一种氟比洛芬酯药品中杂质的检测方法

摘要

本发明属于医药技术领域，涉及一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法，采用高效液相色谱仪对样品进行检测，色谱柱采用五氟苯基为填充剂，以有机溶剂与水或缓冲盐混合溶液为流动相。本发明有效分离了氟比洛芬酯两对对映异构体以及其杂质脱氟体两对对映异构体，且分析时间短，准确率高，使氟比洛芬酯药品的质量更加可控，进一步提高了患者的用药安全。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氟比洛芬酯药品中杂质的检测方法。

背景技术

氟比洛芬酯是一种新型的非甾体类抗炎镇痛药，主要用于术后以及癌症镇痛，其作用原理是利用自身结构的亲脂性与靶向作用，快速跨越细胞，进入人体后能够定向的聚集在手术切口部位，并利用羧酸酯酶进行水解，生成氟比洛芬，该水解产物通过抑制外周神经以及脊髓中的环氧化酶(COX)来抑制前列腺素合成，从而发挥镇痛作用，其优势在于并不会对麻醉状态下的患者正常意识产生影响。

氟比洛芬酯的化学名称为：化学名：(±)-2-（2-氟-4-联苯基）丙酸-1-乙酰氧基乙酯，分子式为 C

氟比洛芬酯脱氟体是经由氟比洛芬酯脱氟获得，该杂质是氟比洛芬酯在制备过程中常见杂质，其化学名称为：乙酰氧基乙基2-（4-联苯基）丙酸酯，结构式如下：

JX20160223药品注册标准中公布了一种可以检测氟比洛芬酯及其主要杂质脱氟体的方法，但是该方法存在的主要问题在于分析方法时间长，且流动相配制复杂，不利于配合工艺跟踪以及快速准确检测。由于其非对映异构体在体内药理作用的不同，为保证产品疗效，对其质量的控制也显得尤为重要。但氟比洛芬酯脱氟体的结构与氟比洛芬酯十分相似，故其分析方法的色谱分离十分困难。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明提供了一种高效检测氟比洛芬酯及其脱氟体杂质的检测方法，目的是提高检测效率，降低能耗，保证产品质量，从而达到使分析方法更加快捷高效，降低分析成本，取得更佳分离效果的目的。

本发明提供了一种氟比洛芬酯药品中杂质的检测方法。本发明所述的方法包括对其中相关物质的检测，其中相关物质包括氟比洛芬酯以及氟比洛芬酯脱氟体杂质，所述的氟比洛芬酯包括氟比洛芬酯1和氟比洛芬酯2，所述的氟比洛芬酯脱氟体杂质包括氟比洛芬酯脱氟体杂质1和氟比洛芬酯脱氟体杂质2。

本发明提供了一种氟比洛芬酯药品中杂质的检测方法，其中的杂质为氟比洛芬酯脱氟体杂质1和氟比洛芬酯脱氟体杂质2，色谱峰之间的分离度不小于1.5。

进一步的本发明所述的检测方法包括对氟比洛芬酯1、氟比洛芬酯2、氟比洛芬酯脱氟体杂质1和氟比洛芬酯脱氟体杂质2四种物质的检测，其中色谱图中依次洗脱出四个色谱峰，四个色谱峰的分离度不小于1.5。

本发明所述的检测方法采用高效液相色谱检测方法，其进一步检测条件为：供试品的溶液浓度为0.01～2mg/ml；色谱柱采用五氟苯基为填充剂，分析色谱柱柱长为150-250mm，柱温为20～35℃；采用A-B相梯度洗脱模式，流动相流速为0.5-2.0ml/min，其中A相是水或与酸类的混合溶液，B相是有机溶剂。

本发明所述的检测方法，其中流动相中的有机溶剂选自甲醇或乙腈。

本发明所述的检测方法，其中流动相选自水-乙腈、水-甲醇、缓冲盐-甲醇或者缓冲盐-乙腈，在某些实施例中流动相为水-乙腈

本发明所述的检测方法进一步包括如下步骤：

1.（1）分别取供试品和对照品，置于量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01～2mg/ml的供试品溶液和对照品溶液；

