一种花椒病害防治复合菌及其制备方法

摘要

本发明提供一种花椒病害防治复合菌，所述复合菌按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙改性表面活性剂1.8‑2.2份、稳定剂0.8‑1.2份、聚乙二醇0.8‑1.2份、酒石酸缓冲液4.5‑5.5份、水38‑42份、解淀粉芽胞杆菌干粉5.5‑6.5份、地衣芽胞杆菌干粉3.5‑4.5份。本发明还提供一种花椒病害防治复合菌的制备方法，所述制备方法包括制备木质素磺酸钙改性表面活性剂、制备稳定剂、制备复合菌。使用本发明的复合菌，花椒流胶病发病率为2.38‑2.41%，花椒锈病发病率3.21‑3.33%，花椒煤烟病发病率2.85‑2.98%。

说明书

技术领域

本发明涉及一种花椒病害防治复合菌及其制备方法，属于农作物防病治病技术领域。

背景技术

花椒(学名：Zanthoxylumbungeanum Maxim.)是芸香科、花椒属落叶小乔木，高可达7米，其果皮可作为调味料，并可提取芳香油，又可入药，种子可食用，也可加工制作肥皂。花椒用作中药，有温中行气、逐寒、止痛、杀虫等功效，治胃腹冷痛、呕吐、泄泻、血吸虫、蛔虫等症，又可做表皮麻醉剂。

当前，花椒的亩产量达到每亩1000斤左右，可满足人们对花椒的需求。但是，花椒的各种病害例如叶斑病、流胶病等严重制约了花椒产业的发展，使得花椒的产量有较大程度的降低。

花椒病害通常需要通过化学药物进行防治，但是长期使用化学农药会导致病原菌产生抗药性而降低化学药剂的防病效果，同时长期使用化学药剂会造成农药残留超标和环境污染。生物防治是控制植物病害的一种新途径，它主要是利用生防菌与植物病原微生物之间的拮抗作用，抑制植物病原菌的生长。

CN108893424A公开了一种巨大芽孢杆菌BM22及其微胶囊制剂和应用，可预防和治疗花椒树流胶病，高倍数稀释后对流胶病的防治效果下降，导致产量下降，此发明为单一菌种，功能仅限于防治流胶病。

因此可以用复合菌之间的协同作用来防治多种病害，减少用药的次数，但是现有技术的液体复合菌中，有效微生物的数量都较少，而且随时间的增加，有效微生物的数量会逐渐降低，保质期短。

CN109321464A公开了一种环保用复合微生物液体菌剂及其保藏方法，通过添加保护剂，延长液体复合菌的保藏时间，可以使保存时间延长，但是延长时间有限，六个月后有效微生物存活数量下降大，有效微生物存活率仅为50-60%。

综上所述，现有技术存在以下问题：

（1）现有的复合菌，有效微生物的数量少；

（2）现有的复合菌，随着时间增加，有效微生物数量逐渐降低，有效微生物存活率低，保质期短。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，通过添加改性表面活性剂和稳定剂制成复合菌，实现以下发明目的：

（1）制备的复合菌，有效微生物的数量多；

（2）制备的复合菌，随着时间增加，有效微生物数量降低速度慢，有效微生物存活率高，保质期长。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种花椒病害防治复合菌，其特征在于，所述复合菌按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙改性表面活性剂1.8-2.2份、稳定剂0.8-1.2份、聚乙二醇0.8-1.2份、酒石酸缓冲液4.5-5.5份、水38-42份、解淀粉芽胞杆菌干粉4-6份、地衣芽胞杆菌干粉2.5-3.5份。

所述酒石酸缓冲液浓度为0.4-0.6mol/L；

所述解淀粉芽胞杆菌干粉，将解淀粉芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为5.1-5.3*10

所述地衣芽胞杆菌干粉，将地衣芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为4.4-4.7*10

所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌种保藏编号为CICC23569，由市场购买所得；

所述地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis），菌种保藏号为CICC 21228，由市场购买所得。

