一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法

摘要

本发明属于医药技术领域，提供了一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法。本发明的提取方法，包括以下步骤：将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，进行提取，得到醇提取物；将所述醇提取物、水和石油醚进行萃取，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。本发明提供的提取方法操作简单，所得恰玛古抗活性活性成分抗肿瘤活性高。进一步地，当乙醇水溶液的体积浓度为70～80％时，得到的醇提取物的抗肿瘤活性更高，进而进一步提高了恰玛古抗肿瘤活性成分的抗肿瘤活性。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法。

背景技术

恰玛古为十字花科芸苔属二年生草本植物，学名为芜菁(Brassica rapa L.)。随着对恰玛古的研究不断深入，不同类别的化学成分被分离获得，对其药理作用的认识也不断提升。恰玛古作为中国新疆常用的药食兼用植物，其含有以硫代葡萄糖苷、黄酮类、挥发油和多糖为主的多种活性成分，可发挥抗肿瘤、免疫调节、抗氧化和降血糖等多种生物活性。现有恰玛古中抗肿瘤活性成分分离提取比较困难，工艺复杂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法。本发明提供的提取方法操作简单，所得恰玛古抗活性活性成分的抗肿瘤活性高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法，包括以下步骤：

将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，进行提取，得到醇提取物；

将所述醇提取物、水和石油醚混合，进行萃取，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。

优选地，所述乙醇水溶液的体积浓度为70～80％。

优选地，所述恰玛古地下部分和乙醇水溶液的料液比为1g：(8～10)mL。

优选地，所述恰玛古地下部分的粒径≤40目。

优选地，所述提取包括依次进行浸提和超声提取；所述浸提的温度为50～60℃，所述浸提的时间为1～3h。

优选地，所述超声提取的温度为50～60℃，功率为280～320W，时间为10～30min。

优选地，所述提取的次数为3～5次。

优选地，所述水和石油醚的体积比为1：1。

优选地，所述萃取的次数为3～5次。

本发明提供了一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法，包括以下步骤：将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，进行提取，得到醇提取物；将所述醇提取物、水和石油醚混合，进行萃取，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。本发明提供的提取方法操作简单，所得恰玛古抗活性活性成分抗肿瘤活性高。

进一步地，当乙醇水溶液的体积浓度为70～80％时，得到的醇提取物的抗肿瘤活性更高，进而进一步提高了恰玛古抗肿瘤活性成分的抗肿瘤活性。

附图说明

图1为实施例1中恰玛古不同浓度醇提取物的抗肿瘤活性检测结果图；

图2为实施例2得到的恰玛古80％醇提取物、实施例2中得到的BREE-Pe、对比例1得到的BREE-Ea和对比例2得到的BREE-Ba的抗肿瘤活性检测结果图。

具体实施方式

本发明提供了一种恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法，包括以下步骤：

将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，进行提取，得到醇提取物；

将所述醇提取物、水和石油醚混合，进行萃取，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。

在本发明中，如无特殊说明，本发明所用原料均优选为市售产品。

将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，进行提取，得到醇提取物。

在本发明中，所述恰玛古地下部分是指：恰玛古的块状根茎。在本发明中，所述恰玛古地下部分的粒径优选≤40目。

在本发明中，所述乙醇水溶液的体积浓度优选为70～80％，进一步优选为80％。

在本发明中，所述恰玛古地下部分和乙醇水溶液的料液比优选为1g：(8～10)mL。

在本发明中，所述提取优选包括依次进行浸提和超声提取；所述浸提的温度优选为50～60℃；所述浸提的时间优选为1～3h，进一步优选为2h。在本发明中，所述超声提取的温度优选为50～60℃；所述超声提取的功率优选为280～320W，进一步优选为300W；所述超声提取的时间优选为10～30min，进一步优选为20min。

在本发明中，所述提取的次数优选为3～5次，在本发明的具体实施例中，所述提取的次数具体优选为3次。在本发明中，当所述提取的次数为3次时，所述提取的具体过程优选包括以下步骤：将恰玛古地下部分和乙醇水溶液混合，依次进行第一次浸提和第一次超声提取，将得到的第一次提取体系固液分离，得到第一次提取渣和第一次提取液；将所述第一次提取渣和乙醇水溶液混合，依次进行第二次浸提和第二次超声提取，将得到的第二次提取体系固液分离，得到第二次提取渣和第二次提取液；将所述第二次提取渣和乙醇水溶液混合，依次进行第三次浸提和第三次超声提取，将得到的第三次提取体系固液分离，得到第三次提取渣和第三次提取液；合并所述第一次提取液、第二次提取液和第三次提取液，作为提取液。

所述提取后，本发明优选还包括将得到的提取液旋蒸，将得到的粘稠物进行冷冻干燥，得到醇提取物。本发明对所述旋蒸的参数不做具体限定，只要能够将提取液旋蒸至无醇味即可。在本发明中，所述冷冻干燥的温度优选为-45～-50℃，时间优选为24～48h。

得到醇提取物后，本发明将所述醇提取物、水和石油醚混合，进行萃取，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。

在本发明中，所述水优选为去离子水。在本发明中，所述水和石油醚的体积比优选为1：1。在本发明中，所述萃取的方式优选为静置，所述静置的时间优选为30min。在本发明中，所述萃取的次数优选为3～5次。

