA引导序列；通过先对待测样品进行RPA扩增，再在crRNA序列介导下，引导CRISPR‑Cas12a体系对RPA扩增产物进行识别结合并切割目标双链DNA激活非特异性核酸酶功能，然后任意切割体系中的ssDNA荧光探针得到裂解产物，最后通过裂解产物的显色检测进行判断。本发明通过RPA扩增及crRNA识别可双重特异地对检测柑橘黄龙病进行检测，特异性强，且在灵敏度上可低至2拷贝/μL，可以更早发现感染柑橘黄龙病的植株，对柑橘黄龙病进行防治。