以下是对上述技术方案的进一步改进：

所述制备方法包括制备木质素磺酸钙改性表面活性剂、制备稳定剂、制备复合菌。

所述制备木质素磺酸钙改性表面活性剂包括溶解、反应；

所述溶解，将木质素磺酸钙溶解于乙二醇和水的混合液中，混合均匀后用质量分数10%的氢氧化钠溶液调节pH至9.4-9.6，在800-1000r/min下搅拌15-25min得到木质素磺酸钙溶液；

所述混合液中乙二醇与水的质量比为1:4-6；

所述木质素磺酸钙与混合液的质量比为1:9-11。

所述反应，于木质素磺酸钙溶液中加入氯化石蜡、四乙基氢氧化铵得到反应液，在55-65℃进行下冷凝回流反应，全程氮气保护，反应时间5.5-6.5h，反应完成后自然冷却，用质量浓度10%的盐酸溶液调节pH至出现沉淀，沉淀完成后对沉淀进行过滤、洗涤、干燥，得到固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂；

所述反应液按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙溶液95-105份、氯化石蜡2.5-3.5份、四乙基氢氧化铵0.8-1.2份。

所述制备稳定剂，将葡萄糖、左旋糖苷、谷氨酸钠、氯化钾、水混合均匀，用质量浓度10%的氢氧化钠溶液调节至pH为7.3-7.6，然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度113-117℃，灭菌时间25-35min，得到稳定剂；

所述稳定剂按质量份计，包括以下组分：葡萄糖7-9份、左旋糖苷1.5-2.5份、谷氨酸钠0.8-1.2份、氯化钾0.8-1.2份、水85-95份。

所述制备复合菌，将固体木质素磺酸钙改性表面活性剂、稳定剂、聚乙二醇、酒石酸缓冲液、水、解淀粉芽胞杆菌干粉、地衣芽胞杆菌干粉混合，得到复合菌。

与现有技术相比，本发明取得以下有益效果：

本发明制备的复合菌对花椒的病害防治效果好，复合菌加水稀释至300倍，于花椒花期后，果期前和果期施用复合菌，6月10日喷洒于花椒植株根部土壤，稀释后的复合菌300倍液每亩用量10kg，同时喷施于叶面，稀释后的复合菌300倍液每亩用量15kg，之后每15天施用1次，总共施用4次，花椒流胶病发病率为2.38-2.41%，花椒锈病发病率3.21-3.33%，花椒煤烟病发病率2.85-2.98%；

本发明制备的复合菌有效微生物数量多，有效微生物含量为4.43-4.51*10

本发明制备的复合菌保质期长，有效微生物含量稳定，室温存放6个月，有效微生物含量为3.95-4.04*10

具体实施方式

实施例1

（1）制备木质素磺酸钙改性表面活性剂

a、溶解

将木质素磺酸钙溶解于乙二醇和水的混合液中，混合均匀后用质量分数10%的氢氧化钠溶液调节pH至9.5，在900r/min下搅拌20min得到木质素磺酸钙溶液；

所述混合液中乙二醇与水的质量比为1:5；

所述木质素磺酸钙与混合液的质量比为1:10；

b、反应

于木质素磺酸钙溶液中加入氯化石蜡、四乙基氢氧化铵得到反应液，在60℃进行下冷凝回流反应，全程氮气保护，反应时间6h，反应完成后自然冷却，用质量浓度10%的盐酸溶液调节pH至出现沉淀，沉淀完成后对沉淀进行过滤、洗涤、干燥，得到固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂，固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂配制成1%质量浓度水溶液，其表面张力为32.589 mN/m；

所述反应液按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙溶液100份、氯化石蜡3份、四乙基氢氧化铵1份。

（2）制备稳定剂

将葡萄糖、左旋糖苷、谷氨酸钠、氯化钾、水混合均匀，用质量浓度10%的氢氧化钠溶液调节至pH为7.5，然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度115℃，灭菌时间30min，得到稳定剂；