在本发明中，当所述萃取的次数为3次时，3次萃取的具体过程优选包括以下步骤：将醇提取物、水和石油醚混合，进行第一次萃取，得到第一水相和第一石油醚相；将所述第一水相和石油醚混合，进行第二次萃取，得到第二水相和第二石油醚相；将所述第二水相和石油醚混合，进行第三次萃取，得到第三水相和第三石油醚相；合并所述第一石油醚相、第二石油醚相和第三石油醚相，作为石油醚相。

所述萃取后，本发明优选还包括将得到的石油醚相进行干燥，得到恰玛古抗肿瘤活性成分。在本发明中，所述干燥的方式优选为旋蒸；本发明对所述旋蒸的参数不做具体限定，只要能够完全除去石油醚即可。

下面结合实施例对本发明提供的恰玛古抗肿瘤活性成分的提取方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将恰玛古地下部分粉碎，过40目筛，收集筛下粉末，作为恰玛古地下部分粉末；分别以水、体积浓度为10％、30％、50％、70％、80％、90％的乙醇水溶液和无水乙醇作为提取溶剂，按照料液比1：10g/mL将提取溶剂和恰玛古地下部分粉末充分混匀后，放置在60℃水浴锅中，浸提2h后，于300W下超声处理20min；上述提取过程进行3次后，合并上清液，将上清液旋蒸浓缩至无乙醇味后，于-50℃冷冻干燥24h，得到恰玛古不同浓度醇提取物。

用MTT法检测各恰玛古不同浓度醇提取物对人肺癌细胞A549细胞的抑制活性。

恰玛古不同浓度醇提取物分别用二甲基亚砜(DMSO)配制成400μg/mL和800μg/mL两个浓度；然后用各恰玛古不同浓度醇提取物的两个浓度处理A549细胞24h，同时设置空白对照组(Control组)，阳性对照顺铂(Cisplatin)组，溶剂对照组(DMSO组)，检测其抗肿瘤活性，结果图1所示，数据采用单因素方差分析，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，处理组与Control组比较得出。图1中I为水，II为体积浓度为10％的乙醇水溶液获得的醇提取物，III为体积浓度为30％的乙醇水溶液获得的醇提取物，IV为体积浓度为50％的乙醇水溶液获得的醇提取物，V为体积浓度为70％的乙醇水溶液获得的醇提取物，VI为体积浓度为80％的乙醇水溶液获得的醇提取物，VII为体积浓度为90％的乙醇水溶液获得的醇提取物，VIII为无水乙醇获得的醇提取物。从图1可以看出：恰玛古80％乙醇提取物对A549细胞的抑制活性最佳。

实施例2

将恰玛古地下部分粉碎，过40目筛，收集筛下粉末，作为恰玛古地下部分粉末；以体积浓度为80％的乙醇水溶液为提取溶剂；将恰玛古地下部分粉末和提取溶剂按照料液比1：10g/mL充分混匀后，放置在60℃水浴锅中，浸提2h后，于300W下超声处理20min；上述提取过程进行3次后，合并上清液，将上清液旋蒸浓缩至无乙醇味后，于-50℃冷冻干燥24h后，得到恰玛古80％醇提取物(Brassica rapa L.ethanol extract，BREE)。

将10mL蒸馏水、10mL石油醚和1g恰玛古80％醇提取物混合后，进行第一次萃取，得到第一水相和第一石油醚相；将所述第一水相和石油醚混合，进行第二次萃取，得到第二水相和第二石油醚相；将第所述二水相和石油醚混合，进行第三次萃取，得到第三水相和第三石油醚相；合并所述第一石油醚相、第二石油醚相和第三石油醚相，作为石油醚相；将石油醚相旋蒸，得到恰玛古石油醚萃取部位(Brassica rapa L.ethanol extract-petroleumether，BREE-Pe)，作为恰玛古抗肿瘤活性成分。

对比例1

将等体积的乙酸乙酯加入到实施例2得到的第三水相中，进行萃取，静置30min，先从下面接水相，从上面倒出乙酸乙酯相；此过程重复3次。将萃取得到的乙酸乙酯相进行合并，旋蒸浓缩，风干，得到恰玛古乙酸乙酯萃取部位(Brassica rapa L.ethanol extract-ethyl acetate，BREE-Ea)。

对比例2

将等体积的水饱和正丁醇加入对比例1得到的水相中，进行萃取，静置30min，先从下面接水相，从上面倒出正丁醇相；此过程重复3次。将萃取得到的正丁醇相进行合并，旋蒸浓缩，风干，得到恰玛古水饱和正丁醇萃取部位(Brassica rapa L.ethanol extract-butyl alcohol，BREE-Ba)。

用二甲基亚砜(DMSO)将实施例2得到的恰玛古80％醇提取物、实施例2得到的恰玛古石油醚萃取部位、对比例1得到的恰玛古乙酸乙酯萃取部位和对比例2得到的恰玛古水饱和正丁醇萃取部位分别配制为浓度为300μg/mL和600μg/mL的两个浓度。然后用上述各溶液处理A549细胞24h，结果如图2所示；图2中数据采用单因素方差分析，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，处理组与Control组比较得出。从图2可以看出：BREE-Pe抑制A549细胞的活性最好，其次是BREE-Ea；说明：恰玛古80％乙醇提取物有效成分主要富集在石油醚萃取相。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。