一种获取高产高稳定性异源β-葡萄糖苷酶的方法

摘要

本发明公开了一种获取高产高稳定性异源β‑葡萄糖苷酶的方法，步骤是制备vib1敲除表达盒，将该表达盒转化进入里氏木霉QM53的原生体中构建蛋白背景降低的里氏木霉底盘菌株Δvib1，制备黑曲霉来源β‑葡萄糖苷酶(BGLA)过表达盒并转化底盘菌株Δvib1构建表达异源β‑葡萄糖苷酶的工程菌株QVB‑1，优化培养条件发酵菌株QVB‑1生产β‑葡萄糖苷酶。实验证实利用本发明方法生产的异源β‑葡萄糖苷酶活性为65.4IU/mg，显著高于出发菌株QM53(1.1IU/mg)，并且胞外背景更加纯净，蛋白纯度高。同时本发明的方法能保持异源β‑葡萄糖苷酶稳定性，菌株QVB‑1的发酵上清液孵育4周后，其分泌的β‑葡萄糖苷酶活力保持稳定不变，而对照组β‑葡萄糖苷酶活力下降程度超过放置前的60％。本发明应用前景良好。