一种高灵敏快速定量检测环境样品中新型氯霉素抗性基因的方法及其应用

摘要

本发明涉及环境和基因检测技术领域，尤其是涉及一种高灵敏快速定量检测环境样品中新型氯霉素抗性基因的方法及其应用。方法包含环境样品基因组DNA的提取；目的基因的特异性引物及其扩增；将目的基因片段与pEASY‑T1载体连接转化至感受态细胞中，挑选单克隆使用通用引物对M13F/M13R进行菌落PCR已验证阳性克隆；阳性克隆的PCR产物进行胶回收纯化后10倍梯度稀释构建Q‑PCR标准曲线；参照构建的标准曲线，对环境样品中新型氯霉素抗性基因进行定量检测。相比于现有技术，本发明只需要构建标准曲线，无需依赖数据库的完整性，可以大幅度缩短检测时间和成本，同时能对不可培养微生物以及不同环境中新型氯霉素抗性基因进行同步检测，提高了鉴别的准确度。