2.（2）取供试品溶液和对照品溶液5～20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

其中所述的稀释剂是有机溶剂，选自甲醇、乙腈、乙醇中的任意一种，优选乙腈。

本发明所述的氟比洛芬药品是氟比洛芬酯原料或者氟比洛芬酯药用制剂，例如氟比洛芬酯注射液，氟比洛芬酯药品供试液的浓度进一步为0.1 -1.5m g/ml。

所述的供试品溶液为氟比洛芬酯原料药的供试品溶液，其制备方法为，取氟比洛芬酯原料药样品用稀释剂溶解并稀释，制成每1m 1含氟比洛芬酯0.1 -1.5m g的供试品溶液。

本发明所述氟比洛芬酯药品杂质的检测方法，包含如下步骤：

（1）分别取供试品和对照品，置于量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.01～2mg/ml的供试品溶液和对照品溶液；

（2）取供试品溶液和对照品溶液5～20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；

其中色谱条件是色谱柱采用五氟苯基为填充剂，检测波长为254nm，分析色谱柱柱长150-250mm，柱温为20～35℃；流动相为水-乙腈，流速为1.0-1.2ml/min。

进一步色谱条件是色谱柱采用五氟苯基为填充剂，检测波长为254nm，分析色谱柱柱长为150mm，柱温为30℃；流动相为水-乙腈，流速为1.2ml/min。

进一步的本发明所述的对照品溶液的配置方法是量取一定量的氟比洛芬酯脱氟杂质对照品，置于容器中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；再称取氟比洛芬酯对照品，置于容器中，量取上述配置好的杂质储备溶液置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液，即杂质品溶液。

进一步的本发明所述的供试品溶液的配置方法是量取氟比洛芬酯供试品，置于容器中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

进一步的本发明所述的检测方法，还包括梯度洗脱程序，洗脱条件如下：

本发明所述的检测方法，其色谱条件进一步包括分析色谱柱的柱内径为3.0-4.6mmφ，优选柱内径为4.6mmφ。

本发明采用反向高效液相色谱法获得了一种能够有效分离氟比洛芬酯两对对映异构体以及其杂质脱氟体两对对映异构体的检测方法。检测出的色谱峰之间分离度不小于1.5，且分析时间得到了有效缩短，分析检测时间小于100min，进一步其分析时间为30-90min，优选分析时间为40-70min。

附图说明

图1 对比例1对照品检测图谱；

图2 实施例1对照品检测图谱；

图3 实施例2对照品检测图谱；

图4 实施例3对照品检测图谱；

图5 实施例4对照品检测图谱；

图6 实施例5对照品检测谱图；

图7 实施例5供试品检测图谱。

具体实施方式

一、实验材料：

1、仪器设备：

2、试剂材料

对比例1

色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶（如CERI L-column2 ODS 150mm*3mm,3μm,或效能相当的色谱柱）为填充剂，取甲醇-水 (5:95) 溶液2000ml再加入3ml醋酸作为流动相 A ，再取甲醇-水(95:5) 溶液2000ml再加入3ml醋酸作为流动相 B ，按下表进行线性梯度洗脱；流速为0.5ml/min; 柱温50℃；检测波长为254nm；

氟比洛芬酯对照品与氟比洛芬酯脱氟体对照品的HPLC测定结果呈现于图1色谱图，由图可知，第一色谱峰的保留时间约94.498min，第二色谱峰的保留时间约96.399min，第三色谱峰的保留时间约98.338min，第四色谱峰的保留时间约100.004min。各峰保留时间长，且基线未完全分离。

实施例1

色谱条件洗脱程序：

按下表进行线性梯度洗脱；

（1）配液：

精密量取氟比洛芬酯脱氟杂质对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；

精密称取氟比洛芬酯对照品20mg，置20ml量瓶中，再精密量取杂质储备溶液0.1ml置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

(2)色谱条件与系统适用性试验：

用五氟苯基色谱柱；4.6mm*150mm，5μm；

流动相A：水；流动相B：乙腈；

流速1.2ml/min；

柱温30℃；

检测波长254nm。

精密量取系统适用性试验溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图中出峰顺序依次是氟比洛芬酯脱氟体杂质1、氟比洛芬酯脱氟体杂质2、氟比洛芬酯1、氟比洛芬酯2，各峰之间的分离度应大于1.5；各色谱峰的理论塔板数应不小于5000；

(3)结果：氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图2色谱图，由图可见，第一色谱峰的保留时间约42.619min，第二色谱峰的保留时间约44.893min，第三色谱峰的保留时间约47.157min，第四色谱峰的保留时间约49.640min。另外，经计算，各峰之间最小分离度为1.592。

