串联液相色谱-质谱法测定动物组织中81种兽药残留的方法及应用

摘要

串联液相色谱‑质谱法测定动物组织中81种兽药残留的方法及应用，它涉及食品检测技术领域，具体涉及对动物源食品中多兽药残留进行检测的方法及其应用。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案是：从动物组织中将81种兽药快速提取出来，然后通过选取合适的净化填料降低基质干扰；建立与优化81种药物的质谱参数，选取合适的质谱条件；确定流动相的组成及比例，尽可能在液相端将这81种兽药的分离度最大化，确定液相端条件后；根据选择离子监测模式（MRM）得出的数据建立动态离子监测（DMRM）方法，将检测灵敏度和色谱峰型达到最优。它能检测不同性质的兽药残留，特别是在干扰较多的情况下任然可以实现准确和快速的检测，实现样品通量稿、可以满足多种兽药残留筛查和定量的需求，也能大大提高检测的灵敏度。

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及对动物源食品中多兽药残留进行检测的方法及其应用。

背景技术

动物源性食品是畜牧业的主要产品，是人们饮食生活必不可少的重要部分，其所含成分与人体健康息息相关。随着动物生产的集约化、规模化，很多时候不得不使用兽药来预防和治疗疾病。兽药的不正确使用或者是停药期的缩短，会导致药物在畜产品中如肉、蛋、奶中的残留，进而影响食品质量安全，因此国家越来越重视畜产品的安全。这些年，各种先进技术已经被广泛应用于兽药残留的检测。但是，畜产品中兽药残留的检测存在以下几个难点：不同性质的兽药同时测定时较为复杂；畜产品的基质比较复杂，干扰比较多；兽药残留的检测越来越痕量化。因此，研究同时能检测多种兽药，并且能更好地去除基质效应的兽药检测方法是当务之急。

传统上兽药检测多采用分类检测的方式，每个方法的检测项目较少，导致检测周期长、样品通量低，无法满足多兽药残留筛查和定量的需要。目前，国内外关于四环素、磺胺、喹诺酮等多兽残同时检测方法的研究已有很多报道，同时也有许多问题，如检测项目数量有限、重现性差、灵敏度不高等。因此一次能检测多种兽药成为兽药检测的发展方向，样品前处理能同时满足多种兽药的检测，同时检测多种兽药成为兽药残留分析的发展方向。

中国专利CN201710236350.1公开了一种用于检测动物肌肉中兽药残留物的分析方法,它是基于低温冷冻破碎细胞的原理，LC-MS/MS技术的高选择性和高灵敏度特性，采用稀释手段最大限度消除基质效应，该方法有它的优势所在，但是它也存在一定的问题，特别是在检测类型、类目上的不足，不能满足当前的日常检索需求。

随着人们生活水平的日益提高，对于动物肉类的需求越来越高，因此对于动物肉类、组织类中药物残留的检测也要求越来越高。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷和不足，提供一种串联液相色谱-质谱法测定动物组织中81种兽药残留的方法及应用，它是运用液相色谱质谱联用建立一种检测动物源食品中多兽药残留的高通量检测方法，它能检测不同性质的兽药残留，特别是在干扰较多的情况下任然可以实现准确和快速的检测，实现样品通量稿、可以满足多种兽药残留筛查和定量的需求，也能大大提高检测的灵敏度。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案是：步骤1：从动物组织中将81种兽药快速提取出来，然后通过选取合适的净化填料降低基质干扰；步骤2：建立与优化81种药物的质谱参数，选取合适的质谱条件；确定流动相的组成及比例，尽可能在液相端将这81种兽药的分离度最大化，确定液相端条件后；步骤3：根据选择离子监测模式（MRM）得出的数据建立动态离子监测（DMRM）方法，将检测灵敏度和色谱峰型达到最优。

所述步骤2中质谱参数的选择与优化：利用软件Optimizer分别优化四环素族、喹诺酮类、β-受体激动剂等81种兽药的子离子以及其它质谱参数，分别建立正负离子模式采集方法。

所述色谱峰型达到最优的方法为：根据所选择的这81种兽药的性质，采用0.1%甲酸-乙腈、甲酸-水溶液以不同的比例作为流动相优化分离结果。分别选择0.1%甲酸乙腈与0.1%、0.2%、0.5%、1%甲酸水以1:1的比例作为流动相，优化得到水相甲酸比例。在此基础上调整有机相与水相的比例，分析所得数据中81种兽药残留的分离度建立流动相梯度洗脱程序。