所述稳定剂按质量份计，包括以下组分：葡萄糖8份、左旋糖苷2份、谷氨酸钠1份、氯化钾1份、水90份。

（3）制备复合菌

复合菌按质量份计，包括以下组分，木质素磺酸钙改性表面活性剂2份、稳定剂1份、聚乙二醇1份、酒石酸缓冲液5份、水40份、解淀粉芽胞杆菌干粉6份、地衣芽胞杆菌干粉4份；

所述复合菌制备方法，将固体木质素磺酸钙改性表面活性剂、稳定剂、聚乙二醇、酒石酸缓冲液、水、解淀粉芽胞杆菌干粉、地衣芽胞杆菌干粉混合，得到复合菌；

所述酒石酸缓冲液浓度为0.5mol/L；

所述解淀粉芽胞杆菌干粉，将解淀粉芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为5.2*10

所述地衣芽胞杆菌干粉，将地衣芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为4.5*10

所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌种保藏编号为CICC23569，由市场购买所得；

所述地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis），菌种保藏号为CICC 21228，由市场购买所得。

实施例1制备的复合菌对花椒的病害防治效果好，复合菌加水稀释至300倍，于花椒花期后，果期前和果期施用复合菌，6月10日喷洒于花椒植株根部土壤，稀释后的复合菌300倍液每亩用量10kg，同时喷施于叶面，稀释后的复合菌300倍液每亩用量15kg，之后每15天施用1次，总共施用4次，花椒流胶病发病率为2.38%，花椒锈病发病率3.21%，花椒煤烟病发病率2.85%；

实施例1制备的复合菌有效微生物数量多，有效微生物含量为4.51*10

实施例1制备的复合菌保质期长，有效微生物含量稳定，室温存放6个月，有效微生物含量为4.04*10

实施例2

（1）制备木质素磺酸钙改性表面活性剂

a、溶解

将木质素磺酸钙溶解于乙二醇和水的混合液中，混合均匀后用质量分数10%的氢氧化钠溶液调节pH至9.4，在800r/min下搅拌25min得到木质素磺酸钙溶液；

所述混合液中乙二醇与水的质量比为1:4；

所述木质素磺酸钙与混合液的质量比为1:9；

b、反应

于木质素磺酸钙溶液中加入氯化石蜡、四乙基氢氧化铵得到反应液，在55℃进行下冷凝回流反应，全程氮气保护，反应时间6.5h，反应完成后自然冷却，用质量浓度10%的盐酸溶液调节pH至出现沉淀，沉淀完成后对沉淀进行过滤、洗涤、干燥，得到固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂，固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂配制成1%质量浓度水溶液，其表面张力为32.745 mN/m；

所述反应液按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙溶液95份、氯化石蜡2.5份、四乙基氢氧化铵0.8份。

（2）制备稳定剂

将葡萄糖、左旋糖苷、谷氨酸钠、氯化钾、水混合均匀，用质量浓度10%的氢氧化钠溶液调节至pH为7.3，然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度113℃，灭菌时间35min，得到稳定剂；

所述稳定剂按质量份计，包括以下组分：葡萄糖7份、左旋糖苷1.5份、谷氨酸钠0.8份、氯化钾0.8份、水85份。

（3）制备复合菌

复合菌按质量份计，包括以下组分，木质素磺酸钙改性表面活性剂1.8份、稳定剂0.8份、聚乙二醇0.8份、酒石酸缓冲液4.5份、水38份、解淀粉芽胞杆菌干粉5.5份、地衣芽胞杆菌干粉3.5份；

所述复合菌制备方法，将固体木质素磺酸钙改性表面活性剂、稳定剂、聚乙二醇、酒石酸缓冲液、水、解淀粉芽胞杆菌干粉、地衣芽胞杆菌干粉混合，得到复合菌；

所述酒石酸缓冲液浓度为0.4mol/L；

所述解淀粉芽胞杆菌干粉，将解淀粉芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为5.3*10

所述地衣芽胞杆菌干粉，将地衣芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为4.7*10

所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌种保藏编号为CICC23569，由市场购买所得；

所述地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis），菌种保藏号为CICC 21228，由市场购买所得。