(4)实验讨论：该方法流动相体系简单易操作，色谱柱粒径、直径均属于常规色谱分析规格，易于清洗和维护，且成本低廉。

实施例2

（1）配液：

精密量取氟比洛芬酯脱氟杂质对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；

精密称取氟比洛芬酯对照品20mg，置20ml量瓶中，再精密量取杂质储备溶液0.1ml置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

（2）色谱条件与系统适用性试验：

梯度洗脱程序不变，与实施例1相同。

用五氟苯基色谱柱；4.6mm*150mm，5μm；

流动相A：水；流动相B：乙腈；

流速1.0ml/min；

柱温30℃；

检测波长254nm。

精密量取系统适用性试验溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图中出峰顺序依次是氟比洛芬酯脱氟体杂质1、氟比洛芬酯脱氟体杂质2、氟比洛芬酯1、氟比洛芬酯2，各峰之间的分离度应大于1.5；各色谱峰的理论塔板数应不小于5000；

(3)结果：氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图3色谱图，由图可见，第一色谱峰的保留时间约50.461min，第二色谱峰的保留时间约53.278min，第三色谱峰的保留时间约56.046min，第四色谱峰的保留时间约59.199min。另外，经计算，各峰之间最小分离度为1.507。

实施例3

（1）配液：

精密量取氟比洛芬酯脱氟杂质对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；

精密称取氟比洛芬酯对照品20mg，置20ml量瓶中，再精密量取杂质储备溶液0.1ml置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

(2)色谱条件与系统适用性试验：

梯度洗脱程序不变，与实施例1相同。

用五氟苯基色谱柱；4.6mm*150mm，5μm；

流动相A：水；流动相B：乙腈；

流速1.0ml/min；

柱温35℃；

检测波长254nm。

精密量取系统适用性试验溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图中出峰顺序依次是氟比洛芬酯脱氟体杂质1、氟比洛芬酯脱氟体杂质2、氟比洛芬酯1、氟比洛芬酯2。各峰之间的分离度应大于1.5；各色谱峰的理论塔板数应不小于5000；

(3)结果：氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图4色谱图，由图可见，第一色谱峰的保留时间约41.244min，第二色谱峰的保留时间约43.323min，第三色谱峰的保留时间约45.526min，第四色谱峰的保留时间约47.797min。另外，经计算，各峰之间最小分离度为1.563。

实施例4

（1）配液：

精密量取氟比洛芬酯脱氟杂质对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；

精密称取氟比洛芬酯对照品20mg，置20ml量瓶中，再精密量取杂质储备溶液0.1ml置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

(2)色谱条件与系统适用性试验：

用五氟苯基色谱柱；4.6mm*150mm，5μm；

流动相A：水；流动相B：乙腈；

流速1.0ml/min；

柱温25℃；

检测波长254nm。

精密量取系统适用性试验溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱图中出峰顺序依次是氟比洛芬酯脱氟体杂质1、氟比洛芬酯脱氟体杂质2、氟比洛芬酯1、氟比洛芬酯2。各峰之间的分离度应大于1.5；各色谱峰的理论塔板数应不小于5000；

(3)结果：氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图5色谱图，由图可见，第一色谱峰的保留时间约45.782min，第二色谱峰的保留时间约48.290min，第三色谱峰的保留时间约50.646min，第四色谱峰的保留时间约53.383min。另外，经计算，各峰之间最小分离度为1.592。

实施例5

（1）配液：

精密量取氟比洛芬酯脱氟杂质对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质储备溶液；

精密称取氟比洛芬酯对照品20mg，置20ml量瓶中，再精密量取杂质储备溶液0.1ml置于此瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

精密量取氟比洛芬酯供试品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

（2）色谱条件与系统适用性试验：

梯度洗脱程序不变，与实施例1相同。

用五氟苯基色谱柱；4.6mm*150mm，5μm；

流动相A：水；流动相B：乙腈；

流速1.0ml/min；

柱温30℃；

检测波长254nm。

精密量取系统适用性试验溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图

精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

(3)结果：对照品氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图6色谱图，供试品氟比洛芬酯与氟比洛芬酯脱氟体的HPLC测定结果呈现于图7色谱图，由图可见，色谱图中检出氟比洛芬酯脱氟体峰1含量为0.143%、氟比洛芬酯脱氟体峰2含量为0.080%，其总和为0.223%。各杂质间最小分离度为1.610，理论板数均大于5000。