绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建

摘要

本发明的绵羊FGF5基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得FGF5和FGF5S基因慢病毒载体，生产重组病毒，感染293T细胞，验证重组蛋白的表达；其中扩增外显子1的引物；扩增5-RACE引物；扩增外显子3的引物；扩增3-RACE的引物；以外显子3测序结果设计3-RACE引物：其中以5-RACE和3-RACE测序结果设计扩增FGF5全长的引物：扩增FGF5的全长cDNA序列，测序确定FGF5和FGF5S的全长序列；克隆与测序：将绵羊FGF5基因的扩增产物进行回收纯化后，利用T4DNA连接酶将其与连接PMD-18T载体，转化E.coli DH5α；利用氨苄青霉素平板筛选，并以PCR法和限制性酶切法鉴定，阳性克隆测序由上海生物工程公司完成。