实施例2制备的复合菌对花椒的病害防治效果好，复合菌加水稀释至300倍，于花椒花期后，果期前和果期施用复合菌，6月10日喷洒于花椒植株根部土壤，稀释后的复合菌300倍液每亩用量10kg，同时喷施于叶面，稀释后的复合菌300倍液每亩用量15kg，之后每15天施用1次，总共施用4次，花椒流胶病发病率为2.41%，花椒锈病发病率3.33%，花椒煤烟病发病率2.98%；

实施例2制备的复合菌有效微生物数量多，有效微生物含量为4.45*10

实施例2制备的复合菌保质期长，有效微生物含量稳定，室温存放6个月，有效微生物含量为3.96*10

实施例3

（1）制备木质素磺酸钙改性表面活性剂

a、溶解

将木质素磺酸钙溶解于乙二醇和水的混合液中，混合均匀后用质量分数10%的氢氧化钠溶液调节pH至9.6，在1000r/min下搅拌15min得到木质素磺酸钙溶液；

所述混合液中乙二醇与水的质量比为1:6；

所述木质素磺酸钙与混合液的质量比为1:11；

b、反应

于木质素磺酸钙溶液中加入氯化石蜡、四乙基氢氧化铵得到反应液，在65℃进行下冷凝回流反应，全程氮气保护，反应时间5.5h，反应完成后自然冷却，用质量浓度10%的盐酸溶液调节pH至出现沉淀，沉淀完成后对沉淀进行过滤、洗涤、干燥，得到固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂，固体粉末状态的木质素磺酸钙改性表面活性剂配制成1%质量浓度水溶液，其表面张力为32.883 mN/m；

所述反应液按质量份计，包括以下组分：木质素磺酸钙溶液105份、氯化石蜡3.5份、四乙基氢氧化铵1.2份。

（2）制备稳定剂

将葡萄糖、左旋糖苷、谷氨酸钠、氯化钾、水混合均匀，用质量浓度10%的氢氧化钠溶液调节至pH为7.5，然后高压蒸汽灭菌，灭菌温度115℃，灭菌时间30min，得到稳定剂；

所述稳定剂按质量份计，包括以下组分：葡萄糖9份、左旋糖苷2.5份、谷氨酸钠1.2份、氯化钾1.2份、水95份。

（3）制备复合菌

复合菌按质量份计，包括以下组分，木质素磺酸钙改性表面活性剂2.2份、稳定剂1.2份、聚乙二醇1.2份、酒石酸缓冲液5.5份、水42份、解淀粉芽胞杆菌干粉6.5份、地衣芽胞杆菌干粉4.5份；

所述复合菌制备方法，将固体木质素磺酸钙改性表面活性剂、稳定剂、聚乙二醇、酒石酸缓冲液、水、解淀粉芽胞杆菌干粉、地衣芽胞杆菌干粉混合，得到复合菌；

所述酒石酸缓冲液浓度为0.6mol/L；

所述解淀粉芽胞杆菌干粉，将解淀粉芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为5.1*10

所述地衣芽胞杆菌干粉，将地衣芽胞杆菌用常规方法培养并制成干粉，活菌数量为4.4*10

所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌种保藏编号为CICC23569，由市场购买所得；

所述地衣芽胞杆菌（Bacillus licheniformis），菌种保藏号为CICC 21228，由市场购买所得。

实施例3制备的复合菌对花椒的病害防治效果好，复合菌加水稀释至300倍，于花椒花期后，果期前和果期施用复合菌，6月10日喷洒于花椒植株根部土壤，稀释后的复合菌300倍液每亩用量10kg，同时喷施于叶面，稀释后的复合菌300倍液每亩用量15kg，之后每15天施用1次，总共施用4次，花椒流胶病发病率为2.39%，花椒锈病发病率3.27%，花椒煤烟病发病率2.89%；

实施例3制备的复合菌有效微生物数量多，有效微生物含量为4.43*10

实施例3制备的复合菌保质期长，有效微生物含量稳定，室温存放6个月，有效微生物含量为3.96*10