所述数据建立动态离子的监测方法为：在离子监测模式下，频繁进行正负离子切换会导致质谱端进样口毛细管受损严重，选择正负离子分别采用上述优化结果采集数据，所获得的选择离子监测（MRM）数据分别建立动态离子监测（DMRM）方法，最后将正负离子动态监测参数合并成为最终检测方法。

所述步骤1中从动物组织中将81种兽药快速提取，选取动物组织混合81种待测药物作为样品基质，选用乙腈、2%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈、10%甲酸乙腈作为提取试剂，加入陶瓷均质子分别震荡提取，提取液经EMR固相萃取小柱，收集全部流出液，氮吹至干，加入初始流动相复溶后过滤上机测定。

本发明的首先，如何从动物组织中将81种兽药快速提取出来，然后通过选取合适的净化填料降低基质干扰。其次，建立与优化81种药物的质谱参数，选取合适的质谱条件。最后，选择如何确定流动相的组成及比例，尽可能在液相端将这81种兽药的分离度最大化，确定液相端条件后，根据选择离子监测模式（MRM）得出的数据建立动态离子监测（DMRM）方法，将检测灵敏度和色谱峰型达到最优。

采用上述技术方案后，本发明有益效果为：它能检测不同性质的兽药残留，特别是在干扰较多的情况下任然可以实现准确和快速的检测，实现样品通量稿、可以满足多种兽药残留筛查和定量的需求，也能大大提高检测的灵敏度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是具体实施方式中的附表1；

图2是具体实施方式中的附表2；

图3是具体实施方式中梯度设置参考图。

具体实施方式

参看图1-2所示，本具体实施方式采用的技术方案是：采用以下技术方案是：步骤1：从动物组织中将81种兽药快速提取出来，然后通过选取合适的净化填料降低基质干扰；步骤2：建立与优化81种药物的质谱参数，选取合适的质谱条件；确定流动相的组成及比例，尽可能在液相端将这81种兽药的分离度最大化，确定液相端条件后；步骤3：根据选择离子监测模式（MRM）得出的数据建立动态离子监测（DMRM）方法，将检测灵敏度和色谱峰型达到最优。

所述步骤2中质谱参数的选择与优化：利用软件Optimizer分别优化四环素族、喹诺酮类、β-受体激动剂等81种兽药的子离子以及其它质谱参数，分别建立正负离子模式采集方法。所述的质谱参数优化结果见附表1。

所述色谱峰型达到最优的方法为：根据所选择的这81种兽药的性质，采用0.1%甲酸-乙腈、甲酸-水溶液以不同的比例作为流动相优化分离结果。分别选择0.1%甲酸乙腈与0.1%、0.2%、0.5%、1%甲酸水以1:1的比例作为流动相，优化得到水相甲酸比例。在此基础上调整有机相与水相的比例，分析所得数据中81种兽药残留的分离度建立流动相梯度洗脱程序。

所述数据建立动态离子的监测方法为：在离子监测模式下，频繁进行正负离子切换会导致质谱端进样口毛细管受损严重，选择正负离子分别采用上述优化结果采集数据，所获得的选择离子监测（MRM）数据分别建立动态离子监测（DMRM）方法，最后将正负离子动态监测参数合并成为最终检测方法。81种兽药DMRM图 参数见附表2。

所述步骤1中从动物组织中将81种兽药快速提取，选取动物组织混合81种待测药物作为样品基质，选用乙腈、2%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈、10%甲酸乙腈作为提取试剂，加入陶瓷均质子分别震荡提取，提取液经EMR固相萃取小柱，收集全部流出液，氮吹至干，加入初始流动相复溶后过滤上机测定。

具体举例如下：称取猪肉样品2g，加入10mL5%甲酸乙腈溶液，加入陶瓷均质子，涡旋混合后震荡提取30min；离心，取上清液5mL过EMR固相萃取柱，收集所有流出液于玻璃试管中，40℃氮吹至近干，加入1mL初始流动相复溶，过0.22um有机滤膜。

色谱与质谱条件：色谱柱：ZORBAX SB-C18 3.5um，2.1*100mm；流速：0.2ml/min；流动相：A: 0.1%甲酸乙腈，B: 0.5%甲酸水，梯度设置参看图3。质谱条件：

电离模式：ESI

扫描方式：正/负离子扫描

检测方式：DMRM

鞘气温度：400℃

鞘气流量：12L/min

干燥气温度：210℃

干燥气流量：17L/min 雾化气压力：25 psi

毛细管电压：正离子：3500V 负离子：3000V

以上所述，仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其它修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。