KRT10定点基因敲入P2A-CrePR1-T2A-tdTomato小鼠模型的构建及应用

摘要

本发明公开了KRT10定点基因敲入P2A‑CrePR1‑T2A‑tdTomato小鼠模型的构建及应用。所述构建方法包括制备sgRNA，构建Cas9/sgRNA质粒；构建KRT10定点基因敲入P2A‑CrePR1‑T2A‑tdTomato的重组打靶载体；将所述Cas9/sgRNA质粒和所述重组打靶载体注射到供体小鼠的受精卵中，得到转染受精卵；将所述转染受精卵移植到假孕母鼠的子宫中，诞下F0代小鼠，对所述F0代小鼠进行基因型鉴定，同源重组呈现阳性的小鼠即为嵌合体小鼠；将所述嵌合体小鼠与野生型的小鼠杂交，后代经基因型鉴定，同源重组呈现阳性的小鼠即为F1代小鼠；将所述F1代小鼠进行杂交，鉴定正确重组且没有随机插入的后代小鼠即为小鼠模型。